收藏本站
《中国海洋大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

海洋拮抗菌JG1的分离鉴定、应用及热激蛋白DnaK的保护机制初探

金光  
【摘要】: 在海水鱼类养殖过程中,细菌性病害的频发是制约其发展的一个重要因素。有益菌和免疫刺激剂的应用为水产养殖的可持续发展提供了良好的解决办法。本研究的目的主要有,首先通过比较健康的和发病的大菱鲆养殖环境微生物区系,找出微生物区系和病害暴发之间的潜在关系,并从中筛选出具有有益菌潜力的菌株;其次,对于有优良潜力的菌株,进行有益菌应用方面的测试,如对致病菌是否有拮抗作用,是否对动物致病,是否能在肠道内定植等等,并对菌株进行分类鉴定。最后,建立基于PCR的快速检测方法,可用于跟踪检测有益菌的应用情况。另外,还以卤虫(Artemia franciscana)为对象,初步探讨了过量表达DnaK的大肠杆菌对于宿主在抵抗致病菌时的作用及其可能的作用机制,为免疫刺激剂的应用提供了理论基础。 本研究自2006年6月至2007年4月共采样6次,以其中一次鱼病暴发的样品为例对大菱鲆养殖环境的微生物区系进行了初步研究。本次采样中病鱼的症状主要是颌部破损,肝脏变色等症状。进一步测定池水的水质情况,并用平板涂布法计算了其池水和肠道内的总菌数、总活菌数、总异养菌数和总弧菌数。与健康组的比较的结果来看,两者水质因子都在正常范围内,但发病组水体和肠道的总异养菌数较低,而弧菌数则高出很多。应用PCR-RFLP对肠道微生物进行了聚类分析,其结论与平板涂布时一致,即健康组的菌种多样性比发病组的丰富。 有益菌在水产养殖中已有了良好的应用,因此,我们首先以哈维氏弧菌(Vibio harveyi) SF1为指示菌,对6次采样所分离的234株细菌进行了拮抗菌的筛选,得到了一株拮抗作用较强的菌株JG1。抑菌谱测定实验显示,JG1对多个种属的致病菌具有拮抗作用,包括弧菌属(Vibrio)、气单胞菌属(Aeromonas)和发光杆菌属(Photobacterium),尤其是弧菌属。其中对鳗弧菌VIB72、杀鲑气单胞菌ASl和嗜水气单胞菌AHK1、AHU1抑菌效果最强。随后对JG1进行了分类鉴定,JG1为革兰氏阴性杆菌、端生鞭毛并产金黄色色素,结合生理生化特征和16S rDNA序列分析,最终鉴定为金丽假交替单胞菌(Pseudoalteromonasflavipulchra)。JG1分离自健康大菱鲆的养殖水体,这是国内首次报道对某些病原菌有良好抑菌效果的金丽假交替单胞菌,并且有很好的有益菌应用潜力。接着以斑马鱼、扇贝、牡蛎和虾蛄为实验动物检验了JG1的致病性,结果显示JG1对上述动物无致病性。液体培养基对抗实验表明JG1能对坎贝氏弧菌(Vibrio campbellii) VC产生抑制作用。最后用卤虫无菌系统对JG1的体内定植能力进行了考察,从7天内卤虫体内JG1的密度来看,JG1在体内的定植能力较弱,可能更适合于直接添加到水体。另外,成功设计了P. flavipulchra的特异性引物JG153f和JG864r,建立了基于gyrB基因的PCR快速检测方法。 免疫刺激剂的使用是另一种广泛应用于水产养殖的病害防治方法。DnaK是热激蛋白(Hsp)的一种,具有鱼疫刺激剂的效果。本研究用卤虫无菌系统分别考察了无菌环境下、开放环境下以及大体积开放环境下,YS2(可诱导表达DnaK)对于卤虫对抗VC的作用,结果显示在三种环境下,YS2均可显著提高卤虫的成活率。我们还用PCR-DGGE的方法考察了抵抗实验期间,卤虫体内微生物区系的变化情况,DGGE图谱的比较分析显示,对抗期间卤虫体内的优势菌群没有明显变化,因此推测,DnaK的作用机制可能与卤虫体内微生物区系的变化之间无直接关系,而可能与宿主免疫系统的提高有关。
【学位授予单位】:中国海洋大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S917.1

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 宛立;王吉桥;杨世勇;王年斌;;健康养殖南美白对虾肠道细菌的抗菌活性[J];水产科学;2006年02期
2 李会荣,俞勇,李筠,陈刚,纪伟尚,徐怀恕;海洋有益菌的筛选与鉴定[J];高技术通讯;2001年09期
