虾夷扇贝毒素（Yessotoxins, YTXs）毒性作用的初步研究
【摘要】：虾夷扇贝毒素(Yessotoxins, YTXs)是近年来在海产品质量监测方面颇受关注的一种聚醚类赤潮藻类毒素,它能在贝类体内累积进而对人类健康造成威胁。目前针对YTXs的毒性作用在国际上展开了很多相关的研究,但是尚未得出较为明确的结论。其毒性作用过程尚未完全清楚。
近两年来,在我国贝类样品中检测到YTXs存在,但是国内关于这种毒素的研究尚未见报道。
本论文主要是通过体内、体外实验对YTX在个体水平、组织水平和细胞水平的毒性作用进行研究,并对其作用的可能机制进行分析,·主要结果如下：
1.通过组织学和免疫学方法对YTX的神经毒性作用进行研究,发现YTX可以使雌性ICR小鼠小脑浦肯野细胞发生明显的组织学变化。S-100抗体的特异性免疫染色发现,YTX处理组小脑浦肯野细胞的S-100表达量增多,而S-100又是一种钙结合蛋白,因此YTX的作用可能与钙离子浓度相关。
2.对三株产YTXs的甲藻——网状原角藻(Protoceratium reticulatum, CCMP2776)、多边舌甲藻(Lingulodinium polyedrum,CCMP1931)以及具刺膝沟藻(Gonyaulax spinifera, CCMP409)产物进行LC-MS/MS分析,发现几种甲藻均产YTX、homo-YTX、45-OH-YTX,但是产毒能力不强,各藻种YTX产量低于已有报道。而P. reticulatum所产毒素物质最多,且其中homo-YTX产量最高,达到2.88pg·cell-1。
3.将YTX与人类的三种细胞系——肝细胞HL7702、肝癌细胞Bel7402及Hela细胞进行孵育,通过光学显微镜观察、Hoechst33342/PI双染色、DNA琼脂糖凝胶电泳等方法,同时对细胞内Caspase 3酶活力进行分析,发现YTX及藻毒粗提液能使三种细胞发生凋亡。另外,利用流式细胞术对细胞内线粒体膜电位及Ca2+浓度进行研究,发现YTX及藻毒粗提液可以造成线粒体膜电位下降和细胞内Ca2+浓度升高。
4.利用激光扫描共聚焦显微技术发现YTX及藻毒粗提液的加入瞬间,肝细胞HL7702、肝癌细胞Bel7402及Hela细胞内Ca2+浓度出现明显升高的现象,而用EGTA螯合掉缓冲液的Ca2+或者加入L-型钙离子通道阻断剂硝苯吡啶,都能抑制YTX对细胞内Ca2+浓度的影响。说明YTX主要作用细胞表面的L-型钙离子通道进而可以造成细胞外Ca2+内流。
【关键词】：虾夷扇贝毒素 毒性作用 细胞凋亡 线粒体膜电位 钙离子 【学位授予单位】：中国海洋大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：S917.4
【目录】：
- 摘要7-9
- Abstract9-11
- 目录11-13
- 1.文献综述13-41
- 1.1 赤潮藻类毒素简介13-17
- 1.2 赤潮藻类毒素的检测方法17-19
- 1.3 毒理学研究方法概述19-20
- 1.4 细胞毒性研究的技术与方法20-25
- 1.4.1 细胞存活率的测定21-22
- 1.4.2 细胞凋亡的检测22-25
- 1.5 虾夷扇贝毒素(Yessotoxins,YTXs)研究概况25-39
- 1.5.1 YTXs简介25
- 1.5.2 YTXs的生物来源及分布25-29
- 1.5.3 YTX及其衍生物的结构特征29-33
- 1.5.4 YTXs的毒性作用研究进展33-35
- 1.5.5 YTXs的检测及定量方法35-38
- 1.5.6 我国YTXs的研究现状38-39
- 1.6 本论文的研究目的与意义39-41
- 2.虾夷扇贝毒素标准物质YTX对小鼠小脑浦肯野细胞的影响41-49
- 2.1 材料和方法43-45
- 2.1.1 实验材料43
- 2.1.2 实验方法43-45
- 2.2 实验结果45-47
- 2.2.1 行为观察45
- 2.2.2 组织学染色结果45-47
- 2.2.3 S-100免疫组化染色结果47
- 2.3 分析讨论47-49
- 3.几种产YTXs甲藻的培养及产物分析49-62
- 3.1 材料和方法51-54
- 3.1.1 实验材料51
- 3.1.2 实验方法51-54
- 3.2 实验结果54-60
