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《中国海洋大学》 2010年
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对虾和刺参敏感免疫学指标的筛选和评价

常杰  
【摘要】:针对目前已报道的增强水产动物免疫功能的物质较多,但对免疫增强剂使用效果的评价尚无统一标准,需建立一套稳定的免疫增强剂的评价体系。本论文比较研究了不同作用途径的免疫增强剂(β-葡聚糖和甘草酸)、以及不同的作用方式(投喂免疫增强剂、攻毒和饥饿)对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)和刺参(Apostichopus japonicus Selenka)的非特异性免疫反应和抗病力的影响,分析了十余种目前在水产动物中反映免疫状态的常用指标,以期从中筛选出凡纳滨对虾和刺参的敏感免疫学指标,为建立相关免疫增强剂的评价体系提供科学依据。主要研究内容和结果如下: 1.通过实验筛选了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)对两种免疫增强剂β-葡聚糖(β-glucan)和甘草酸(glycyrrhizic acid)敏感的免疫学指标。设立了连续投喂实验组,隔天采样测定对虾的免疫指标,结果表明饲料中添加0.2%葡聚糖能显著提高酚氧化酶活力(Apo)、呼吸爆发活性(RB)、溶血活性(Hemolysin activity)、酸性磷酸酶(ACP)活性、碱性磷酸酶(AKP)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、一氧化氮合酶(NOS)活性和血清蛋白(Plasma protein)含量,出现显著升高的时间集中在投喂后3~9天然后保持较高水平(P0.05);饲料中添加0.06%甘草酸能显著提高血细胞密度(THC)、酚氧化酶活力(Apo)、呼吸爆发活性(RB)、碱性磷酸酶(AKP)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、一氧化氮合酶(NOS)活性、血清蛋白(Plasma protein)含量,出现显著升高的时间集中在投喂后7~16 d然后保持一定水平(P0.05)。 2.通过实验筛选了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)对溶藻弧菌(V. alginolyticus)感染敏感的免疫学指标。在投喂两种免疫增强剂18 d后连续采样,测定对虾的免疫指标。结果表明结果表明:饲料中添加0.2%葡聚糖、0.06%甘草酸18 d后可显著提高凡纳滨对虾弧菌攻毒后的成活率(P0.05)。感染弧菌后12~72 h内,总血细胞数(THC)、溶血活力(Hemolysin activity)、一氧化氮合酶(NOS)活性、酚氧化酶(PO)活性、呼吸爆发(RB)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、酸性磷酸酶(ACP)活性、碱性磷酸酶(AKP)活性和血清蛋白(Plasma protein)含量随弧菌感染和对虾死亡出现一定规律性的变化。相关性分析显示,成活率和THC、PO、SOD、NOS及AKP极显著相关(P0.01),可以用这几个指标较为直接的反应凡纳滨对虾抗溶藻弧菌感染的水平。 3.以体重12.13±1.61 g凡纳滨对虾为实验材料,分别用体外投喂、体内注射的方式感染白斑综合症病毒(WSSV),连续采样研究对虾免疫指标的动态变化。实验结果表明,和对照组相比感染病毒后总血细胞数(THC)、溶血活力、血清蛋白含量(Plasma protein)、酸性磷酸酶(ACP)、凝集活力均显著下降(P0.05);而超氧化物歧化酶(SOD)活力、一氧化氮合酶(NOS)活力具有相类似的趋势,略升高后下降;呼吸爆发(RB)活力、碱性磷酸酶(AKP)活性、酚氧化酶(PO)活力在24-48 h显著上升,濒死对虾的最高。通过和死亡率的相关性,筛选出在WSSV攻毒初期敏感的免疫学指标:SOD、NOS、RB、AKP、PO,这5个指标能较好反映对虾的免疫状态,可用来评价凡纳滨对虾的抗白斑病毒的能力。 4.饲料中添加0.2%β-葡聚糖和0.02%甘草酸对刺参各免疫指标变化的影响不同,在投喂两种免疫增强剂45 d期间连续采样,与对照组比较表明,β-葡聚糖和甘草酸在不同时间段提高了刺参体腔细胞的TCC, PC和ISAP,而且刺参体腔液中LSZ, ACP, AKP, SOD和NOS活性均显著提高(P0.05)。根据出现显著升高的时间集中且保持一定水平的原则,从中筛选出刺参对这两种免疫增强剂敏感的免疫学因子为PC, LSZ, SOD和NOS。 5.在饲料中分别添加0.2%β-葡聚糖和0.02%的甘草酸养殖刺参45 d后,人工感染灿烂弧菌(Vibrio splendidus),分别在第0、5、10和15 d检测刺参TCC,PC, ISAP, LSZ, ACP, AKP, SOD, NOS活性的变化,并记录刺参的累积发病率。感染灿烂弧菌后,除AKP活性在整个感染过程中没有出现显著性变化,刺参的各项免疫指标随感染时间的推移而发生改变,感染后第5 d各免疫指标开始下降,从第10 d开始恢复,至第15 d时几乎达到感染前的水平。