收藏本站
《中国海洋大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

哈维氏弧菌VHH溶血素对牙鲆组织细胞的侵染作用及诱导细胞凋亡作用研究

白方方  
【摘要】: 哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是一种革兰氏阴性、发光的海洋细菌。近年来,哈维氏弧菌已成为海水养殖动物(鱼、虾)的重要致病菌,其引起的弧菌病给海水养殖业造成了巨大的经济损失。目前,哈维氏弧菌的致病机理还不完全清楚。对哈维氏弧菌进行深入研究,对于我国水产养殖业的健康发展具有重要意义。 本文首先研究了哈维氏弧菌对牙鲆各组织的侵染作用。用哈维氏弧菌VIB645感染牙鲆后,发病牙鲆的肾、脾、肝、鳃、脑和肠道等组织都发生明显的病理变化;用荧光免疫组化法对哈维氏弧菌在牙鲆中的分布进行了组织定位,发现牙鲆的肝、脾、肾和脑等组织中哈维氏弧菌呈阳性反应;通过扫描电镜技术研究了哈维氏弧菌对牙鲆红细胞的作用,结果表明哈维氏弧菌作用4h后牙鲆红细胞出现棘状突起,作用8h后出现起皱现象,作用12h时细胞裂解。 哈维氏弧菌溶血素(Vibrio harveyi hemolysin,VHH)被认为是哈维氏弧菌对鱼类的重要致病因子,而活性位点突变的VHH溶血素(VHH突变蛋白)失去了溶血活力、磷脂酶活力和对鱼的致病性。本研究深入探讨了VHH溶血素对牙鲆红细胞和鳃细胞系FG-9307的作用。以VHH溶血素分别作用于牙鲆红细胞和鳃细胞,用台盼蓝染色法计算细胞存活率,发现牙鲆红细胞对VHH溶血素的敏感性远高于牙鲆鳃细胞。以VHH溶血素和VHH突变蛋白作用于牙鲆红细胞,电镜观察结果表明,经VHH溶血素作用后牙鲆红细胞表面首先发生棘皮化,随后细胞膜内陷,质膜破裂,最终细胞裂解,而VHH突变蛋白并不引起红细胞形态的明显变化。以VHH溶血素作用于牙鲆鳃细胞系,电镜观察结果表明牙鲆鳃细胞溶解严重,并形成凋亡小体;DAPI染色法进一步观察到受VHH溶血素侵染的牙鲆鳃细胞核体积变小,出现凋亡小体;细胞周期分析表明,VHH溶血素作用后的牙鲆鳃细胞的G]期比例及凋亡率增加;另外,VHH溶血素作用后牙鲆鳃细胞的原位末端缺口标记(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)的细胞阳性率增加,且半胱天冬氨酸酶-3(caspase-3)活力增加;这些结果表明,VHH溶血素通过caspases-3激活的细胞凋亡途径杀死牙鲆鳃细胞。通过免疫胶体金技术分析了VHH溶血素在牙鲆红细胞和鳃细胞中的分布,结果表明大量的VHH溶血素分布于细胞质膜及内膜系统上;而VHH突变蛋白在红细胞膜上也有少量分布。对腹腔注射VHH溶血素的牙鲆进行组织病理分析,结果表明受侵染的牙鲆肾、肝和肠道等有明显的组织病理变化,而VHH突变蛋白侵染的牙鲆无明显的组织病理变化;对VHH溶血素侵染的牙鲆各组织进行免疫组化分析显示,VHH溶血素主要分布在肠上皮细胞和鳃上皮细胞,说明肠道和鳃可能是哈维氏弧菌侵染牙鲆的重要部位。本研究深入探讨了哈维氏弧菌的致病机制,进一步阐明了TLH/VHH类溶血素的作用机理,对发展哈维氏弧菌的病害防治技术具有重要的指导意义。
【学位授予单位】:

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 刘国勇,毛芝娟,陈超然,陈昌福;不同方法灭活的哈维氏弧菌菌苗对异育银鲫的免疫原性比较[J];华中农业大学学报;2002年02期
2 覃映雪,池信才,苏永全,王德祥,陈信忠;网箱养殖青石斑鱼的溃疡病病原[J];水产学报;2004年03期
3 侯晓阳;孙铂光;刘吉文;孙婧;张晓华;;哈维氏弧菌VIB645毒性相关质粒的结构解析[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2011年09期
4 刘力铭;钱爱霞;鄢庆枇;覃映雪;;哈维氏弧菌TS-628菌株趋化性研究[J];渔业科学进展;2010年06期
