收藏本站
《中国海洋大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

一种新型虫草生物学及其活性物质的研究

李蓉  
【摘要】: 本文对采集自长白山的一株虫草,从生物学研究,液体发酵与人工栽培,有效成分含量分析,多糖提取、分离纯化和活性等方面对新型虫草进行了研究。 (1)从长白山余脉大青沟风景区采集的得到一株新虫草,寄主为鳞翅目大蚕蛾科的柞蚕蛹。对该虫草进行无性型的分离鉴定及有性型与无性型的关系验证。通过菌株寄主回接的方法,证明新型虫草分离得到的菌株为新型虫草的无性型,完成了该虫草的生活史验证。该菌株的形态学特征,具有被毛孢属的特点,由分子生物学和形态学结果可知,新虫草无性型为半知菌门被毛孢属新种,命名为长白山被毛孢Hirsutella beakdumountain X.L.Jiang, sp.nov.。 (2)液体深层发酵产多糖条件中,对影响菌株Hirsutella beakdumountain X.L.Jiang, sp. nov.菌体生物量和胞外多糖产量的培养基和培养条件进行了优化,由单因素实验确定了该菌株。发酵产糖最佳的条件为:初始pH 5.0、发酵时间4d、装液量75mL/250mL。由单因素试验和正交试验确定了该菌株发酵产糖最佳的培养基组成为蔗糖25g,蛋白胨5g,磷酸二氢钾2.0g,硫酸镁0.5g。添加土豆200g,VB1一片。在最佳的培养基和培养条件下,该菌株生物量高达10.6g/L,胞外多糖产量为2.17g/L,表明通过培养基和培养条件的优化,该菌株生长速度和产糖能力得到进一步的提高。 同时优化了新型虫草人工培养子实体的培养条件。根据虫草子实体生长对营养条件的要求以及外界环境对其的影响,选择了光强度,大米与营养液的比例,蚕蛹粉的添加量和温度作为研究的四个因素。通过正交试验确定了该菌株的人工子实体培养条件为光照强度为1000 lx,大米与营养液的比例(g:mL)为30:45,添加蚕蛹粉30g,温度为15℃,经过45天获得成熟的子实体与原始样品一致。制定了新型虫草人工栽培工业化生产技术规范和产品质量标准。 (3)比较了不同有效成分在新型虫草菌丝体、子实体和野生冬虫夏草中的含量差异。野生冬虫夏草粗蛋白的含量为22.97%,显著性的低于新虫草菌丝体27.99%和新虫草子实体的31.89%。氨基酸的总量和必须氨基酸的含量为新虫草菌丝体新虫草子实体野生冬虫夏草。对于核苷来说,5种核苷在新虫草菌丝体中的含量为16.82mg/g显著性高于野生冬虫夏草的5.08mg/g和新虫草菌丝体的4.45mg/g。甘露醇在野生冬虫夏草、新虫草菌丝体和新虫草子实体中的含量分别为8.9%,11.5%和10.2%。 (4)新型虫草胞外多糖(EPS)的最佳提取工艺为发酵液浓缩至原体积的1/6,然后调pH7.0,加入3倍乙醇沉淀多糖;新型虫草胞内多糖(IPS)的最佳提取工艺为干菌体加30倍的水,100℃浸提150min,浸提2次。该提取工艺具有简单经济、重复性好的优点,可以批量制备虫草多糖。 IPS和EPS经Q-Sepharose FF阴离子交换柱层析和Sephacryl S-300HR凝胶柱层析分离得到主峰IPS和EPS。经Sephacryl S-300HR凝胶柱层析证明纯化后IPS和EPS均一性较好。IPS分子量为42kDa,含甘露糖、葡萄糖、半乳糖,摩尔比为2.8:3.0:1.0;糖醛酸含量为4.5%,有氨基糖存在;蛋白含量5.3%。EPS分子量为78kDa,含甘露糖、葡萄糖和半乳糖,摩尔比为4.5:8.0:1.0;糖醛酸含量为6.0%,有氨基糖存在;蛋白含量2.47%。 (5)考察从新型虫草分离得到的胞内多糖IPS和胞外多糖EPS对恶臭假单胞菌Pseudomonas putida、大肠杆菌Escherichia coli、副溶血性弧菌Vibrio parahaemolyticus、鳗弧菌Vibrio anguillarum、溶藻弧菌Vibrio alginolyticus、沙门氏菌Salmonella sp.、弗氏志贺氏菌Shigella flexneri、气单胞菌Aeromonas sp.