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《中国海洋大学》 2010年
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栉孔扇贝Cf-dmrt4-like基因的克隆、表达及功能分析

冯政夫  
【摘要】: 对动物性别决定和性腺发育相关基因的研究是发育生物学重要的研究内容之一,也是水产养殖业中性别人工控制的理论基础。Dmrt基因最早是在果蝇和线虫中发现,随后在从无脊椎动物到哺乳动物的多种物种中均可获得dmrt基因,该家族蛋白享有共同的DM保守结构域,并在一定程度上显示了功能的保守性。在脊椎动物中它们参与了诸如性别决定、性腺分化和发育以及个体发育、组织功能维持等生物学过程。 本文采用同源克隆技术,从栉孔扇贝精巢中克隆了dmrt基因家族中的Cf-dmrt4-like基因的全长cDNA及其2个拼接片段Cf-dmrt4a-like和Cf-dmrt4b-like,分析了它们的序列特征;利用半定量RT-PCR,相对定量qRT-PCR技术、整体和组织原位杂交方法,分析了该基因在栉孔扇贝胚胎发育、性腺发育和各组织中的时空表达特征和规律;进一步采用RNAi技术,通过体外注射Cf-dmrt4-like dsRNA到栉孔扇贝生长期性腺中,定量PCR检测了目的基因在体内的表达。 栉孔扇贝Cf-dmrt4-like基因的cDNA全长为2312 bp, ORF 1110 bp,编码369个氨基酸;其氨基酸序列具有DMRT蛋白特有的DM保守结构域,且在C端拥有DMRT4和DMRT5蛋白共有的DMA保守结构域,以及DMRT4和DMRT5蛋白特有的短保守序列(short motif 1)。序列比对和系统进化分析显示,Cf-DMRT4-LIKE蛋白与其它物种的DMRT4蛋白的相似性最高,且首先与DMRT4蛋白聚类,这一结果也说明了Cf-dmrt4-like基因在进化上的保守性。本实验还克隆获得了Cf-dmrt4a-like基因cDNA片段,长1638bp,编码143个氨基酸以及Cf-dmrt4b-like基因cDNA片段,长1641bp,编码104个氨基酸,初步分析其为Cf-dmrt4-like基因的拼接产物。 半定量RT-PCR, Cf-dmrt4-like mRNA在雌性成体组织的鳃、外套膜、肾、闭壳肌、性腺及雄性鳃和性腺中表达。荧光定量qRT-PCR分析结果显示,该基因在各发育期的雌雄两性性腺中均有表达,且成熟期精巢中的表达量与其余各期精巢中的表达量呈显著性差异,约是其它时期的20倍;然而各期卵巢以及增殖期与生长期精巢中的表达量未显示显著性差异,表明该基因参与了栉孔扇贝两性性腺的发育,尤其在成熟期精巢的发育中起重要的作用。原位杂交结果显示,Cf-dmrt4-like mRNA分布在各期卵巢的卵原细胞、卵母细胞的胞质和核中,其中成熟期卵巢各期生卵细胞中的阳性信号略强于增殖期和生长期;Cf-dmrt4-like mRNA也定位于各期精巢的精原、精母和精细胞中,成熟期各期生精细胞中的阳性信号更加明显;在性腺的体细胞中未见目的基因的表达。上述结果暗示Cf-dmrt4-like基因参与了生殖细胞的分化和功能维持。 胚胎和幼虫的半定量RT-PCR和荧光定量qRT-PCR结果证实,Cf-dmrt4-like基因在未受精卵、受精卵、卵裂期胚胎、各期幼虫中均有表达。未受精卵Cf-dmrt4-like基因的表达量显著高于各期胚胎的表达量,D形幼虫的表达量显著高于壳顶幼虫和附着前幼虫的表达量(p0.05)。原位杂交结果显示,Cf-dmrt4-like基因的蓝色阳性信号主要集中在未受精卵和早期胚胎的中间部位,随着发育的进行,信号相继集中在幼虫的外套膜和鳃处,暗示该基因参与栉孔扇贝鳃和外套膜组织的早期构建,进一步因其在成体的鳃和外套膜组织中也有表达,推测其在栉孔扇贝鳃和外套膜等组织的构建和功能维持中发挥一定的作用。 Cf-dmrt4-like RNA干扰及qRT-PCR结果显示,体外注射dsRNA可引起栉孔扇贝精巢中Cf-dmrt4-like基因的瞬时沉默,注射后48h时,目的基因在体内的表达量较对照组个体无显著性的差异;然而,72h时实验组表达量显著性的低于注射生理盐水的对照组。本实验我们初步建立了栉孔扇贝RNA干扰技术。由于时间的关系,相关的功能分析(如两性性腺中各期生殖细胞发育状况以及Cf-vtg的表达)尚在检测中。
【学位授予单位】:中国海洋大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S917.4

【引证文献】
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1 苏利娜;丁祝进;李鸿;周凤娟;王卫民;刘红;;团头鲂Dmrt4基因的克隆与表达分析[J];华中农业大学学报;2013年06期
