5-羟基-6,7,8,4',5'-五甲氧基黄酮对肿瘤细胞内糖胺聚糖组成与结构的影响

【摘要】：近年来肿瘤发病率持续升高，恶性肿瘤已经成为影响人类健康的主要因素之一，因此治疗肿瘤刻不容缓。但是目前用于肿瘤治疗的方案中，化疗/放疗法因为对正常组织的伤害极大使其应用受到极大的限制，小分子靶向药物则逐渐出现不可逆转的耐药性。因此，这就要求我们探寻一种高效专一、副作用小的治疗癌症药物。 随着癌症研究的不断深入，越来越多的研究结果表明糖胺聚糖（GAG）在肿瘤增殖、转移、侵袭的过程中，起着重要的作用。因此探究药物作用对肿瘤细胞内糖胺聚糖的组成与结构的影响，对于抑癌药物的开发具有重要意义。 本论文的研究对象为中药陈皮中提取分离得到的5-羟基-6,7,8,4’,5’-五甲氧基黄酮(简称为5HPMF)化合物。前期研究发现其具有抑制肿瘤细胞增殖的效果。本论文主要研究5HPMF对肿瘤细胞内糖胺聚糖组成与结构的影响，通过硫酸-咔唑法、流式细胞术、高效液相色谱法等研究方法，探究5HPMF对肿瘤细胞内糖胺聚糖含量、浓度、结构等方面的变化，发现从而阐明5HPMF对于糖胺聚糖的影响与其抗肿瘤作用的关系。 本论文研究思路新颖，首次探讨这种黄酮类化合物对肿瘤GAGs合成的抑制作用，进而探究肿瘤抑制作用机制。本论文研究方法独特，研究过程中建立了一种从肿瘤细胞内提取糖胺聚糖样品的方法。实验证明，该提取方法稳定，特别适合本实验研究中肿瘤细胞内少量糖胺聚糖样品的提取，目前该方法尚未见报道。 本论文分别通过硫酸咔唑法和高效液相色谱法对糖胺聚糖进行定性、定量和单糖组成分析，检测5HPMF在HCT116和A549细胞系上对糖胺聚糖含量和组分的影响。结果发现这两种肿瘤细胞提取的糖胺聚糖样品含量少，总体来说药物作用后糖胺聚糖样品浓度变化不明显。高效液相分析数据表明，硫酸乙酰肝素类糖胺聚糖和硫酸软骨素类糖胺聚糖的相对含量没有明显受到5HPMF的调控。本论文借助流式细胞仪检测肿瘤细胞内FGF-GAG-FGFR三聚体数量的变化。研究发现5HPMF作用后， FGF1-GAG-FGFR1C/Fc、 FGF9-GAG-FGFR3C/Fc、FGF2-GAG-FGFR1C/Fc与FGF10-GAG-FGFR2B/Fc的三聚体数量并没有发生变化，而FGF7-GAG-FGFR2B/Fc，FGF8-GAG-FGFR3C/Fc三聚体数量发生变化，因为特定结构的糖胺聚糖是FGF-GAG-FGFR三聚体形成的必要条件，所以此数据表明5HPMF在一定程度上影响了GAG的精细结构。此外，该方法尚未见文献报道，为本领域内糖胺聚糖的研究提供了新的检测方法。 本论文糖胺聚糖的结构、含量、单糖组成与5HPMF对细胞内信号转导通路蛋白的调控作用相结合，可以找到5HPMF抗肿瘤作用的特异性分子靶点，进而可以从本质上揭示黄酮类化合物抑制GAGs合成的分子机制。 本论文从糖胺聚糖的角度探讨5HPMF抗肿瘤作用的机制，不仅可以详细阐述5HPMF的抗癌作用机理，更重要的是对于陈皮的深入开发和中药现代化进程的推进具有重要的价值和可观的前景。