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《中国海洋大学》 2012年
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中国明对虾血蓝蛋白的组织分布特点及白斑症病毒感染后血蓝蛋白含量的变化

卢君辉  
【摘要】:本论文应用抗中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)血蓝蛋白单克隆抗体,研究血蓝蛋白在中国明对虾鳃、心、胃、中肠、淋巴器官、卵巢和肝胰脏等组织器官中的分布特点;用不同浓度白斑症病毒(WSSV)感染中国明对虾,测定血淋巴中血蓝蛋白和总蛋白含量的变化。旨在为血蓝蛋白抗WSSV感染免疫作用机制的研究提供基础数据。主要包括以下3部分: 1.抗中国明对虾血蓝蛋白单克隆抗体的特性分析及抗原抗体最佳使用稀释度的确定 复苏抗中国对虾血蓝蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株2H3,收集细胞培养上清,以中国明对虾血淋巴上清液为抗原,用Western-blotting法对单抗2H3进行特性分析,并通过棋盘法滴定法确定ELISA中抗原抗体最佳稀释倍数。结果表明:单抗2H3可与中国对虾血蓝蛋白的分子量分别为73kDa和75kDa的两个亚基发生特异性反应;ELISA中抗原抗体的最佳使用稀释倍数分别为10-4和2-2。 2.中国明对虾血蓝蛋白的组织分布特点 以筛选出的单抗2H3为第一抗体,采用石蜡切片、免疫组化方法,研究血蓝蛋白在中国明对虾鳃、心、胃、中肠、淋巴器官、卵巢和肝胰脏等组织器官中的分布特点。结果表明:血蓝蛋白在各组织器官中均有分布,在鳃丝小叶边缘的微血腔、心肌束间隙、淋巴器官的淋巴腔中以及肝小管中阳性信号较强;在卵巢卵母细胞之间的血窦、胃内壁环肌层结缔组织的血窦和中肠结缔组织血窦中有阳性信号。结论认为,中国明对虾血蓝蛋白阳性信号大多来自血淋巴而非实质组织,且在血淋巴含量多、血流量大的部位含量丰富,在某些血淋巴无法到达的部位(肝小管内壁等)也有血蓝蛋白分布,血蓝蛋白含量的这种组织特异性与各组织器官的功能有着密切的联系。 3.白斑症病毒感染后中国明对虾血蓝蛋白含量的变化 取患白斑症的螯虾鳃,每克鳃组织加10ml磷酸缓冲液匀浆,离心、过滤后以滤液为病毒粗提母液,稀释至10~(-2),10~(-4)和10~(-6)作为WSSV注射液,注射感染中国明对虾,绘制存活率曲线。实验证明以10~(-2)、10~(-4)和10~(-6)这三个病毒稀释度感染中国明对虾,不仅可以保证实验动物均被成功感染上病毒,也可以保证实验过程中不同时间段均有足够的存活对虾可供取样。 分别以10~(-2),10~(-4)和10~(-6)WSSV粗提液尾节肌肉注射感染中国明对虾,分别在感染后0h,6h,l2h,24h,36h,48h和72h取样。 取对虾鳃组织,two-step PCR检测WSSV。10~(-2)WSSV感染组在WSSV感染后12h于鳃中检出病毒,10~(-4)WSSV感染组在感染后12h被第二步PCR检出病毒,10~(-6)WSSV感染组在感染后24h被第二步PCR检出病毒。 抽取血淋巴,ELISA测定血蓝蛋白的含量。结果显示,在10~(-2)WSSV感染组,感染后6h血蓝蛋白含量显著上升(A_(405nm)=0.74±0.036, ANOVA, p0.05)并在12h达到最高值(A405nm=0.77±0.047, ANOVA, p0.05),在24h降至对照水平,随后持续下降并显著低于对照组,直到72h达到最低值(A405nm=0.18±0.046, ANOVA, p0.05)。在10~(-4)和10~(-6)WSSV感染组,血蓝蛋白含量在感染后0h,6h,12h和24h无显著变化,从36h起显著低于对照组,持续下降至72h达到最低(10~(-4):A405nm=0.23±0.053;10~(-6):A_(405nm)=0.22±0.050, ANOVA,p0.05)。 考染法测定血淋巴总蛋白的含量。结果显示,在10~(-2),10~(-4)和10~(-6)WSSV感染组中,血淋巴总蛋白含量均在感染WSSV后6h显著高于对照组并在12h达到最大值(10~(-2):108.18±1.36mg/ml;10~(-4):103.49±1.33mg/ml;10~(-6):96.94±1.06mg/ml, ANOVA, p0.05),在72h显著低于对照组(10~(-2):86.95±0.52mg/ml;10~(-4):89.27±0.76mg/ml;10~(-6):85.98±0.71mg/ml, ANOVA, p0.05)。 实验结果表明,随着WSSV感染程度的加深,血蓝蛋白含量总体呈下降趋势,高浓度WSSV (10~(-2))感染组蓝蛋白含量在感染初期显著上升,而中、低浓度(10~(-4)、10~(-6))WSSV感染组蓝蛋白含量无显著升高,说明在WSSV的感染过程中血蓝蛋白含量的变化呈现出剂量依赖的特性,WSSV感染与血蓝蛋白密切相关。