3 徐怀恕,R.R.Colwell;霍乱弧菌的越冬方式—活的非可培养状态及其检测方法[J];青岛海洋大学学报;1989年02期
4 许兵,徐怀恕;水生细菌几种计数方法的比较[J];青岛海洋大学学报;1992年03期
5 莫照兰,俞勇,王祥红,李会荣,纪伟尚,徐怀恕;细菌QJ2对对虾病原性哈维氏弧菌的拮抗作用[J];水产学报;2001年05期
6 席宇,朱大恒,刘红涛,韩绍印;假交替单胞菌及其胞外生物活性物质研究进展[J];微生物学通报;2005年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈曦;;6种模式生物热休克蛋白70家族的进化分析[J];安徽农业科学;2011年02期
2 刘泰麟;赵翔;李立新;;蛋白质的品质管理[J];安徽农业科学;2012年04期
3 ;SiO_2粉尘的毒性与活性氧[J];安徽预防医学杂志;2000年02期
4 常蕴华,徐存拴;生物的热休克反应研究进展[J];动物学杂志;2001年03期
5 李建平,张葆欣,王瑞元,叶春;热休克反应对急性运动大鼠心肌自由基代谢的影响[J];北京体育大学学报;2004年02期
6 王凤阳,张学林;热休克蛋白(Hsp72)与运动训练的研究进展[J];北京体育大学学报;2004年04期
7 孔垂辉;徐玉明;;HSP70和肝脏抗氧化能力[J];北京体育大学学报;2007年05期
8 高前进;王二利;王瑞元;;骨骼肌热休克蛋白变化研究进展[J];北京体育大学学报;2007年07期
9 李玉和;张丽丽;;古树树洞修补技术的探讨[J];北京园林;2010年02期
10 张祥盛,韩玉贞,李冰,张燕,吴淑华,张树华;热休克蛋白在子宫内膜中的表达与不明原因不育症子宫内膜组织学、血清抗精子抗体和性激素水平的相关性研究[J];滨州医学院学报;2002年02期
中国重要会议论文全文数据库 前9条
1 邢淑莲;周益林;段霞瑜;邹亚飞;;生物热激蛋白及真菌HSP70的研究进展[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
2 李兆群;张帅;王春义;雒珺瑜;吕丽敏;崔金杰;;棉铃虫热激蛋白基因的cDNA全长克隆与序列分析[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
3 周志刚;石鹏君;姚斌;何夙旭;苏永全;;海水鱼消化道菌群结构研究进展[A];饲用酶制剂开发与应用技术交流研讨会论文集[C];2010年
4 侯瑞贤;张兴国;毕喜红;郭素英;孙涌栋;苏承刚;;热激因子结合蛋白(HSBP)研究进展[A];重庆市园艺学会会员代表大会论文集[C];2005年
5 龚俊松;景亮;;谷氨酰胺——热休克反应诱导剂[A];第十五次长江流域麻醉学学术年会暨2010年中南六省麻醉学学术年会暨2010年湖北省麻醉学学术年会论文集[C];2010年
6 李俊峰;池振明;;铁载体高产菌株的选育及其培养条件的优化[A];山东微生物学会第六次会员代表大会暨2004年学术年会论文集(上)[C];2004年
7 吉爱玲;胡轶红;封青川;李效阳;卢爱玲;徐存拴;;大白鼠热休克反应中HSP70的表达动态分析[A];中国动物科学研究——中国动物学会第十四届会员代表大会及中国动物学会65周年年会论文集[C];1999年
8 徐建华;邱仞之;柳川;柯文棋;;高温、噪声、振动对热应激蛋白70 mRNA(HSP70 mRNA)基因表达影响的分子生物学研究[A];第四届全国人—机—环境系统工程学术会议论文集[C];1999年
9 李莹;王立新;李文博;袁翔;王甲慧;李影;;VBNC沙门氏菌突变体差异基因序列分析[A];中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会第十二届学术研讨会论文集[C];2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张静;家蚕热休克蛋白Bmhsp21.4基因的研究[D];浙江理工大学;2010年
2 郑碧;家蚕小热休克蛋白22.6的克隆表达与功能初步分析[D];浙江理工大学;2010年
3 周若南;甲基强的松龙上调缺血再灌注损伤脊髓热休克蛋白27表达的剂量研究[D];郑州大学;2010年
4 裴兰英;HSP_(70)与MDV肿瘤的发生发展相关性研究[D];山东农业大学;2010年
