收藏本站
《中国海洋大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

东海原甲藻增殖细胞核抗原的体外表达和抗体制备

王国善  
【摘要】:本研究针对东海原甲藻(Prorocentrum donghaiense)和中肋骨条藻(Skeletonema costatum)这两种东海常见赤潮藻,研究了其增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen, PCNA)的体外表达和抗体制备方法,为建立赤潮藻快速、高效、特异的免疫学检测方法奠定了基础。 我们首先依据东海原甲藻和中肋骨条藻PCNA基因的测序结果,利用DNAStar搜索开放阅读框(Open Reading Frame, ORF)并翻译成氨基酸序列;对东海原甲藻和中肋骨条藻PCNA的氨基酸序列进行比对,选择特异性高的区域作为目标区,将两者的氨基酸序列按照最优密码子原则转译为基因序列;然后对东海原甲藻和中肋骨条藻PCNA基因序列片段进行基因合成。利用基因工程技术,将合成的PCNA基因连接到PUC57质粒载体上,转化DH5α大肠杆菌菌株进行基因克隆;通过筛选培养后DH5α菌株,获得有目的基因插入的质粒;运用双酶切技术将含有目的基因的片段插入到pGEX-6P-1载体上转化BL21菌株;筛选含有目的基因的单克隆菌株并进行培养后,加入异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因表达;利用超声波破碎经诱导表达的菌体,按照谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和层析纯化蛋白质的方法,过柱纯化目的蛋白;用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法检测获得的目的蛋白。检测结果证明,本实验成功运用基因工程技术在国际上首次获得了在体外表达的东海原甲藻和中肋骨条藻的PCNA,并且其纯度大于85%,达到作为抗原免疫的要求。 在以上工作基础上,以东海原甲藻为对象,进一步开展了其抗体制备技术的研究。我们将东海原甲藻PCNA蛋白片段与弗氏佐剂充分乳化后免疫小鼠;经过4次常规免疫和4次强化免疫后,取被免疫小鼠尾部血清,进行间接酶联免疫反应(iELISA)检测。检测结果显示,本实验成功获得了以东海原甲藻PCNA为抗原的多克隆抗体,且其效价大于80000,能够用于制备单克隆抗体。
【学位授予单位】:中国海洋大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:Q946

手机知网App
【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 王曲圆;增殖细胞核抗原基因作为东海原甲藻生长指标的现场实验研究[D];中国海洋大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 安鑫龙;齐遵利;李雪梅;张秀文;;河北省沿海赤潮研究20年[J];安徽农业科学;2008年31期
2 夏平;陆斗定;朱德弟;杜伟;;浙江近岸海域赤潮发生的趋势与特点[J];海洋学研究;2007年02期
3 周名江;朱明远;;“我国近海有害赤潮发生的生态学、海洋学机制及预测防治”研究进展[J];地球科学进展;2006年07期
4 陈炳章,王宗灵,朱明远,李瑞香;温度、盐度对具齿原甲藻生长的影响及其与中肋骨条藻的比较[J];海洋科学进展;2005年01期
5 么强;李志霞;李雪梅;安鑫龙;;河北省沿海赤潮生物概述[J];河北渔业;2010年06期
6 孙百晔;梁生康;王长友;王晓波;王修林;李雁宾;;光照与东海近海中肋骨条藻(Skeletonema costatum)赤潮发生季节的关系[J];环境科学;2008年07期
7 陆斗定;FIVE RED TIDE SPECIES IN GENUS PROROCENTRUM INCLUDING THE DESCRIPTION OF PROROCENTRUM DONGHAIENSE LU SP. NOV.FROM THE EAST CHINA SEA[J];Chinese Journal of Oceanology and Limnology;2001年04期