【学位授予单位】:中国海洋大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:S945.1

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 章跃陵,王三英,彭宣宪;无脊椎动物适应性免疫的研究进展[J];水产科学;2005年08期
2 吴友吕,陈波;中国对虾鳃的超微结构研究[J];东海海洋;1995年02期
3 江晓路,刘树青,牟海津,王慧谧,管华诗;真菌多糖对中国对虾血清及淋巴细胞免疫活性的影响[J];动物学研究;1999年01期
4 樊景凤;梁玉波;宋立超;张喜昌;;贝类帕金虫间接酶联免疫吸附测定法的建立[J];海洋环境科学;2006年02期
5 姜永华,颜素芬,陈政强;南美白对虾消化系统的组织学和组织化学研究[J];海洋科学;2003年04期
6 王崇明,杨冰,宋晓玲,黄偼;应用双抗夹心ELISA法检测皱纹盘鲍致病病原—创伤弧菌的研究[J];海洋水产研究;1999年01期
7 孙杰;王宝杰;孙姝娟;李晓华;姜珊;刘梅;蒋克勇;王雷;;中国对虾血蓝蛋白基因cDNA的克隆与序列分析[J];渔业科学进展;2010年01期
8 吴礼龙,康惠;草鱼出血病的快速ELISA诊断试验[J];内陆水产;1997年04期
9 刘晓云,刘树青,姜明;中国对虾类淋巴器结构观察及功能探讨[J];青岛海洋大学学报(自然科学版);1999年01期
10 方平,李英文;酶联免疫吸附法在水产养殖中的应用[J];水利渔业;2004年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王明昌;侯林;董长永;隋娜;张筠;李妍;;海洋动物抗菌肽的研究进展[J];安徽农学通报;2008年05期
2 赵晴;;对虾白斑综合症病毒综述[J];安徽农学通报(上半月刊);2010年09期
3 朱翠兰,余为一,李槿年,祖国掌,丁淑荃;嗜水气单胞菌微量凝集反应条件的研究[J];安徽农业大学学报;1998年01期
4 肖东,林浩然;鱼类生长激素生物活性和定量免疫测定技术的研究进展[J];动物学杂志;2000年04期
5 贾永红;裘洁圆;周秋燕;陈吉刚;;长毛对虾血细胞与血淋巴液的生化特性初步研究[J];动物学杂志;2008年05期
6 周泓,袁成玉,陈远;鲷科鱼类细菌病及其防治方法[J];水产科学;2005年03期
7 杨玉姣;王国良;金珊;郑天伦;;环境胁迫对对虾免疫系统的影响研究[J];水产科学;2006年12期
8 李光;樊景凤;林凤翱;梁玉波;;对虾的免疫机制及其疾病免疫预防的研究进展[J];水产科学;2007年01期
9 严芳;章跃陵;罗活强;胡忠;黄通旺;叶向群;;凡纳滨对虾血蓝蛋白酚氧化酶活性的研究[J];水产科学;2008年01期
10 李强;乔帼;付雷;李华;;凡纳滨对虾感染白斑综合症病毒后的新症状[J];水产科学;2008年09期
中国重要会议论文全文数据库 前4条
1 郝林华;陈靠山;曲江波;杨志;;一种新型的免疫促长剂对大菱鲆生长和免疫力的影响[A];中国海洋学会海洋生物工程2005年学术年会论文集[C];2005年
2 郭志勋;李卓佳;林黑着;叶乐;冯娟;杨莺莺;陈永青;;芽孢杆菌对凡纳对虾生长及免疫的影响[A];可持续水产养殖——资源、环境、质量——2003水产科技论坛论文集[C];2003年
3 杨鸢劼;陈辉;;酶联免疫吸附法快速检测鳗弧菌[A];可持续水产养殖——资源、环境、质量——2003水产科技论坛论文集[C];2003年
4 左伟;杜建喜;;海洋节肢动物血蓝蛋白的研究进展[A];2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张彦娇;盐度和温度对大菱鲆非特异性免疫力的影响及淡水螯虾相关免疫因子的研究[D];中国海洋大学;2010年
2 常杰;对虾和刺参敏感免疫学指标的筛选和评价[D];中国海洋大学;2010年
3 孟宪红;中国对虾“黄海2号”对WSSV的抗病性分析[D];中国海洋大学;2010年
