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《中国海洋大学》 2010年
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单增李斯特菌鸡卵黄抗体的抑菌性能及其机理研究

隋建新  
【摘要】: 单增李斯特菌是水产食品中最为常见的致病菌之一,其生长的温度范围广,在4℃的普通冷藏条件下能够缓慢生长繁殖,在动物养殖及鲜活产品储运过程中往往难以有效控制其污染和安全危害。卵黄抗体(IgY)作为禽类蛋黄中存在的唯一一种免疫球蛋白,不仅能与其抗原菌特异性的结合,而且结合后还能够抑制抗原菌的生长,是一种潜在的食品微生物抑菌剂。 本研究以单增李斯特菌作为菌体抗原免疫蛋鸡制备IgY,并针对高纯度特异性IgY的制备纯化及其生物活性展开研究探讨,研究其对于水产品样本中单增李斯特菌的免疫亲和能力以及生长抑制效果,并对IgY的抑菌机理进行探讨,初步验证其应用于水产品加工储藏和分析检测的可行性,同时为水产品中其他致病菌和腐败菌的有效控制提供技术参考,论文的主要研究成果如下: 以单增李斯特菌为抗原免疫产蛋母鸡,比较不同方法对于鸡卵黄中单增李斯特菌IgY的分离效果,研究IgY在鸡蛋中产生的免疫应答过程,分析确定所得IgY的主要理化性质。结果表明,采用硫酸铵盐析法可以取得较好的提取纯化效果,提取液中的IgY效价高且蛋白组分较为单一,IgY具有较好的理化稳定性,在pH 3~9范围内的抗体活性能够保持在70%以上,经60℃、4 h处理后免疫活性仍然良好。 IgY对单增李斯特菌的生长有显著的抑制作用,在液体培养基中添加IgY,可有效抑制单增李斯特菌的生长,而且抗体浓度越大,抑菌效果越明显,培养基中添加200 mg/mL的IgY,37℃下孵育8小时,单增李斯特菌细胞数量减少90%,4℃下孵育120小时,单增李斯特菌细胞数量也可减少50%;固体培养基经200 mg/mL的1gY浸泡30分钟后,可使单增李斯特菌细胞数量减少80%以上;采用200 mg/mL的1gY处理过的新鲜三文鱼和烟熏三文鱼,真空包装后在6±1℃条件下储存15天,单增李斯特菌的细胞数量较空白对照可以降低两个对数单位,证实了1gY作为食品中致病菌抑制剂的可行性。 通过对单增李斯特菌菌体细胞的预处理,建立了两种免疫亲和纯化方法对特异性IgY进行分离纯化,并对纯化后抗体的性能进行了研究。结果表明,两种方法均成功对特异性IgY和非特异性IgY进行了有效分离;相同浓度的IgY,纯化后抗体效价较纯化前提高了大约4,倍;在以新鲜牛奶为样本的抑菌实验中,50mg/mL的纯化后IgY的抑菌性能要比纯化前200 mg/mL IgY的抑菌性能高,纯化后的抑菌效率较纯化前提高4倍以上。 对IgY的抑菌机理进行研究探讨,透射电镜观察发现,单增李斯特菌经200mg/mL IgY处理6小时后,菌体的细胞壁变薄,细胞的完整性被损坏,说明IgY通过对菌体细胞壁的破坏发挥抑菌性能;对IgY与单增李斯特菌相互作用后的反应液组分进行高效液相分离收集和核磁质谱结构分析,结果表明反应液中含有磷壁酸的结构组成单体,从分子水平上初步明确了IgY与菌体细胞的作用位点是细胞壁中的磷壁酸,为今后IgY抑菌效率的提高、IgY增效因子的研究以及各种增效因子的协同作用提供了理论支持。
【学位授予单位】:中国海洋大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:TS201.2

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【引证文献】
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1 胥亚夫;冷藏牙鲆中主要腐败菌卵黄抗体的制备及其抑菌性能研究[D];中国海洋大学;2011年
2 伊娜娜;不同毒力单增李斯特菌LIPI-1全序列分析及致病性差异研究[D];东北农业大学;2013年
3 党昕;多酚氧化酶卵黄抗体的制备及其抑制虾类黑变效果研究[D];中国海洋大学;2013年
【参考文献】
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4 常山,张雅萍,肖光夏;抗白色念珠菌IgY的稳定性与应用研究[J];第三军医大学学报;2001年12期
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1 张辉;单增李斯特菌ActA的表达、免疫原性及胶体金试纸研制[D];吉林大学;2008年
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1 王宇;抗奶牛乳腺炎特异性IgY的制备及活性研究[D];大连理工大学;2006年
2 郭洁;致奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌特异性卵黄抗体的制备及活性研究[D];大连理工大学;2007年
3 胡杨峰;食源性单核增生性李斯特氏菌分布及其内化素基因分布研究[D];河北农业大学;2009年
【共引文献】
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2 林思祖;曹光球;丁国昌;刘宝;;杉木叶片蛋白质提取方法的改良[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年17期
3 游玟娟;;紫外线诱变选育酸性α-淀粉酶高产菌株[J];安徽农学通报(上半月刊);2010年11期