5 郝贵杰;沈锦玉;曹铮;潘晓义;;抗哈维氏弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其特性鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2007年09期
6 覃映雪;苏永全;陈雅芳;王军;;哈维氏弧菌TS-628菌株胞外产物(ECP)蛋白酶活性的研究[J];海洋水产研究;2008年01期
7 刘湛军;梁海鹰;吴灶和;简纪常;;2种弧菌鞭毛蛋白的分离纯化与鉴定[J];吉首大学学报(自然科学版);2008年06期
8 姜敬哲;张微;王江勇;王瑞旋;刘广锋;;哈维氏弧菌感染的杂色鲍全组织均一化cDNA文库的构建[J];南方水产;2010年05期
9 周宸,陈月忠;对虾发光病病原菌的致病性及病理学观察[J];福建水产;2001年03期
10 徐晓津;徐斌;王军;苏永全;张之文;陈心;;哈维氏弧菌人工感染大黄鱼的组织病理学研究[J];厦门大学学报(自然科学版);2009年02期
11 陈月忠;黄万红;蔡清海;周宸;杨火盛;;闽南地区鲍溃烂病的研究[J];福建水产;2008年04期
12 潘晓艺,沈锦玉,尹文林,曹铮,马海其,常抗美;哈维氏弧菌黑鲷分离株BK-1培养条件优化研究[J];浙江海洋学院学报(自然科学版);2005年03期
13 张崇文;于涟;毛芝娟;褚武英;钱荣华;;哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK基因的克隆及原核表达[J];水产学报;2006年01期
14 陈月忠;黄万红;;应用噬菌体检测对虾发光病致病菌哈维氏弧菌的可行性研究[J];集美大学学报(自然科学版);2007年04期
15 郝贵杰;沈锦玉;徐洋;姚嘉赟;潘晓艺;尹文林;;大黄鱼病原哈维氏弧菌单克隆抗体的制备及其应用[J];水生生物学报;2009年03期
16 沈锦玉;潘晓艺;尹文林;郝贵杰;曹铮;;大黄鱼细菌性病原哈维氏弧菌培养特性的研究[J];生物技术通报;2009年S1期
17 张静;施慧;谢建军;许文军;;利用LAMP法快速检测致病性哈维氏弧菌[J];上海海洋大学学报;2010年05期
18 ;科技动态[J];中国水产;2007年10期
19 张凤萍;彭志兰;张健;柳敏海;傅荣兵;罗海忠;;鮸鱼弧菌病病原菌(哈维氏弧菌)的分离与鉴定[J];微生物学报;2010年03期
20 徐晓津;徐斌;王军;苏永全;张之文;陈心;;大黄鱼感染哈维氏弧菌后血液生化指标的变化及组织病理学观察[J];水产学报;2010年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 徐芝亮;吴灶和;简纪常;;哈维氏弧菌遗传多样性的研究[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
2 覃映雪;李海平;鄢庆枇;;理化因子对哈维氏弧菌生物被膜形成的影响[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
3 施慧;许文军;谢建军;查智辉;徐汉祥;史海东;;曼氏无针乌贼溃疡病病原菌哈维氏弧菌的分离与鉴定[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
4 陈雅芳;覃映雪;苏永全;王世锋;;哈维氏弧菌胞外产物的研究[A];中国海洋湖沼学会鱼类学分会、中国动物学会鱼类学分会2004年学术研讨会摘要汇编[C];2004年
5 徐敏;王静;薛斐;牟海津;;海洋细菌细胞脂肪酸组成的研究[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
6 覃映雪;苏永全;王德祥;鄢庆枇;;哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)TS-628菌株外膜蛋白、鞭毛蛋白及脂多糖的免疫原性研究[A];中国海洋湖沼学会鱼类学分会、中国动物学会鱼类学分会2004年学术研讨会摘要汇编[C];2004年