5 张竹圆;北方河口区石油降解菌的降解特性研究[D];中国海洋大学;2010年
6 娄昊;日本三角涡虫热休克蛋白70的基因克隆与表达分析[D];河南师范大学;2010年
7 杨帆;热休克蛋白90介导二氮嗪对抗心脏低温保存损伤的作用和机制研究[D];浙江大学;2011年
8 孙晶双;影响大豆胞囊线虫孵化及休眠相关因子研究[D];沈阳农业大学;2010年
9 肖顺崇;不同切肝量大鼠肝脏HSP70、GR表达的变化及对内环境的影响[D];广西医科大学;2011年
10 秦鑫;HSP70在感染性休克大鼠肾组织中的表达及氯胺酮的干预作用[D];山西医科大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 徐怀恕,R.R.Colwell;霍乱弧菌的越冬方式—活的非可培养状态及其检测方法[J];青岛海洋大学学报;1989年02期
2 莫照兰,俞勇,李会荣,李筠,纪伟尚,徐怀恕;弧菌拮抗菌的筛选[J];青岛海洋大学学报(自然科学版);2001年02期
3 郑国兴,沈亚林,李何;中国对虾病原菌(鳗弧菌)的研究[J];水产学报;1990年01期
4 郑忠辉,陈连兴,黄耀坚,陈品健,苏文金;厦门海区潮间带海洋动植物共附生微生物的抗菌活性[J];台湾海峡;1998年04期
5 曾润颖,赵晶;深海细菌的分子鉴定分类[J];微生物学通报;2002年06期
6 牟海津,刘志鸿;水产动物病原菌致病性胞外产物的研究进展[J];中国水产科学;2000年02期
7 王立平,张晓华,刘镁,段爱梅,宋晓玲,徐怀恕;中国对虾糠虾幼体病原菌(非01群霍乱弧菌)的研究[J];中国水产科学;1997年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 吕思晓;用卤虫喂养鲤鱼夏花应注意的几个问题[J];河北渔业;1996年05期
2 ;我国卤虫产业现状[J];水产养殖;2001年04期
3 姜国良,李立德,王翔宇,刘云,张广华;卤虫生物肥料对二种植物生长及叶绿素含量影响的研究[J];海洋科学;2002年11期
4 廖永岩,许芳琳;不同培养密度对卤虫生长的影响[J];海洋通报;2004年02期
5 邓灯,刘萍,孔杰;卤虫在WSSV病毒病传播中的媒介作用[J];海洋水产研究;2004年05期
6 钱翌,蔡小林,张强,杨承忠,范勇,喻梅辉,王国英,朱建雯,李新会,周立功,那思拉,姜明阳;新疆巴里坤盐湖卤虫(Artemia barkolica)的生态学研究[J];新疆农业大学学报;1994年02期
7 韩善德;提高卤虫产卵率的试验研究[J];苏盐科技;1997年02期
8 谢秋玲,张闰生,郭勇;关于卤虫种间竞争的探讨[J];生态学杂志;1998年05期
9 魏文志,黄旭雄,陈马康;育苗温室高密度养殖卤虫[J];渔业现代化;2000年02期
10 李信书,彭永兴;饵料对不同品系卤虫生长和生殖的影响[J];水产养殖;2004年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王晓丽;夏花;朱宏建;高必达;;朝鲜蓟上一种萎蔫病的病原分离与鉴定[A];粮食安全与植保科技创新[C];2009年
2 廖成水;程相朝;吴庭才;张春杰;李银聚;郁川;王晓利;胡阿勇;;河南省鸡源沙门氏菌新近流行株的分离鉴定及其耐药性分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
3 黄瑜;程龙飞;李文杨;苏敬良;庄向生;;鸭疱疹病毒Ⅱ型(暂定名)的分离鉴定[A];第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2001年
4 岳华;汤承;刘群;罗薇;刘内生;杨小农;龙虎;;“鸭传染性肿头症”病毒的分离及部分特性研究[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2002年
5 付少才;陈万荣;周珍辉;周育森;;猫泛白细胞减少症病毒的分离与鉴定[A];全国兽医外科学第13次学术研讨会、小动物医学第1次学术研讨会暨奶牛疾病第3次学术讨论会论文集[C];2006年
6 雷爱莹;彭敏;曾地刚;李咏梅;;高效净水沼泽红假单胞菌的分离和鉴定[A];广西水产研究所论文集(2001—2005)[C];2006年