8 黄长江,董巧香;1998年春季珠江口海域大规模赤潮原因生物的形态分类和生物学特征Ⅱ[J];海洋与湖沼;2000年03期
9 叶属峰,黄秀清;东海赤潮及其监视监测[J];海洋环境科学;2003年02期
10 吴瑞贞;马毅;;近20a南海赤潮的时空分布特征及原因分析[J];海洋环境科学;2008年01期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 何闪英;中肋骨条藻增殖细胞核抗原基因表达量与生长关系的研究[D];中国海洋大学;2007年
2 赵丽媛;东海原甲藻增殖细胞核抗原基因表达量与生长关系的研究[D];中国海洋大学;2009年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 安鑫龙;齐遵利;李雪梅;张秀文;;外来入侵植物对赤潮的生态调控作用[J];安徽农业科学;2008年33期
2 黄爱君;黄海燕;庄志雄;杨汝德;刘建军;;大田软海绵酸对HL-7702肝细胞毒性效应的研究[J];安徽农业科学;2010年10期
3 徐鑫;郑明珠;刘景圣;;林蛙输卵管糖蛋白的纯化方法研究[J];安徽农业科学;2010年11期
4 安鑫龙;李雪梅;;河北省2个赤潮藻新记录种——微小原甲藻和反曲原甲藻[J];安徽农业科学;2010年17期
5 雷强勇;吕颂辉;;维生素B_1和B_(12)对米氏凯伦藻增殖的影响[J];安徽农业科学;2010年18期
6 陈成勋;王晓梅;樊振中;戴伟;王欣;;革胡子鲶体表粘液抗菌肽的分离与纯化及抑菌活性研究[J];安徽农业科学;2010年26期
7 安鑫龙;么强;李雪梅;;赤潮微藻海洋卡盾藻研究[J];安徽农业科学;2010年32期
8 安鑫龙;李雪梅;么强;;河北省2个赤潮藻新记录种——米氏凯伦藻和里昂原多甲藻[J];安徽农业科学;2011年02期
9 安鑫龙;李雪梅;么强;;河北省1个赤潮藻新记录种——海洋尖尾藻[J];安徽农业科学;2011年09期
10 王存;王晓梅;季延滨;徐敏;戴伟;潘宝平;;磷酸盐缓冲液的浓度和pH对革胡子鲶肠道抗菌蛋白/肽分级盐析的影响[J];安徽农业科学;2011年28期
中国重要会议论文全文数据库 前6条
1 潘光;由希华;谷树茂;宋毅倩;潘齐;丁君;;光照、温度和盐度对东海原甲藻生长的影响[A];2011中国环境科学学会学术年会论文集(第一卷)[C];2011年
2 刘建军;黄海燕;黄爱君;黄新凤;杨细飞;袁建辉;;大田软海绵酸的荧光检测法研究[A];2010广东省预防医学会学术年会资料汇编[C];2010年
3 张洪亮;张爱君;窦月明;张汉德;;渤海海区赤潮发生特点的研究[A];中国环境保护优秀论文集(2005)(上册)[C];2005年
4 丁东生;石晓勇;李京;张传松;梁生康;;东海赤潮高发区营养盐结构月际变化分析[A];中国环境科学学会2009年学术年会论文集(第一卷)[C];2009年
5 由希华;潘光;石敬华;李恒庆;;浮游植物种间竞争研究进展[A];2010中国环境科学学会学术年会论文集(第三卷)[C];2010年
6 蔡玉婷;;集中处理电镀废水,减少对人体的危害[A];第三届全国农业环境科学学术研讨会论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张静;深圳湾水环境综合评价及环境容量研究[D];大连海事大学;2010年
2 乔小燕;基于生物形态学的赤潮藻显微图像分割与特征提取研究[D];中国海洋大学;2010年
3 王云飞;东海赤潮监测卫星遥感方法研究[D];中国海洋大学;2009年
4 王小冬;棕囊藻囊体形成及对环境压力的响应[D];中国海洋大学;2010年
5 古中博;赤潮灾害及其综合防治的生态、经济与管理研究[D];中国海洋大学;2010年
6 王洪亮;颗粒物对藻华生物的絮凝作用及其分形数值模拟研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