结论表明:饲料中添加β-葡聚糖和甘草酸能通过改善刺参体腔液中免疫指标(TCC、PC、ISAP、LSZ、ACP、AKP、SOD和NOS)来增强刺参抵抗灿烂弧菌的能力。在本实验条件下,由刺参的免疫指标变化与感染后时间的回归分析可得,刺参体腔液LSZ和SOD活性、体腔细胞PC和TCC可以作为刺参对感染灿烂弧菌和投喂这两种免疫增强剂敏感的免疫指标。 6.在饲料中分别添加0.2%β-葡聚糖和0.02%的甘草酸养殖刺参29 d后,进行为期20 d饥饿实验,研究这两种免疫增强剂对饥饿刺参免疫力的影响。分别在饥饿第0、5、10、15和20 d检测刺参TCC, PC, ISAP, LSZ, ACP, AKP, SOD和NOS活性的变化。结果表明,投喂基础饲料、葡聚糖和甘草酸饲料刺参在饥饿期间体腔细胞总数均有不同程度的变化。对照饥饿组在短时间饥饿5 d过程中其细胞总数不但没有下降,反而有上升的趋势。而投喂葡聚糖和甘草酸刺参在整个饥饿期间虽随饥饿时间呈逐渐下降的趋势,但相对于对照饥饿组来说,其体腔液细胞总数在饥饿短期内下降的幅度要小。刺参在饥饿胁迫下,可引起其体腔细胞和体腔液酶活性的变化,而投喂免疫增强剂可在短期饥饿减缓其变化幅度。而在本实验条件下,由回归分析可得到,投喂三种饲料对饥饿刺参的免疫指标变化与饥饿时间关系密切,可用SOD, NOS和ACP活性来评价免疫增强剂在饥饿胁迫下刺参的敏感的免疫指标。
【学位授予单位】:中国海洋大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S917.4

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4 许钟;免发冻干刺参加工工艺[N];中国渔业报;2004年
5 荣成市海洋与渔业局 常忠岳;刺参养殖技术(10)[N];山东科技报;2003年
6 荣成市海洋与渔业局 常忠岳;刺参养殖技术[N];山东科技报;2003年
7 李金锋;陈淑玲;刺参的加工技术[N];中国海洋报;2004年
8 荣成市海洋与渔业局 常忠岳;刺参养殖技术(12)[N];山东科技报;2003年
9 杨威;刺参的形态和习性[N];中国海洋报;2002年
10 王连华;刺参健康养殖[N];中国渔业报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 常杰;对虾和刺参敏感免疫学指标的筛选和评价[D];中国海洋大学;2010年
2 刘广斌;刺参Apostichopus japonicus耐高温品系选育的基础研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2008年
3 汪婷婷;刺参三种免疫基因的克隆、表达及功能研究[D];大连理工大学;2012年
4 王青林;温度驯化对刺参(Apostichopus japonicus)生长及耐热性的影响及生理生态学机制[D];中国海洋大学;2012年
5 袁秀堂;刺参Apostichopus japonicus(Selenka)生理生态学及其生物修复作用的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
6 许乐乐;刺参(Apostichopus Japonicus)体腔细胞原代培养技术的建立及其在快速筛选免疫增强剂中的应用[D];中国海洋大学;2009年
7 盛卸晃;刺参多糖对神经细胞作用的研究[D];山东大学;2012年
8 李继业;养殖刺参免疫学特征与病害研究[D];中国海洋大学;2007年
9 包杰;环境因子对青刺参和红刺参(Apostichopus japonicus)代谢与生长及其机制的影响[D];中国海洋大学;2008年
10 安振华;温度及其周期性波动对刺参Apostichopus japonicus(Selenka)生长和能量收支的影响[D];中国海洋大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 宫魁;几种微生态制剂应用于刺参作用机理的初步研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2012年
2 朱玉强;海参活性多糖的研究[D];山东师范大学;2003年
3 赵永军;刺参的生物清除作用及贝参混养模式的建立[D];吉林农业大学;2002年
4 张春云;养殖刺参(Apostichopus japonicus)主要细菌性疾病的病原学研究[D];中国海洋大学;2004年
5 孙孝德;刺参(Apostichopus japonicus)微卫星标记的筛选及群体分析[D];上海海洋大学;2011年
6 于姗姗;刺参(Apostichopus japonicus)热休克蛋白基因克隆及其对温度、盐度胁迫的响应[D];中国海洋大学;2012年
7 周书珩;刺参育苗系统中敌害生物—玻璃海鞘(Ciona intestinalis)的防治[D];新疆农业大学;2008年
8 马海燕;刺参(Stichopus japonicus)烂皮病病灶组织显微观察及病原的初步研究[D];中国海洋大学;2007年
9 王开来;维生素C对刺参生长和非特异性免疫的影响[D];大连理工大学;2009年
10 王国利;生态因子对刺参(Apostichopus japonicus)生长与行为的影响[D];山东师范大学;2007年
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