4 段晨凯;刘树文;;自选酵母发酵性能的研究[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年23期
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9 李苗云;张秋会;柳艳霞;;冷却肉中微生物的多样性及其研究概况[J];安徽农业科学;2008年12期
10 孙新城;司艳红;张莉;王云龙;;抗烟草青枯病拮抗菌的筛选及抑菌活性研究[J];安徽农业科学;2008年14期
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1 王在贵;何瑞国;钱世钧;刘朝良;;特异腐质霉纤维素酶的酶谱分析[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
2 张新妙;马润宇;;用膜结晶技术制备蛋白质晶体的研究[A];第二届全国膜分离技术在食品工业中应用研讨会论文集[C];2006年
3 高娟;唐明森;王艳玲;蒋再学;竺薇;罗满林;;重组猪α干扰素发酵工艺的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
4 邓利玲;胡小芳;卢明玥;钟耕;;冷榨南瓜子饼蛋白粉酶法水解工艺及其产物性质研究[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
5 李彦臻;杨利国;;奶牛Y精子膜蛋白的提取与分析[A];第三届中国奶牛发展大会论文集[C];2008年
6 徐冬云;江仲文;;红曲霉谷氨酸脱羧酶的性质研究[A];2007年学术年会论文集[C];2007年
7 董建波;程建新;何健;卞佩佩;赵卫星;;三疣梭子蟹和脊尾白虾可控生态养殖技术探讨[A];中国南方十六省(市、区)水产学会渔业学术论坛第二十六次学术交流大会论文集(下册)[C];2010年
8 吴国辉;罗书全;段刚;王红;杨小伶;贾庆良;李坤碧;刘晓鹏;廖春燕;廖百森;;牛肉干加工过程中HACCP的研究[A];重庆市预防医学会2005年学术交流会论文集[C];2005年
9 单彩云;刘春燕;姜振峰;邱红梅;单大鹏;张大伟;胡国华;陈庆山;;温度对黑龙江大豆主栽品种球蛋白的影响[A];中国作物学会2007年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2007年
10 潘林萍;杨国龙;毕艳兰;马宇翔;;脂质中的蛋白质与多肽及其对脂质品质的影响[A];第十届中国科协年会论文集(三)[C];2008年
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1 张冬梅;牙龈卟啉单胞菌侵入血管内皮细胞后粘附分子表达及信号调控的研究[D];中国医科大学;2008年
2 彭莹;土星拟威尔酵母WC91-2菌株嗜杀因子和β-1,3-葡聚糖酶的研究[D];中国海洋大学;2010年
3 刘伟;怀头鲇Silurus soldatovi早期发育生理生态学研究[D];中国海洋大学;2010年
4 李彧娜;微孢根霉华根霉变种CICIM F0088生淀粉酶系的研究[D];江南大学;2010年
5 郭金玲;酵母全细胞不对称还原法合成光学纯α-羟基酸及其脱氢酶特性的研究[D];江南大学;2010年
6 徐军;富苯丙氨酸碱性短肽的发现及其对蛋白质等电点和免疫交叉反应的影响[D];华南理工大学;2010年
7 黄曼;电子束辐照在线杀虫/菌效果及对小麦品质影响的研究[D];华南理工大学;2010年
8 钊倩倩;青霉植酸酶phyA基因的克隆、表达及蛋白性质的改良[D];山东大学;2010年
9 莫章桦;产双酶恶臭假单胞菌的选育与酶法制备D-pHPG[D];中南林业科技大学;2007年
10 张艳萍;贻贝蛋白中ACE抑制肽的制备及其构效关系研究[D];浙江工商大学;2011年
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1 胡慧磊;产聚半乳糖醛酸酶菌株的筛选、发酵条件及酶学性质的研究[D];华中农业大学;2010年
2 罗晶晶;斑点叉尾鮰生鱼片加工过程中的微生物变化[D];华中农业大学;2010年
3 李浩丽;Bacillus pumilus CN8菌株高效降解猪血Hb酶的分离纯化与降解机制探讨[D];华中农业大学;2010年
4 杨砚;中度嗜盐菌新种Pontibacillus yanchengensis sp. nov.的鉴定与多相分类学研究[D];华中农业大学;2010年
5 荣保华;藕带多酚氧化酶性质及藕带保鲜初步研究[D];华中农业大学;2010年
6 袁怡;沼液作为生菜、柑橘叶面肥的试验研究[D];华中农业大学;2010年
7 宋庆平;水溶性壳聚糖衍生物的制备及其抗菌性能研究[D];安徽工程大学;2010年
8 洪伟;酪蛋白中血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的研究[D];安徽工程大学;2010年
9 陈晓平;家蚕30kD载脂蛋白19G1的表达和功能的初步研究[D];浙江理工大学;2010年
10 杨玉静;微生物絮凝剂产生菌的筛选[D];山东农业大学;2010年
【同被引文献】
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1 闵嗣璠;肖锡湘;;蜂胶及其在食品保鲜中的应用[J];安徽农业科学;2006年08期
2 程周祥,熊咏珍;食品中单核细胞增多性李斯特菌研究进展[J];安徽预防医学杂志;2000年02期
3 吴曙;王淑红;王艺磊;张子平;;软体动物和甲壳动物酚氧化酶的研究进展[J];动物学杂志;2009年05期