7 金曙光;霍鲜鲜;乌仁塔娜;;半干青贮中优良乳酸菌的分离鉴定[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年
8 吴忆春;魏建忠;王桂军;李郁;;超强毒鸡传染性法氏囊病病毒安徽株的分离鉴定[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集(下)[C];2005年
9 周珍辉;陈万荣;付少才;周育森;向双云;曹授俊;;猫泛白细胞减少症病毒的诊断[A];京津冀畜牧兽医科技创新交流会暨新思想、新观点、新方法论坛论文集[C];2008年
10 李文兵;胡昌江;黄勤挽;谢秀琼;;盐炙益智仁中5-羟甲基糠醛的分离鉴定[A];中华中医药学会中药炮制分会2009年学术研讨会论文集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张晓明;“卤虫经济”带来的启示[N];西藏日报;2010年
2 杨平治;放大“卤虫”的世界[N];中国建材报;2003年
3 单晓鸾;卤虫的盐田培养技术[N];中国渔业报;2004年
4 ;青海省人民政府关于修改《青海省卤虫资源保护暂行办法》的决定[N];青海日报;2009年
5 胡维斌;卤虫大战何时休[N];工人日报;2000年
6 谢恩年;小卤虫推动山东海洋渔业经济巨轮[N];中国海洋报;2001年
7 王奎平 赵银桩 马继龙;聚焦艾比湖湿地卤虫[N];中国海洋报;2002年
8 吴松波;我国卤虫生产发展现状及建议[N];中国海洋报;2004年
9 徐鸿伟 梁娟;民工捞卤虫 可可西里遭破坏[N];中国商报;2000年
10 杨治邦;谁来帮助“艾比湖卤虫”[N];光明日报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 金光;海洋拮抗菌JG1的分离鉴定、应用及热激蛋白DnaK的保护机制初探[D];中国海洋大学;2010年
2 郑波;16产地中国卤虫形态学与生殖隔离研究[D];中国海洋大学;2004年
3 王燕;两株海洋病原菌的分离鉴定、致病机理研究及三株海洋新菌的分类鉴定[D];中国海洋大学;2010年
4 杨帆;卤虫BRCA1相关蛋白1(BAP1)的分子特征和功能研究[D];浙江大学;2010年
5 程霜;石榴皮萃取物抗氧化和降血脂作用与成分研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
6 焦凌霞;DnaK基因调控酸土脂环酸芽孢杆菌嗜酸耐热生理特性研究[D];西北农林科技大学;2012年
7 刘利;桑叶次生代谢产物研究[D];中国农业科学院;2005年
8 胡申才;具细胞毒活性海洋微生物的分离筛选及次级代谢物的研究[D];华中农业大学;2005年
9 吕本强;注射用双黄连粉针剂物质基础研究[D];第一军医大学;2007年
10 王(韦华);猪源乙型脑炎病毒SXBJ07株全长基因组克隆分析及ELISA检测方法的建立[D];西北农林科技大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 卢彦欣;狂犬病病毒街毒株BDRV的分离鉴定及全基因组序列测定[D];吉林大学;2007年
2 蔡秀磊;鸭疫里默氏杆菌耐药性与耐药基因研究[D];山东农业大学;2007年
3 白永平;绵羊肺炎支原体的分离鉴定与敏感药物试验的研究[D];四川农业大学;2007年
4 曹娟;生物表面活性剂产生菌的分离鉴定及其对环境污染物生物降解的促进作用[D];南京农业大学;2008年
5 郁宏伟;猪伪狂犬病毒的分离鉴定及检测方法的建立[D];河北农业大学;2005年
6 马清义;大熊猫消化道正常菌群的分离鉴定及药敏性研究[D];西北农林科技大学;2006年
7 杨胜祥;金叶子的化学成分研究[D];西北农林科技大学;2007年
8 董靖;无指盘臭蛙皮表金黄杆菌分离鉴定及其胞外蛋白酶研究[D];南京农业大学;2007年
9 严泽华;鸡传染性鼻炎三价灭活疫苗的研制[D];吉林大学;2007年
10 朱子洁;石家庄地区猪链球菌的分离鉴定及其快速检测方法的建立和应用[D];河北农业大学;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026