7 杨德周;东海陆架黑潮入侵及生态响应数值模拟研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
8 张清春;东海大规模甲藻赤潮种吞噬特性及其在赤潮形成中的作用初探[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
9 赖俊翔;长江口及邻近海域浮游植物色素与富营养化研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
10 文世勇;基于营养盐的赤潮灾害风险评估技术与应用研究[D];大连海事大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王琦;免疫抑制剂Fk506对乳腺肿瘤细胞株的体外作用研究[D];浙江理工大学;2010年
2 赵丹丹;磷胁迫下油菜幼苗叶片的蛋白质组学初步研究[D];郑州大学;2010年
3 赵倩;青堆子湾营养盐季节变化特征及多种富营养化评价方法的比较[D];辽宁师范大学;2010年
4 阮崇美;山羊精子蛋白质组学技术体系优化及冻融前后精子差异蛋白分析[D];安徽农业大学;2010年
5 蒲媛媛;白菜型冬油菜抗寒性的生理特性与蛋白质组的电泳分析[D];甘肃农业大学;2010年
6 冀晓青;几株典型赤潮藻化感作用及化感物质研究[D];中国海洋大学;2010年
7 夏雯娟;海藻之间他感作用的初步研究[D];中国海洋大学;2010年
8 杨斌;中国东海、黄海和南海北部海水中挥发性卤代烃的分布与通量研究[D];中国海洋大学;2010年
9 李瑞环;海南东部近海地区营养盐动力学的研究[D];中国海洋大学;2010年
10 李玲伟;沉积物—水界面交换和黄河输入对渤海营养盐的影响[D];中国海洋大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 安鑫龙;齐遵利;李雪梅;张秀文;;河北省沿海赤潮研究20年[J];安徽农业科学;2008年31期
2 黄绍辉;方炎明;;牛血清白蛋白对连香树PCR反应体系的优化[J];安徽农业科学;2010年26期
3 陆斗定,J.Gobel,王春生,刘镇盛;浙江海区赤潮生物监测与赤潮实时预测[J];东海海洋;2000年02期
4 赵焕英;包金风;;实时荧光定量PCR技术的原理及其应用研究进展[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2007年04期
5 么强;李志霞;李雪梅;安鑫龙;;河北省沿海赤潮生物概述[J];河北渔业;2010年06期
6 孙百晔;王修林;李雁宾;王长友;王爱军;梁生康;张传松;;光照在东海近海东海原甲藻赤潮发生中的作用[J];环境科学;2008年02期
7 刘录三;李子成;周娟;郑丙辉;唐静亮;;长江口及其邻近海域赤潮时空分布研究[J];环境科学;2011年09期
8 黄长江,董巧香;1998年春季珠江口海域大规模赤潮原因生物的形态分类和生物学特征Ⅱ[J];海洋与湖沼;2000年03期
9 吕颂辉;欧美珊;;不同N源及N/P对东海原甲藻生长的影响[J];海洋环境科学;2006年02期
10 龙华;周燕;余骏;胡益峰;傅国君;;2001~2007年浙江海域赤潮分析[J];海洋环境科学;2008年S1期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 赵丽媛;东海原甲藻增殖细胞核抗原基因表达量与生长关系的研究[D];中国海洋大学;2009年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 安鑫龙;齐遵利;李雪梅;张秀文;;河北省沿海赤潮研究20年[J];安徽农业科学;2008年31期
2 向怡卉;苏秀榕;董明敏;;海参体壁及消化道的氨基酸和脂肪酸分析[J];水产科学;2006年06期
3 潘智韬,刘士忠;赤潮对浙江近海养殖业危害的初步调查[J];东海海洋;1990年01期
4 朱根海,山本民次,大谷修司,松田治;浙江舟山群岛邻近海域微、小型浮游植物与赤潮生物研究[J];东海海洋;2000年01期
5 陆斗定,J.Gobel,王春生,刘镇盛;浙江海区赤潮生物监测与赤潮实时预测[J];东海海洋;2000年02期