7 郝贵杰;沈锦玉;潘晓艺;尹文林;曹铮;;哈维氏弧菌GYC1108-1胞外蛋白酶的制备及免疫原性研究[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
8 张崇文;于涟;毛芝娟;;大黄鱼哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK基因的克隆与序列分析[A];浙江省免疫学会第五次学术研讨会论文汇编[C];2004年
9 操玉涛;吴灶和;简纪常;;环介导等温扩增法快速检测哈维氏弧菌的研究[A];2008年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2008年
10 耿玉静;王瑞旋;王江勇;冯涓;姜敬哲;;哈维氏弧菌耐药基因SulⅡ的克隆及原核表达[A];2009年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 本报记者 王威克;2008年水科院十大成果亮点[N];中国渔业报;2009年
2 乔家峰;水科院审议通过2007年度院科技进步奖[N];中国渔业报;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 白方方;哈维氏弧菌VHH溶血素对牙鲆组织细胞的侵染作用及诱导细胞凋亡作用研究[D];中国海洋大学;2010年
2 孙铂光;哈维氏弧菌VHH溶血素作用机理的研究[D];中国海洋大学;2009年
3 贾爱荣;大菱鲆4种免疫相关基因的克隆、表达分析及溶藻弧菌溶血素的研究[D];中国海洋大学;2010年
4 张崇文;哈维氏弧菌外膜蛋白(OmpK和GAPDH)免疫原性研究及主要海水病原弧菌外膜蛋白交叉保护性抗原筛选[D];浙江大学;2007年
5 刘瑞;副溶血弧菌丝氨酸蛋白酶及溶血素的表达、纯化、定点突变及弧菌多联DNA疫苗的研制[D];中国海洋大学;2011年
6 王欢;钩端螺旋体溶血素促炎反应及其信号通路和溶解吞噬泡膜介导免疫逃逸的研究[D];浙江大学;2012年
7 张卫卫;弧菌琼胶酶和丝氨酸蛋白酶的筛选、分析以及免疫应用[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2009年
8 张亚南;毛蚶(Scapharca Kagoshimensis)血红蛋白的类酚氧化酶活性及其cDNA克隆的研究[D];中国海洋大学;2009年
9 岳礼溪;解脂耶罗威亚酵母菌表面展示质粒的构建及应用的初步研究[D];中国海洋大学;2009年
10 盘赛昆;鳙鳃凝集素的分离纯化、理化性质及生物学活性研究[D];江南大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陶然;哈维氏弧菌硫氧还蛋白还原酶在大肠杆菌中的表达及对大菱鲆免疫保护作用[D];中国海洋大学;2011年
2 辛瑞晓;哈维氏弧菌超氧化物歧化酶的原核表达及免疫原性的研究[D];中国海洋大学;2011年
3 赵明君;海洋弧菌复苏促进因子家族糖蛋白酶的研究[D];中国海洋大学;2011年
4 姜荧安;荧光定量PCR检测哈维氏弧菌活的非可培养状态过程中的基因表达[D];中国海洋大学;2010年
5 刘力铭;哈维氏弧菌运动相关基因功能研究[D];集美大学;2010年
6 王晴;哈维氏弧菌外膜蛋白基因ompU的克隆表达、DNA疫苗构建及对大菱鲆免疫效果探究[D];中国海洋大学;2011年
7 何庆芳;哈维氏弧菌寡肽透性酶原核表达、突变株构建及其性质研究[D];中国海洋大学;2011年
8 张静;网箱鲈鱼内脏白点病病原鉴定及两种快速检测方法的建立[D];浙江海洋学院;2010年
9 颜显辉;大菱鲆病原菌的鉴定及哈维氏弧菌溶血素的克隆[D];中国海洋大学;2004年
10 苏杭;养殖凡纳滨对虾病原菌(哈维氏弧菌)的分离鉴定与防治[D];四川农业大学;2010年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978