4 张爱萍;刘翔;李永才;胡爱平;;水产品储运过程中的防腐保鲜[J];包装与食品机械;2009年05期
5 方敏,沈月新;臭氧及其在水产品保鲜中的应用[J];水产科学;2003年04期
6 颜伟;吴燕燕;李来好;;酶制剂在水产品保鲜中的应用[J];水产科学;2006年12期
7 陈鲁萍;刘书来;毛泽明;丁玉庭;;不同抑制剂对凡纳滨对虾多酚氧化酶活性的影响[J];水产科学;2010年11期
8 朱晓东;陈大健;郭永刚;郝智慧;周颖斌;;卵黄抗体的提纯及应用[J];家禽科学;2007年03期
9 宋萌;孔保华;;Nisin复合防腐剂对冷却猪肉保质期及品质的影响[J];东北农业大学学报;2008年10期
10 佟海侠;陆春伟;王立维;王秋实;张继红;;Caspase-8在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用[J];中国当代儿科杂志;2010年11期
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1 郑世军;;肿瘤相关细胞凋亡受体(TRAIL)在急性李氏杆菌病中的作用[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会论文集[C];2005年
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1 江玲丽;单核细胞增多性李斯特菌的主要毒力基因分析及其重组菌构建与免疫原性[D];浙江大学;2006年
2 谭炳乾;单核细胞增多性李斯特菌PCR和PCR-ELISA检测方法的建立[D];华中农业大学;2008年
3 陈健舜;单核细胞增多性李斯特菌分子进化与酸应激功能基因组学研究[D];浙江大学;2010年
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1 刘瑾;产单核细胞李氏杆菌actA/plcB双缺失突变株的构建[D];南京农业大学;2011年
2 王宇;抗奶牛乳腺炎特异性IgY的制备及活性研究[D];大连理工大学;2006年
3 朱堂明;淡水水产品中单增李斯特菌双重PCR检测及基因分型[D];华中农业大学;2008年
4 张晓莉;单核细胞增生李斯特菌毒力基因actA转录调控机制的初步研究和缺失突变株的构建[D];华中师范大学;2009年
5 杨娟;卵黄免疫球蛋白的分离纯化研究[D];中国石油大学;2009年
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7 阎雪;食源性单核增生性李斯特氏菌LIPI-1基因分布和致病力研究[D];河北农业大学;2010年
8 苗晓莉;单核增生李斯特菌对于宿主抗病毒能力的影响[D];中国科学技术大学;2011年
【二级引证文献】
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1 孔令红;腐败希瓦氏菌噬菌体的性质和防腐应用研究[D];中国海洋大学;2012年
2 范延晶;基于中日韩自由贸易区构建的三国水产品贸易研究[D];中国海洋大学;2012年
【二级参考文献】
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3 张晓萍,黄浩龙,朱祖康,陈杰,赵茹茜;胆囊收缩素卵黄抗体在大鼠十二指肠的吸收[J];动物学报;2004年03期
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8 崔焕忠;张辉;赵权;;单核细胞增生性李斯特菌主要毒力因子及致病机理[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会2009年学术研讨会论文集[C];2009年
9 孔保华;刘柳;;香辛料提取物在培养基及冷却猪肉中对单核细胞增生性李斯特菌的抑制作用[A];2007年学术年会论文集[C];2007年
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2 王艳 记者 田锦凡;贵州检验检疫局[N];贵州政协报;2010年
3 刘铮;烟台局多措并举确保进口食品安全[N];中国国门时报;2009年
4 中国农业大学食品学院食品非热加工研究室 廖小军;高静压技术之安全篇[N];中国食品报;2009年
5 记者 梁晓 通讯员 高世博 卢祎舟;我市完成食源性致病菌监测检验[N];郑州日报;2011年
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3 田媛;抗单增李斯特菌单克隆抗体制备方法的研究[D];河北农业大学;2011年
4 徐金亭;免疫磁珠的制备及其富集、分离单增李斯特菌的研究[D];暨南大学;2011年
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6 路彦霞;茎环型引物—环介导等温扩增技术检测奶粉中单增李斯特菌的研究[D];河北农业大学;2012年
7 张引成;单增李斯特菌在鲜切结球莴苣中生长和抑菌预测模型的建立[D];南京农业大学;2012年
8 孙新生;超高压处理对低温火腿中单增李斯特菌钝化作用研究[D];南京农业大学;2012年
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10 苗晓莉;单核增生李斯特菌对于宿主抗病毒能力的影响[D];中国科学技术大学;2011年
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