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《中国海洋大学》 2010年
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刺松藻(Codium fragile (Suringar) Hariot)多糖的提取分离、结构表征及其抗凝活性研究

嵇国利  
【摘要】: 本文以刺松藻(Codium fragile (Suringar) Hariot)为原料,经85%乙醇脱脂后采用室温水、90℃热水和70℃2%Na2CO3水溶液提取,分别得到了3种粗多糖CFC、CFH和CFA,其得率分别为7.0%,8.1%和0.9%。运用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)、高效离子色谱(HPIC)及傅里叶变换红外光谱(FTIR)等方法对其分子量、单糖组成和结构特征进行了分析。结果表明,CFC、CFH和CFA均含有不同含量的半乳糖(Gal)、阿拉伯糖(Arb)、葡萄糖(Glc)、甘露糖(Man)和木糖(Xyl),其摩尔比分别为3.65:2.71:1.00:0.85:0.55和1.10:1.01:1.00: 0.92:0.21及0.51:0.34:1.00:0.61:0.05。CFC硫酸化程度最高,CFH次之,CFA硫酸化程度最低,其硫酸基含量分别为23.4%,17.5%和9.7%。 在上述理化性质分析基础上,采用离子交换色谱分离技术,从CFC和CFH中纯化得到了组分CFCP1~P6和CFHP1~P5共11种多糖。对CFCP4和CFCP6进一步采用Sepharose 6B-FF柱层析纯化得到分子量均一的多糖组分。结果表明,CFCP4和CFCP6分子量分别为29 kD和56 kD,硫酸基含量分别为21.0%和32.4%,单糖组成分别以Gal和Ara为主。通过核磁共振波谱(NMR)和脱硫前后甲基化分析表明,CFCP4是硫酸半乳聚糖,以β1,3连接为主链(60%),β1,6链接为支链(40%);链内硫酸基位于C4位,分支末端硫酸基位于C6位;分支末端C3和C4位-OH与丙酮酸环化形成五元环。CFCP6是硫酸阿拉伯聚糖,以β1,3连接为主链,30%的阿拉伯糖在C2-OH处有分支,硫酸基位于阿拉伯糖的C4位和C2位,分子中含有少量半乳糖。 为了确定其细微结构,纯化的CFCP4和CFCP6分别经氢型强阳离子交换树脂和自由基降解获得寡糖混合物,再经BioGel-P4柱分离法,从中获得了14种寡糖,并通过电喷雾碰撞诱导串联质谱法(ESI-CID-MS/MS)对CFCP4中8种硫酸半乳寡糖和CFCP6中6种硫酸阿拉伯寡糖进行了序列分析,确定其结构序列分别是:Galp6Sβ1→6Galp、Galpβ1→6Galpβ1→3Galp4S、Galp6Sβ1→6Galpβ1→6Galpβ1→6Galp、Galp6Sβ1→3Galpβ1→3 Galpβ1→3Galpβ1→6Galp Galp6Sβ1→6Galp4Sβ1→6Galp、Galp6Sβ1→6Galpβ1→6Galp4Sβ1→6Galp Galp6Sβ1→6Galpβ1→6Galpβ1→6Galpβ1→6Galp4S、3,4PyrGalp6Sβ1→6Galp以及Arbpβ1→3Arbp4S、Arbp4Sβ1→3Arbpβ1→3Arbp、Arbp4Sβ1→3Arbp4S、Arbp4Sβ1→3Arbp2Sβ1→3)Arbp、Arbp4Sβ1→3Arbp2Sβ1→3Arbpβ1→3Arbp、Arbp4Sβ1→3Arbpβ1→3Arbp2Sβ1→3Arbpβ1→2Arbp。这些寡糖结构进一步证明CFCP4是β1,6-链接为支链的硫酸半乳聚糖,CFCP6是β1,3-链接为主链的硫酸化阿拉伯聚糖。这些结构特殊的寡糖不仅丰富了海洋寡糖库数据,也为进一步从事糖生物芯片研究,探讨其与蛋白之间的相互作用提供了基础。 在上述结构研究基础上,以APTT、TT、PT为评价指标,对三种粗多糖CFC、CFH和CFA以及三种纯化多糖CFCP1、CFCP4和CFCP6的抗凝血活性进行了评价。通过与肝素对照的结果揭示,CFC及其纯化组分CFCP1抗凝活性较强,而CFCP6的抗凝活性较弱,说明刺松藻多糖的抗凝活性除了与结构有关外,还与分子量有关,分子量越高,抗凝活性越强。CFCP1主要通过抑制内源性凝血途径和共同凝血途径起作用,而对外源性凝血途径影响较弱。该结果为开发海洋抗凝血药物提供了基础。
【学位授予单位】:中国海洋大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R284

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