2 刘晓玲;刘建国;王丹;张子炎;张志峰;;Foxl2基因在栉孔扇贝发育过程中的表达图式[J];中国水产科学;2013年01期
【参考文献】
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1 邓汪东,蒋学武,李建宏,赖亚曼,陈中献,黄天华;己烯雌酚致胚胎期睾丸引带形态结构发育异常的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年02期
2 杨凤影;张弼;;不同地理种群栉孔扇贝营养成分的比较分析[J];安徽农业科学;2009年09期
3 季代丽,李洁,刘先英,聂刘旺;黑斑蛙Dmrt4基因的克隆测序[J];安徽师范大学学报(自然科学版);2004年03期
4 陈德午;稻叶明彦;;软体动物的染色体和系统分类[J];动物学杂志;1985年04期
5 王宜艳,韩强,孙虎山;短蛸外套膜和足粘液细胞的类型及分布[J];动物学杂志;2005年04期
6 李新红,赵文阁,郭玉民,薛建华;中国林蛙性腺的发育及温度对其性别分化的影响[J];动物学研究;2001年05期
7 赵洋;余红仕;卢衡;姚凯;程汉华;周荣家;;鸡Z染色体上DMRT1基因的多重跨染色体剪接[J];动物学研究;2006年02期
8 姚波,周莉,桂建芳;斜带石斑鱼sox3基因cDNA的克隆及其时空表达特征分析[J];高技术通讯;2003年05期
9 杨丛海,王清印,孔杰,于佳,刘萍,王印庚;高温处理中国对虾受精卵对性比结构的影响[J];海洋科学;1993年04期
10 牛乐耕;;贝类的性变与繁殖[J];海洋世界;1998年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨富亿;;长白山林蛙蝌蚪对水环境Ca~(2+)的适应性[J];安徽农学通报;2007年12期
2 翁凡;郑小亮;刘哲;;哺乳动物卵母细胞去核方法的研究进展[J];安徽农学通报;2007年21期
3 翁凡;马国达;潘求真;;牛体外受精卵培养方法的研究[J];安徽农学通报;2008年11期
4 林峰,陈玉霞,高腾云,李德远,杨美功;采胚方法对波尔山羊胚胎移植效果的影响[J];安徽农业科学;2005年05期
5 喻堃;牛向丽;汪松虎;;RACE方法获得番茄蓝光受体基因Phototropin-2全长及其过量表达载体的构建[J];安徽农业科学;2006年22期
6 李鹏;孙振兴;;2种双壳贝类染色体的观察研究[J];安徽农业科学;2008年12期
7 肖苏生;张颖;张春发;;ETR1靶向RNA干扰重组体的构建及序列分析[J];安徽农业科学;2008年21期
8 孙振兴;;聚类分析在双壳贝类染色体研究中的应用[J];安徽农业科学;2008年26期
9 王春清;;中国林蛙雌性繁育技术研究进展与应用[J];安徽农业科学;2009年21期
10 李俊辉;邓伟明;;墨西哥湾扇贝生殖细胞发生和性腺发育研究[J];安徽农业科学;2010年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李荣芳;邬静;袁莉芸;文利新;袁慧;;氯丙嗪对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会论文集(下册)[C];2011年
2 王建国;钱松晋;周文忠;李喜和;;奶牛性控冻精应用研究[A];中国奶业协会年会论文集2008(上册)[C];2008年
3 胡高博;赵鑫;卞江涛;卢全晟;薛利;宋彦军;张居农;;西门塔尔牛与荷斯坦牛胚胎生产及移植效果的分析[A];中国奶业协会年会论文集2009(上册)[C];2009年
4 张勇;李煜;;影响奶牛性控冻精人工授精受胎率因素的研究[A];中国奶业协会年会论文集2009(上册)[C];2009年
5 李雪松;桑润滋;;家畜卵母细胞冷冻保存研究进展[A];河北省畜牧兽医学会2004年学术年会论文集[C];2004年
6 常林瑞;邱高峰;;鱼类、甲壳类性别控制的研究技术[A];动物学专辑——上海市动物学会1999年年会论文集[C];1999年
7 郑小东;张涛;黄水英;刘旭东;王清;杨红生;张福绥;;硬壳蛤的核型研究[A];中国海洋湖沼学会、中国动物学会贝类学分会第十二次学术讨论会论文集[C];2005年
8 尤仲杰;王一农;吕朝晖;;彩虹明樱蛤Moerella iridescens(Benson)生殖周期的初步研究[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学分会第四次代表大会暨第五次学术讨论会论文集[C];1991年