6 曾江宁,曾淦宁,黄韦艮,郑平,周青松,陈全震,高爱根;赤潮影响因素研究进展[J];东海海洋;2004年02期
7 夏平;陆斗定;朱德弟;杜伟;;浙江近岸海域赤潮发生的趋势与特点[J];海洋学研究;2007年02期
8 陆斗定,张志道,朱根海,楼毅;浙江近海夜光藻的分布及其生态学特点[J];东海海洋;1994年03期
9 陆斗定,张志道;浙江马鞍列岛附近海域浮游植物与赤潮生物研究[J];东海海洋;1996年01期
10 张志道,陆斗定;南麂列岛附近海域的浮游植物和赤潮生物[J];东海海洋;1996年03期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 张秀芳;东海原甲藻基因表达特征研究[D];中国海洋大学;2006年
2 晏荣军;球形棕囊藻与溶藻细菌的关系研究[D];暨南大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 吴瑞贞;南海赤潮发生前后阶段水文气象要素演变特征研究[D];中国海洋大学;2006年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 侯继灵;张传松;石晓勇;陆茸;王修林;;磷酸盐对两种东海典型赤潮藻影响的围隔实验[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2006年S1期
2 李猛;袁东星;林庆梅;;三种典型赤潮藻产生与消耗二甲基硫化物的速率估算[J];应用生态学报;2007年08期
3 尹平河;黄月华;赵玲;;Zn~(2+)和Pb~(2+)对东海原甲藻生长的影响[J];海洋环境科学;2010年03期
4 周伟华;殷克东;朱德第;;舟山海域春季浮游植物生物量及东海原甲藻赤潮频发机制初探[J];应用生态学报;2006年05期
5 李雁宾;韩秀荣;胡跃诚;王修林;祝陈坚;李瑞香;;营养盐对东海浮游植物生长影响的现场培养实验[J];海洋环境科学;2008年02期
6 舒阳;刘振乾;李丽君;;凤眼莲浸出液对东海原甲藻生长的抑制作用[J];生态科学;2006年02期
7 刘洁生;谢瑾;杨维东;;塔玛亚历山大藻溶血毒素对东海原甲藻的化感作用[J];暨南大学学报(自然科学版);2007年01期
8 赵艳芳;俞志明;宋秀贤;曹西华;;营养盐对长江口2种主要赤潮原因藻光合色素和光合作用影响的比较研究[J];环境科学;2009年03期
9 李荣茂;;福建省沿岸赤潮生物——东海原甲藻生态探讨[J];海洋环境科学;2009年S1期
10 刘洁生;谢瑾;杨维东;李丽璇;;营养盐限制条件下塔玛亚历山大藻对东海原甲藻的化感作用研究[J];热带亚热带植物学报;2006年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 邓光;耿亚洪;胡鸿钧;齐雨藻;吕颂辉;李中奎;李夜光;;几种环境因子对高生物量赤潮甲藻-东海原甲藻光合作用的影响[A];庆祝中国藻类学会成立30周年暨第十五次学术讨论会摘要集[C];2009年
2 徐宁;秦俊莲;孙树刚;段舜山;;东海原甲藻对尿素的吸收动力学与利用特性[A];中国藻类学会第八次会员代表大会暨第十六次学术讨论会论文摘要集[C];2011年
3 潘光;由希华;谷树茂;宋毅倩;潘齐;丁君;;光照、温度和盐度对东海原甲藻生长的影响[A];2011中国环境科学学会学术年会论文集(第一卷)[C];2011年
4 刘婷婷;杨维东;李宏业;刘洁生;;米氏凯伦藻对东海原甲藻的化感作用[A];中国藻类学会第八次会员代表大会暨第十六次学术讨论会论文摘要集[C];2011年
5 陈桃英;颜天;周名江;;东海大规模赤潮藻对菲律宾蛤仔受精卵孵化和蒙古裸腹溞种群的影响[A];全国生物多样性保护及外来有害物种防治交流研讨会论文集[C];2008年
6 李正华;;福建长乐海区一次东海原甲藻赤潮生消过程分析[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
7 徐宁;段舜山;李爱芬;;东海原甲藻(Prorocentrum donghaiense)的氮营养特性研究[A];中国海洋湖沼学会藻类学分会第七届会员大会暨第十四次学术讨论会论文摘要集[C];2007年
