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《中国海洋大学》 2011年
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栉孔扇贝(Chlamys Farreri)两个卵黄蛋白原转录本的发育表达图式

李昀  
【摘要】:卵黄蛋白原(vitellogenin,VTG)是卵黄蛋白(Vn)的前体,能够为发育中的胚胎和幼虫提供营养。对于卵生动物来说,卵黄物质的形成与积累是卵子发生过程中的重要事件。卵黄蛋白是卵黄物质的最主要成分,行使着重要的生物学功能,因此作为卵黄蛋白前体的卵黄蛋白原,具有很高的科研价值。卵黄蛋白原在脊椎动物、昆虫和甲壳动物中已经得到广泛而深入的研究,然而,这些研究仅限于成体特别是性腺发育周期中,对个体发育过程中卵黄蛋白原的特征报道甚少。本研究选取我国重要的水产经济物种——栉孔扇贝(Chlamys farreri)为研究对象,采用cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术获得了栉孔扇贝卵黄蛋白原基因的一个小转录本的cDNA序列(命名为Cf-vtg2),对其序列特征进行了分析。进一步利用Real-Time PCR和原位杂交技术分析并比较了Cf-vtg2与已获得的栉孔扇贝卵巢Cf-vtg1转录本的个体发育表达图式以及表达差异。另外,利用组织学切片技术对栉孔扇贝的性腺分化进行了观察。本实验克隆得到的Cf-vtg2转录本的cDNA序列长1719 bp,编码564个氨基酸残基。Cf-VTG2与Cf-VTG1的N末端序列几乎完全一致,相似性达99%以上。RT-PCR分析显示,Cf-vtg1 mRNA仅在卵巢中表达,在肝胰腺中表达Cf-vtg2小转录本。Real-Time PCR和原位杂交结果均显示,Cf-vtg (包括Cf-vtg1和Cf-vtg2)在栉孔扇贝的未受精卵、受精卵至D形幼虫中均有表达,说明其母源性的表达特点。其中受精卵时表达量最高,受精之后表达量逐渐下降,至D形幼虫表达量最低,壳顶幼虫未能检测到目的基因的表达。当个体发育至壳高为7 mm的幼贝时,Cf-vtg2首先在肝胰腺中检测出,并且雌雄肝胰腺中的表达量没有显著性差异。原位杂交结果显示Cf-vtg的阳性信号在未受精卵、受精卵至担轮幼虫期呈均匀分布,D形幼虫时信号开始集中于内脏团处,壳顶幼虫时信号消失。在精卵巢分化前后,信号出现在肝胰腺实质细胞中,当个体进入第一次性腺发育周期时,信号则特异性的定位于卵巢的滤泡细胞中。在发育中的精巢中没有检测到目的基因的表达。
【学位授予单位】:中国海洋大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S917.4

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【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 刘晓玲;栉孔扇贝Cf-foxl2基因的克隆、表达模式及功能初探[D];中国海洋大学;2012年
【参考文献】
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【共引文献】
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【同被引文献】
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1 李昀;栉孔扇贝(Chlamys Farreri)两个卵黄蛋白原转录本的发育表达图式[D];中国海洋大学;2011年
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4 吴田田;栉孔扇贝(Chlamys farreri)甲腺原氨酸脱碘酶基因的克隆与功能的初步研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2012年
5 邸炜鹏;氨海水与5-羟色胺对栉孔扇贝解剖卵体外促熟作用的研究[D];中国海洋大学;2010年
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7 张晨晨;低渗诱导栉孔扇贝三倍体及与其它方法的比较[D];中国海洋大学;2010年
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