- 3.2.1 藻种生长曲线54-56
- 3.2.2 藻毒粗提液LC-MS/MS分析56-60
- 3.3 分析讨论60-62
- 4.虾夷扇贝毒素对体外培养肝细胞HL7702、肝癌细胞Be17402以及Hela细胞的凋亡诱导作用62-92
- 4.1 材料和方法65-69
- 4.1.1 实验材料65-66
- 4.1.2 实验方法66-69
- 4.2 实验结果69-88
- 4.2.1 虾夷扇贝毒素对肝细胞HL7702的凋亡诱导作用69-76
- 4.2.2 虾夷扇贝毒素对肝癌细胞Bel7402的凋亡诱导作用76-82
- 4.2.3 虾夷扇贝毒素对宫颈癌细胞Hela的凋亡诱导作用82-88
- 4.3 分析讨论88-92
- 5.虾夷扇贝毒素对体外培养肝细胞HL7702、肝癌细胞Bel7402以及Hela细胞胞内Ca~(2+)的影响92-111
- 5.1 材料与方法95-96
- 5.1.1 实验材料95
- 5.1.2 实验方法95-96
- 5.2 实验结果96-109
- 5.2.1 虾夷扇贝毒素对肝细胞HL7702细胞内钙离子浓度的影响96-100
- 5.2.2 虾夷扇贝毒素对肝癌细胞Bel7402细胞内钙离子浓度的影响100-105
- 5.2.3 虾夷扇贝毒素对Hela细胞内钙离子浓度的影响105-109
- 5.3 分析讨论109-111
- 6 总结111-116
- 参考文献116-127
- 攻读博士期间发表的文章127-128
- 致谢128
|
|
|
|
| 1 |
潘俊;李瑞香;李艳;孙萍;;秋季南黄海表层沉积物中甲藻孢囊分布[J];海洋科学进展;2010年01期 |
| 2 |
周名江,李钧,于仁诚,颜天,傅萌;赤潮藻毒素研究进展[J];中国海洋药物;1999年03期 |
| 3 |
赵文彬,林红玉,林祥天;5起贝类食物中毒的调查报告[J];江苏预防医学;1997年03期 |
| 4 |
高春蕾;刘仁沿;梁玉波;王宗灵;刘永健;庞敏;张芳;潘宁;许道艳;邵魁双;;虾夷扇贝毒素yessotoxins(YTXs),中国沿海贝类中首次发现的一组贝类生物毒素[J];海洋学报(中文版);2010年03期 |
| 5 |
卫玮,肖雯;藻毒素的类型、危害和防治[J];生物学通报;2004年08期 |
| 6 |
陈杰,刘宁,李春盛,潘国伟;赤潮藻类毒素的研究概况[J];中国公共卫生;2001年05期 |
| 7 |
陈杰,李春盛,曹雅明,刘宁,潘国伟;赤潮藻类毒素检测方法的研究概况[J];中华预防医学杂志;2001年02期 |
| 8 |
柳俊秀;何培民;;赤潮藻毒素种类与化学结构研究进展[J];中国医药生物技术;2009年02期 |
|
|
|
|
|
| 1 |
邹迎麟,朱明远,HALL Sherwood;两种亚历山大藻产毒过程和毒素特征研究[J];黄渤海海洋;2001年03期 |
| 2 |
丁德文,刘胜浩,刘晨临,林学政,边际,黄晓航;孢囊及其与赤潮爆发关系的研究进展[J];海洋科学进展;2005年01期 |
| 3 |
陈则玲,付云娜,巩宁;腹泻性贝毒及其高效液相色谱检测方法[J];海洋通报;2000年01期 |
| 4 |
傅云娜,陈则玲;腹泻性贝毒的高效液相色谱法测定条件改进及其运用[J];海洋通报;2003年01期 |
| 5 |
翁学传,张以恳,王从敏,张启龙;黄海冷水团的变化特征[J];海洋与湖沼;1988年04期 |
| 6 |
于仁诚,周名江;麻痹性贝毒研究进展[J];海洋与湖沼;1998年03期 |
| 7 |
周成旭,吴玉霖;甲藻赤潮及其毒素的产生机制及夜光藻氮代谢途径[J];海洋与湖沼;1999年04期 |
| 8 |
林元烧,曹文清,Sameer TERDALKAR,张茜,齐雨藻;厦门西港甲藻孢囊种类和数量分布特征[J];海洋与湖沼;2002年04期 |
| 9 |
王朝晖,MATSUOKA Kazumi,齐雨藻,吕颂辉;有毒亚历山大藻(Alexandrium spp.)和链状裸甲藻(Gymnodinium catenatum)孢囊在中国沿海的分布[J];海洋与湖沼;2003年04期 |
| 10 |
顾海峰,方琦,李瑞香,蓝东兆,朱明远;长江口甲藻孢囊的初步研究[J];海洋与湖沼;2004年05期 |
|
快捷付款方式
订购知网充值卡
订购热线
帮助中心