9 刘德经;谢开恩;;西施舌的繁殖生物学[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学分会第十次学术讨论会论文集[C];2001年
10 郑小东;张涛;黄水英;刘旭东;王清;杨红生;张福绥;;硬壳蛤的核型研究[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学分会第十一次学术讨论会论文集[C];2003年
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1 王立斌;应用胚胎工程技术快速扩繁天祝白牦牛的试验研究[D];甘肃农业大学;2009年
2 董晓丽;半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)线粒体基因组全序列和性别相关基因的克隆与表达分析[D];中国海洋大学;2010年
3 董秀萍;海参、扇贝和牡蛎的加工特性及其抗氧化活性肽的研究[D];江苏大学;2010年
4 段恒;补肾中药对卵细胞体外成熟的影响[D];成都中医药大学;2010年
5 孙永峰;神经营养因子4及其受体在母牛生殖系统中的表达与部分功能研究[D];吉林大学;2011年
6 张虹;雌核发育草鱼群体的建立及其主要生物学特性研究[D];湖南师范大学;2011年
7 赵高平;马体细胞核移植的研究[D];内蒙古农业大学;2011年
8 邬静;大鼠卵巢颗粒细胞体外生殖毒性评价替代模型的建立与应用[D];湖南农业大学;2011年
9 王晓敏;小麦与条锈菌互作过程中活性氧和防御基因的防御反应及抗病相关基因的鉴定与功能验证[D];西北农林科技大学;2010年
10 邹远超;匙吻鲟雌核发育诱导及其相关机制研究[D];华中农业大学;2011年
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1 甄艳红;牛颗粒细胞和Hela细胞转染pXAISI-EGFP后的凋亡与增殖变化及其调节机制研究[D];华中农业大学;2010年
2 徐常林;青年德州母驴卵泡发育动态学与超数排卵试验的研究[D];山东农业大学;2010年
3 曹祖兵;猪克隆胚胎生产技术及组蛋白乙酰化免疫荧光染色技术优化[D];安徽农业大学;2010年
4 查丽莎;孕酮受体基因、类固醇21—羟化酶基因多态性及其与绵羊产羔数关系[D];安徽农业大学;2010年
5 季彦林;马铃薯块茎糖苷生物碱积累的光诱导效应研究[D];甘肃农业大学;2010年
6 刘长水;不同温度对一年生鱼类贡氏假鳃鳉生长、发育、成熟及衰老的影响[D];中国海洋大学;2010年
7 杨林;中国蛤蜊和文蛤的繁殖生物学研究[D];中国海洋大学;2010年
8 蒲雪松;补饲几种矿物元素和维生素及外源生殖激素处理对多浪羊母羊繁殖性能影响的研究[D];新疆农业大学;2010年
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10 刘巧;油茶蛋白磷酸酶基因的全长cDNA克隆与序列分析[D];中南林业科技大学;2010年
【同被引文献】
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1 杨凤影;张弼;;不同地理种群栉孔扇贝营养成分的比较分析[J];安徽农业科学;2009年09期
2 姜波,王昭萍,于瑞海,王如才;多倍体贝类的繁殖生物学研究进展[J];海洋湖沼通报;2004年02期
3 曾聪;阎里清;高泽霞;曹小娟;钱雪桥;王卫民;;梁子湖、鄱阳湖和淤泥湖团头鲂的形态学比较[J];华中农业大学学报;2012年01期
4 彭巧玲,程子华,蒲友光,葛亚东,聂刘旺;赤子爱胜蚓5个Dmrt基因的序列分析[J];激光生物学报;2005年05期
5 廖承义,徐应馥,王远隆;栉孔扇贝的生殖周期[J];水产学报;1983年01期
6 夏伟;周莉;桂建芳;;真骨鱼类DMRT基因家族的连锁结构及其系统发生[J];水生生物学报;2009年02期
7 张小艳;孙立伟;查金苗;王子健;;稀有鮈鲫Dmrt基因家族13个成员的克隆与序列分析[J];生态毒理学报;2007年01期
8 曲中玉;陈子江;;FOXL2——不孕有关的转录因子[J];生殖与避孕;2006年01期
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1 董晓丽;半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)线粒体基因组全序列和性别相关基因的克隆与表达分析[D];中国海洋大学;2010年
【二级引证文献】