、四联微球菌Micrococcus tetragenus、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、溶壁微球菌Micrococcus lysodeikticus、枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis等菌株的抑菌作用。在所测试的菌株中,胞外多糖EPS对革兰氏阳性菌的抑菌效果较好,特别是对枯草芽孢杆菌和四联微球菌的抑制作用最强,在胞外多糖浓度为50mg/mL时,抑菌圈分别为30.06mm和35.32mm。而胞内多糖IPS未见明显的抑菌效果。 同时考察了胞内多糖IPS和胞外多糖EPS体外抗氧化活性,通过清除羟基自由基、超氧阴离子自由基、过氧化氢和抗脂质过氧化等一系列体外实验进行测定,研究其抗氧化活性,并与阳性对照维生素C的抗氧化活性进行比较。实验结果表明:IPS和EPS都表现出了较强的清除过氧化氢和抗脂质过氧化的能力,并具有一定的清除超氧阴离子自由基和羟基自由基的能力。由ECso值可知,胞外多糖EPS的抗氧化能力高于胞内多糖IPS。 本论文为新型虫草的开发和应用奠定了一定的理论基础。
【学位授予单位】:

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 宋斌,李泰辉,吴兴亮,沈亚恒;滇黔桂虫草资源多样性初步研究[J];贵州科学;2004年04期
2 熊谱成;;虫草菌的识别与培养[J];今日科技;1991年01期
3 赵恒,屈新兰;虫草菌感染地老虎幼虫的研究[J];中国食用菌;2000年02期
4 吕昌仁;;开发“虫草”为民造福[J];湖北林业科技;1989年02期
5 冯丽,王学英,董文娟,李群,付田霞,石生林;虫草菌诱导柞蚕蛹产生抗菌物质的研究[J];安徽农业科学;2004年06期
6 翔实;动物蘑菇话虫草[J];科学中国人;1997年06期
7 杨跃雄,杨大荣,沈发荣,董大志;虫草菌感染虫草蝠蛾幼虫的研究[J];动物学研究;1989年03期
8 秦旭;;活蚕培育虫草新技术[J];农业知识;2002年22期
9 可文;几种有开发价值的虫草菌[J];农村天地;2003年07期
10 刘小莉;周剑忠;王英;李剑;黄开红;;虫草属真菌的ITS序列分析和系统发育研究[J];现代食品科技;2009年05期
11 马风琴;何桂芳;赵金萍;;虫草菌液体悬浮培养条件研究[J];现代农业科技;2010年22期
12 周玉麟,李国兰,秦利民;再论菌种商品市场导向的误区[J];食用菌;1999年06期
13 刘华文;张三元;万战国;;陇南山地虫草类型及其形态[J];食用菌;1986年06期
14 白木;虫草——云南各地名特优农副产品[J];云南农业;2003年08期
15 杜奎;;促进虫草菌子实体生长的初步研究[J];河北林业科技;2007年S1期
16 影儿;;如何识别冬虫夏草真伪[J];中国质量万里行;2009年04期
17 杨铁锤;;虫草菌荣获福建卫生科技奖[J];中国食用菌;1989年04期
18 李志生,王正荣,林慧星,关志德;虫草菌液体栽培工艺及技术要点[J];食用菌;2003年01期
19 翁梁;温鲁;陈蕾;高佳;孙娟;;五种虫草提取液体外抗氧化研究[J];淮阴师范学院学报(自然科学版);2009年02期
20 陈启武;陈士瑜;;草虫属真菌研究进展(综述)[J];湖北农学院学报;1985年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨大荣;;我国虫草资源的合理利用与保护[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第二卷)[C];1991年
2 王薇;王利丽;王青龙;李迪强;茆灿泉;;虫草ITS基因指纹及生信分析[A];首届中国蕈菌与健康高峰论坛论文集[C];2010年
3 韩玉梅;金莹;李安娜;丁爱云;;两株泰山蝉虫草菌的28S rDNA序列比对及其对黄粉虫的侵染性研究[A];第九届全国食用菌学术研讨会摘要集[C];2010年
4 李用芳;何方淑;李大卫;李景原;李金婷;;不同培养基培养虫草子座研究简报[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第四卷)[C];1996年