8 颜天;陈洋;谭志军;王丽平;陈桃英;周名江;;东海大规模赤潮对海洋浮游生态系统结构的影响[A];中国毒理学会第四届全国学术会议论文(摘要)集[C];2005年
9 王秀秀;黄邦钦;;中肋骨条藻在磷营养限制下的补偿生长效应[A];庆祝中国藻类学会成立30周年暨第十五次学术讨论会摘要集[C];2009年
10 欧林坚;黄邦钦;洪华生;齐雨藻;吕颂辉;;混合培养条件下几种赤潮藻对有机磷源的竞争生长研究[A];庆祝中国藻类学会成立30周年暨第十五次学术讨论会摘要集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 来建强;有了生物探针有害赤潮快现形[N];新华每日电讯;2009年
2 记者 谢开飞;检测赤潮藻仅需5分钟[N];科技日报;2009年
3 记者 章建民 通讯员 昝爱宗;沿海赤潮近期仍将持续[N];浙江日报;2004年
4 黄中;海洋污染与赤潮灾害[N];中国知识产权报;2000年
5 蓝旭 杨清双;厦门科研人员从压舱水检出赤潮藻[N];福建日报;2005年
6 周宽宏 赵小兰 董佩军;舟山赤潮趋稳 仍需警惕反复[N];中国气象报;2004年
7 记者 陈纪蔚 通讯员 黄渭;浙江海洋环境形势依然不容乐观[N];浙江日报;2004年
8 杨清双;厦门局船舶压舱水课题通过专家验收[N];中国国门时报;2007年
9 方芳;舟山附近海域发生特大赤潮[N];中国环境报;2004年
10 昝爱宗;浙江加强海洋环境监测和灾害预报[N];中国海洋报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 袁健;东海三种重要赤潮藻荧光定量PCR检测技术的建立和应用[D];中国海洋大学;2012年
2 刘永健;东海原甲藻磷胁迫响应基因的分析及细胞死亡相关基因的克隆与分析[D];中国海洋大学;2007年
3 王进河;两种赤潮微藻与两种轮虫相互作用对气候因子变化响应的实验生态学研究[D];中国海洋大学;2012年
4 周媛;指状许水蚤与赤潮微藻相互作用的实验生态学研究[D];中国海洋大学;2010年
5 张清春;东海大规模甲藻赤潮种吞噬特性及其在赤潮形成中的作用初探[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
6 徐宁;中国沿海典型赤潮藻的生态位研究[D];暨南大学;2006年
7 齐红菊;利用叶绿素荧光方法检测浮游植物营养盐限制及跟踪赤潮生消的研究[D];中国海洋大学;2012年
8 赵丽媛;东海原甲藻增殖细胞核抗原基因表达量与生长关系的研究[D];中国海洋大学;2009年
9 雷惠;基于固有光学量的东海赤潮遥感提取算法研究[D];浙江大学;2011年
10 卢慧明;大型海藻龙须菜化学成分及其对中肋骨条藻化感作用研究[D];暨南大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王国善;东海原甲藻增殖细胞核抗原的体外表达和抗体制备[D];中国海洋大学;2011年
2 孙树刚;东海原甲藻对尿素的吸收与利用特征[D];暨南大学;2010年
3 王曲圆;增殖细胞核抗原基因作为东海原甲藻生长指标的现场实验研究[D];中国海洋大学;2012年
4 李慧;化感作用对中肋骨条藻和东海原甲藻种间竞争的影响[D];中国海洋大学;2011年
5 丁雁雁;温度、光照对东海几种典型赤潮藻生长及硝酸还原酶活性的影响[D];中国海洋大学;2012年
6 张德强;不同营养盐条件对东海原甲藻生化性质的影响研究[D];青岛科技大学;2011年
7 李孟华;几种赤潮浮游植物种间竞争研究[D];中国海洋大学;2007年
8 陈芝兰;凤眼莲根对赤潮藻生长的抑制作用及其机理研究[D];暨南大学;2005年
9 李猛;典型赤潮藻的二甲基硫化物的生物生产研究[D];厦门大学;2006年
10 张淑雯;光照、营养盐对甲藻吞噬营养行为的调控机制研究[D];暨南大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026