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1 王丹;栉孔扇贝(Chlamys farreri)三个性腺发育相关基因的克隆及表达分析[D];中国海洋大学;2013年
【二级参考文献】
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1 黄幸纾;环境内分泌干扰化学物与人类健康[J];癌变.畸变.突变;1999年06期
2 张玺,齐锺彦,李洁民;栉孔扇贝的繁殖和生长[J];动物学报;1956年02期
3 王琼,童裳亮;贻贝(Mytilus edulis)核型及染色体带型分析[J];动物学报;1994年03期
4 万瑞景,姜言伟,庄志猛;半滑舌鳎早期形态及发育特征[J];动物学报;2004年01期
5 黄晓,周荣家,程汉华,郭一清,余其兴;两种淡水鱼类的Sox基因(英文)[J];动物学报;1998年02期
6 俞豪祥;三角帆蚌外套膜及珍珠囊的组织学初步观察[J];动物学杂志;1985年01期
7 孙振兴;一种观察贝类染色体的制片法[J];动物学杂志;1991年04期
8 王宜艳,孙虎山,陶佃勇;皱纹盘鲍外套膜、鳃和足粘液细胞的类型与分布[J];动物学杂志;2004年03期
9 王宜艳,韩强,孙虎山;短蛸外套膜和足粘液细胞的类型及分布[J];动物学杂志;2005年04期
10 常重杰,周荣家,余其兴;PCR扩增泥鳅和大鳞副泥鳅SRY盒基因[J];动物学杂志;1998年01期
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1 孙建璋,林崇川,李定海,金杨德,周立波;南麂列岛栉孔扇贝Chlamys farreri养殖试验[J];浙江海洋学院学报(自然科学版);1997年04期
2 李明;专家为扇贝养殖持续发展开出处方[J];海洋信息;1999年09期
3 刘赤志;;栉孔扇贝在台山试养成功[J];水产科技;1994年02期
4 王俊,姜祖辉,陈瑞盛;栉孔扇贝生物沉积作用的研究[J];中国水产科学;2004年03期
5 李永宁;栉孔扇贝筏式采苗试验总结[J];中国水产;1959年05期
6 李克波,路宜华,李善春,申作保,孙松山;栉孔扇贝亲贝室外饲养试验[J];水产科技情报;1994年03期
7 陈清建,周友富;栉孔扇贝养殖技术[J];科学养鱼;1998年12期
8 孙虎山,李光友;栉孔扇贝血淋巴中ACP和AKP活性及其电镜细胞化学研究[J];中国水产科学;1999年04期
9 ;扇贝[J];农民科技培训;2002年12期
10 刘小林,常亚青,相建海,李富花,宋坚,丁君,董波,刘宪杰;栉孔扇贝不同种群杂交效果的初步研究 Ⅰ.中国种群与俄罗斯种群的杂交[J];海洋学报(中文版);2003年01期
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1 于宗赫;;海州湾深水区域两种养殖方式栉孔扇贝生长与免疫特征的比较[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
2 孙福新;王颖;吴志宏;;栉孔扇贝对铜的累积与排出特征研究[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
3 连姗姗;胡晓丽;张玲玲;包振民;;栉孔扇贝抗性选种相关生理指标的测定[A];中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编[C];2011年
4 邸炜鹏;王昭萍;于瑞海;张晨晨;;栉孔扇贝剥离卵的体外促熟研究[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
5 刘琳;邱丽梅;王玲玲;宋林生;;栉孔扇贝新型清道夫受体的克隆及免疫功能研究[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
6 任伟成;蔡玉勇;王崇明;;栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒基因组全序列的测定与分析[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
7 李莉;张国范;刘晓;郭希明;;栉孔扇贝夏季死亡相关标记研究[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学分会第八次会员代表大会暨第十三次全国贝类学术讨论会论文摘要集[C];2007年
8 王珊;包振民;胡晓丽;苏海林;贺艳;张月月;李艳;付晓腾;;基于454测序的栉孔扇贝(Chlamys farreri)基因和SNP筛查[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