4 赖晓芳;中国对虾应答WSSV侵染相关基因的研究[D];中国海洋大学;2010年
5 王丽燕;面包酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)对中国卤虫(Artemia sinica)抗弧菌感染的影响与酚氧化酶原在卤虫早期发育过程中表达时相的研究[D];中国海洋大学;2010年
6 罗展;凡纳滨对虾两种C-型凝集素的基因克隆和功能研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
7 刘媛;三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)cDNA文库构建、EST分析及抗脂多糖因子研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
8 梁廷明;中华绒螯蟹螺原体重要功能基因的筛选和研究及螺原体与WSSV的多重PCR检测技术[D];南京师范大学;2011年
9 严芳;甲壳动物血蓝蛋白免疫学活性及其作用机制研究[D];汕头大学;2011年
10 陈德芳;斑点叉尾鮰海豚链球菌病病原学、病理学和诊断方法研究[D];四川农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 丁伯文;斑点叉尾鮰消化道益生菌的筛选与应用研究[D];华中农业大学;2010年
2 白楠;凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei、仿刺参Apostichopus japonicus免疫增强剂使用频率和免疫疲劳的研究[D];中国海洋大学;2010年
3 许旭;海产品中异尖科线虫生物学检测技术的研究[D];中国海洋大学;2010年
4 刘君;对虾抗白斑综合征病毒益生菌的筛选及其作用效果[D];中国海洋大学;2010年
5 杜以帅;酶解海藻产物对刺参(Apostichopus japonicus)肠道菌群和免疫相关因子的影响[D];中国海洋大学;2010年
6 吕晓燕;亚硝酸盐和氨氮对红螯光壳螯虾生理生化的影响[D];华东师范大学;2011年
7 查智辉;三疣梭子蟹血卵涡鞭虫单克隆抗体研制及其初步应用[D];浙江海洋学院;2011年
8 李振达;壳寡糖的制备及其在水产养殖上的应用研究[D];浙江海洋学院;2011年
9 王宗祥;贝类派琴虫原位杂交检测技术研究[D];内蒙古农业大学;2011年
10 韩耀龙;拟穴青蟹健康养殖模式研究[D];汕头大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 皮国华,邓瑶,刘加,王慧娟,张素香;快速ELISA的建立和应用[J];病毒学报;1995年04期
2 席贻龙,邓道贵,崔之学;日本沼虾消化道形态和组织学特点[J];动物学杂志;1997年03期
3 章跃陵,卓奕明,朱永飞,王三英,黄通旺;南美白对虾人工感染细菌后肝胰脏中主要变化蛋白的研究[J];水产科学;2005年06期
4 吴友吕,陈波;中国对虾镰刀菌病的细胞病理研究[J];东海海洋;1992年04期
5 马家好,李学勤,王振英,杨振国,王文东;Dot-ELISA快速检测鱼类运动性气单胞菌的研究[J];大连水产学院学报;1997年03期
6 贺路;左文功;蔡传奇;艾晓辉;何介华;;沙市地区暴发性传染病病原研究[J];淡水渔业;1992年03期
7 吕宝忠,王健,王顺德;血蓝蛋白在非线性分子进化上的意义[J];大自然探索;1998年02期
8 邓道贵,马海弢,郭生林;锯齿米虾消化系统的组织学研究[J];淮北煤师院学报(自然科学版);2000年04期
9 余俊红,姚斐,王宝坤,纪伟尚,徐怀恕;应用间接ELISA技术快速检测花鲈病原菌-鳗弧菌[J];高技术通讯;2001年07期
10 李天道,于佳,俞开康;中国对虾血清中酚氧化酶活力研究[J];海洋湖沼通报;1998年01期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 章跃陵;南美白对虾类Ig的定性、功能和免疫分子进化的研究[D];厦门大学;2003年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 高焕,孔杰;中国明对虾基因组小卫星重复序列分析[J];动物学报;2005年01期
2 ;辽宁省在黄海北部海洋岛渔场放流2亿尾中国明对虾[J];水产科学;2008年09期