5 孙一晟;许勤勤;李永泉;;囊菌虫草的活性成分分析[A];2010年第四届全国微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2010年
6 黄罗冬;索菲娅;虞泓;代永东;龚健;;基于ITS和18S序列对新疆一种虫草的分类鉴定[A];2011年全国系统与进化植物学暨第十届青年学术研讨会论文集[C];2011年
7 杨跃雄;杨大荣;舒畅;李朝达;;虫草菌的聚丙烯酰胺蛋白质凝胶电泳研究[A];中国虫生真菌研究与应用[C];1991年
8 李春如;;近十年虫草无性型研究进展[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第五卷)[C];2003年
9 方焕谋;;虫草菌无性型确证方法的思考[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第二卷)[C];1991年
10 杨荣玲;刘学铭;;巴西虫草菌液体培养条件的优化及其营养成份分析[A];广东省食品学会第六次会员大会暨学术研讨会论文集[C];2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;平邑成功培育出蒙山虫草菌[N];山东科技报;2009年
2 何文;几种有开发价值的虫草菌[N];云南科技报;2002年
3 何文;几种有开发价值的虫草菌[N];中国特产报;2002年
4 常药师;虫草,非虫非草[N];医药经济报;2004年
5 郑亚平;虫草的种类[N];中国特产报;2000年
6 马宗文 张道桢;生物技术发展史上的里程碑[N];农民日报;2003年
7 沈仓;青海建成冬虫夏草菌丝(中华被毛孢)生产基地[N];科技日报;2006年
8 本报记者 张芙藻 杨旭;“星光生物科技”施工忙[N];铁岭日报;2008年
9 ;冬虫夏草引不得[N];山西科技报;2002年
10 ;人工种植冬虫夏草前景有多广[N];中国特产报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李蓉;一种新型虫草生物学及其活性物质的研究[D];中国海洋大学;2009年
2 陈自宏;兰坪虫草生物学研究[D];云南大学;2013年
3 赵永强;人工发酵虫草菌醇提取物CsB-851对实验性兔腹主动脉血栓形成的抑制作用[D];中国协和医科大学;1989年
4 田向荣;冬虫夏草无性繁殖研究及其产物对HepG2细胞凋亡的影响[D];中国农业大学;2013年
5 刘作易;虫草属及其无性型关系研究[D];华中农业大学;1999年
6 李春如;35种虫草及其无性型鉴定、活性筛选和细脚拟青霉提取物的抗抑郁作用及相关机制[D];安徽医科大学;2006年
7 杨艳红;重庆低海拔虫草种及其活性物质基础研究[D];重庆大学;2009年
8 陈璐;名贵中药冬虫夏草特征性蛋白质成分与鉴定方法研究[D];成都中医药大学;2011年
9 赵嘉平;树木溃疡病菌—葡萄座腔菌属及相关真菌系统分类研究[D];中国林业科学研究院;2007年
10 孙纳新;蛹虫草多糖降血糖的机理研究[D];山东师范大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵品苍;泰山虫草多基因分子系统学研究[D];曲阜师范大学;2012年
2 陈超;几种稀有虫草的分子系统学研究[D];安徽农业大学;2011年
3 仇飞;几种虫草类真菌多基因分子系统学研究[D];安徽农业大学;2012年
4 谢晶;虫草、灵芝多糖复合物的活性筛选和剂型研究[D];吉林大学;2010年
5 左登平;虫草有性型及其无性型关系的分子确证[D];安徽农业大学;2008年
6 傅佳;海参虫草复剂降血糖作用及其机制的研究[D];中国海洋大学;2010年
7 江波;虫草菌原生质体的制备及诱变[D];吉林大学;2004年
8 郑静;囊菌虫草菌的分离、鉴定及其发酵工艺研究[D];浙江大学;2005年
9 郭维;根癌农杆菌介导深红虫草菌株C033遗传转化的研究[D];江西农业大学;2013年
10 张军;虫草菌抗逆性及其对家蚕致病性的研究[D];中国农业大学;2003年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978