9 齐占会;方建光;张继红;毛玉泽;蒋增杰;葛长字;;贝壳上污损生物的重量对栉孔扇贝生长和存活的影响[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
10 彭小明;刘晓;张国范;;~(60)Co-γ射线对栉孔扇贝存活、生长的辐射兴奋与抑制效应[A];贝类学会第七次会员代表大会暨第十一次学术讨论会摘要[C];2003年
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1 通讯员 陈悦 宏伟 宋辉 YMG记者 申吉忠;野生栉孔扇贝长岛再次现身[N];烟台日报;2010年
2 晓梅;栉孔扇贝杂交苗繁育及养殖技术通过验收[N];中国渔业报;2010年
3 任德建;引起栉孔扇贝死亡的是球形病毒[N];中国渔业报;2004年
4 李明;美洲帘蛤有望替代栉孔扇贝[N];中国海洋报;2002年
5 黄研;“海水增养殖区环境综合评价方法”项目正式启动[N];中国渔业报;2010年
6 王雪飞;扇贝提取物可防紫外线伤害[N];健康报;2007年
7 郑新城;养殖贝类大规模死亡原因及防治措施[N];中国渔业报;2007年
8 高虹;“五合一”构建“海底银行”[N];海南日报;2006年
9 高虹;耕海万顷也养海万年[N];海南日报;2006年
10 董金和;“十五”我国渔业科技攻关项目取得重大成果[N];中国渔业报;2007年
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1 张明亮;栉孔扇贝生理活动对近海碳循环的影响[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
2 程洁;栉孔扇贝(Chlamys farreri)大片段基因组文库的构建及应用分析[D];中国海洋大学;2010年
3 林听听;栉孔扇贝(Chlamys farreri)血细胞酶联免疫检测试剂盒的研制与应用[D];中国海洋大学;2011年
4 谈艳苗;栉孔扇贝(Chlamys farreri)组织凝集活性分析及一种C-型凝集素单克隆抗体的研制和特性研究[D];中国海洋大学;2013年
5 冯政夫;栉孔扇贝Cf-dmrt4-like基因的克隆、表达及功能分析[D];中国海洋大学;2010年
6 刘晓玲;栉孔扇贝Cf-foxl2基因的克隆、表达模式及功能初探[D];中国海洋大学;2012年
7 连姗姗;栉孔扇贝(Chlamys farreri)能量代谢与抗氧化胁迫能力评价指标体系的构建[D];中国海洋大学;2013年
8 马洪明;栉孔扇贝血细胞形态学研究和抗病功能基因的克隆[D];中国海洋大学;2004年
9 苏建国;栉孔扇贝两种模式识别受体基因的克隆与表达的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
10 付崇罗;栉孔扇贝(Chlamys farreri)大规模死亡病原—AVND病毒单克隆抗体的制备及检测技术研究[D];中国海洋大学;2004年
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1 王斌;γ-氨基丁酸对栉孔扇贝免疫防御的影响[D];鲁东大学;2012年
2 郭颖;栉孔扇贝脑啡肽及其受体介导的神经内分泌免疫调节[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2013年
3 田双梅;苯并[α]芘对栉孔扇贝生殖内分泌干扰机制的研究[D];中国海洋大学;2013年
4 邸炜鹏;氨海水与5-羟色胺对栉孔扇贝解剖卵体外促熟作用的研究[D];中国海洋大学;2010年
5 赵美丽;栉孔扇贝对石油烃蓄积及响应的初步研究[D];国家海洋局第一海洋研究所;2011年
6 秦贞奎;栉孔扇贝(Chlamys farreri)性别分化相关基因的筛选以及两个相关基因的表达分析[D];中国海洋大学;2011年
7 吴田田;栉孔扇贝(Chlamys farreri)甲腺原氨酸脱碘酶基因的克隆与功能的初步研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2012年
8 沈建平;栉孔扇贝三倍体的诱导及精子形态的研究[D];中国海洋大学;2013年
9 王丹;栉孔扇贝(Chlamys farreri)三个性腺发育相关基因的克隆及表达分析[D];中国海洋大学;2013年
10 张冬冬;因子胁迫对栉孔扇贝(Chlamys farreri)血细胞免疫响应的影响[D];中国海洋大学;2013年
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