3 刘淮德;刘梅;王宝杰;蒋克勇;张国范;王雷;;中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)肠道微生物区系组成的分子分析[J];饲料工业;2010年04期
4 孙杰;王宝杰;李晓华;孙姝娟;刘梅;蒋克勇;王雷;;中国明对虾酚氧化酶原基因cDNA的克隆与表达特征[J];水产学报;2010年01期
5 范克俭,王群,李健,战文斌;磺胺甲基异(口恶)唑在中国明对虾体内的药代动力学研究[J];齐鲁渔业;2005年08期
6 ;庄河模式试养中国明对虾“黄海2号”喜获成功[J];水产科学;2011年01期
7 李晓静;王伟继;孔杰;孟宪红;田燚;孟鹏;毛连菊;;利用中国明对虾单对杂交亲本及其F_2群体构建RAPD遗传连锁图谱[J];中国水产科学;2007年05期
8 谢松;金鑫林;柳峰松;梁晓辉;张慧;曹玉萍;;中国明对虾卵黄蛋白的部分生化性质[J];四川动物;2008年05期
9 黄国强,董双林,王芳,穆迎春,董少帅,刘相义;中国明对虾摄食后的特殊动力作用[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2005年06期
10 黄冰心;蒋昊;张继泉;相建海;;SDS-PAGE与液质联用技术分离和鉴定中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)血浆蛋白[J];海洋与湖沼;2009年02期
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1 王宝杰;刘梅;蒋克勇;王雷;;中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)血淋巴蛋白质组学研究中高丰度蛋白去除方法的建立[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
2 刘志远;李学鹏;励建荣;;中国明对虾肌肉蛋白质双向电泳体系的建立与优化[A];中国食品科学技术学会第八届年会暨第六届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2011年
3 刘梅;孙姝娟;王雷;王宝杰;蒋克勇;;中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)TOR基因的分子克隆及相关信号通路的初步研究[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
4 郭明申;康现江;;中国明对虾精子发生和形成过程中的膜复合体变化[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
5 刘逸尘;孙金生;李富花;相建海;;中国明对虾血淋巴中丝氨酸蛋白酶同源物及丝氨酸蛋白酶抑制剂的重组表达和功能分析[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
6 马洪明;相建海;;中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)alpha2-巨球蛋白基因的克隆和表达分析[A];中国海洋湖沼学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编[C];2007年
7 栾伟;李富花;;中国明对虾糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,FcGRP78)的克隆与表达[A];中国海洋湖沼学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编[C];2007年
8 郇聘;张晓军;赵翠;相建海;;5s rDNA在中国明对虾染色体上的定位研究[A];中国海洋湖沼学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编[C];2007年
9 石秀珍;王金星;;中国明对虾spatzle的基因克隆和性质研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
10 陈传道;章跃陵;;两种不同策略研究对虾血蓝蛋白糖基多样性[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前6条
1 记者 程瀚;中国明对虾重新“蹦”上百姓餐桌[N];滨海时报;2011年
2 ;河豚毒素实验疫苗的不同剂量对免疫效应的影响[N];中国医药报;2003年
3 麦国荣;抗内毒素药物的研究进展[N];中国医药报;2001年
4 潘咏平;水科院2项成果获国家科技进步奖[N];中国渔业报;2011年
5 记者 祝蕾;山东36项成果获国家科技奖励[N];济南日报;2011年
6 常丽君;特效疫苗可对抗海洛因快感[N];科技日报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 黄冰心;基于凝胶电泳的中国明对虾血浆蛋白质组学研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2008年
2 韦柳枝;低溶解氧对中国明对虾生长的影响及其机制的实验研究[D];中国海洋大学;2010年
3 任乾;中国明对虾丝氨酸蛋白酶、活性氧的产生与消除及其半胱氨酸蛋白酶研究[D];山东大学;2010年
4 柳峰松;中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)抗菌因子及模式识别蛋白的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
5 董波;中国明对虾和文蛤EST分析及细胞黏附蛋白基因的克隆和表达谱[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
6 严芳;甲壳动物血蓝蛋白免疫学活性及其作用机制研究[D];汕头大学;2011年
7 孙杰;中国明对虾(Fenneropenaeus Chinensis)几种免疫相关因子的分离纯化、基因克隆及相互关系研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2009年
8 姚翠鸾;免疫刺激后中国明对虾血液抗菌力应答及两种免疫相关因子LYZ和AK的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
9 王芳;光照对中国明对虾(Fenneropenaeus Chinensis)生长的影响及其机制[D];中国海洋大学;2004年
10 章跃陵;南美白对虾类Ig的定性、功能和免疫分子进化的研究[D];厦门大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 卢君辉;中国明对虾血蓝蛋白的组织分布特点及白斑症病毒感染后血蓝蛋白含量的变化[D];中国海洋大学;2012年
2 张晋康;中国明对虾淋巴器官在弧菌刺激下的差异蛋白质组学研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
3 许泽立;东亚飞蝗血蓝蛋白携氧功能的研究[D];湖北大学;2012年
4 周剑雄;鲍铁蛋白、血蓝蛋白原核表达及多克隆抗体制备、纯化[D];福建农林大学;2010年
5 孙姝娟;中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)TOR基因的分子克隆及相关信号通路的初步研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
6 迟艳红;中国明对虾Rac1/PI3K/Akt通路相关基因的克隆和功能关系的初步研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2012年
7 宋光年;中国明对虾凋亡基因caspase的克隆、表达及功能的初步分析[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
8 田丽萍;中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)金属硫蛋白基因和启动子的克隆与鉴定[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
9 黄天鸽;凡纳滨对虾(Litopenaeus Vannamei)在病原菌和多巴胺作用下血蓝蛋白酚氧化酶免疫活性的研究[D];中国海洋大学;2011年
10 邵明瑜;中国明对虾(Fenneropenaeus Chinensis)淋巴器官和造血组织的细胞学和组织化学及外源物质对其作用的影响[D];中国海洋大学;2004年
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