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青岛文昌鱼体表粘液凝集素性质研究及MASP基因克隆

徐童童  
【摘要】: 本文利用青岛文昌鱼体表粘液凝集反应、热处理、pH处理文昌鱼体表粘液及糖抑制文昌鱼体表粘液凝集反应等免疫学实验方法验证了青岛文昌鱼(且belcheri tsingtaunese)体表粘液中的凝集素的存在并对其性质进行了研究。实验结果表明,文昌鱼体表粘液中凝集素对7种动物的血细胞:人ABO血细胞、兔血细胞、鸡血细胞、草鱼血细胞和蟾蜍血细胞均有凝集作用,其中对兔的血细胞凝集效价最高,对人ABO血型凝血作用无血型专一性。在60℃保温30分钟后,凝集素的凝集活性下降,在100℃保温30分钟后,凝集素凝集活性几乎完全消失;在pH6-10的范围内,凝集素的凝集活性稳定,pH大于10小于6的条件下,凝集素的凝集活性消失;文昌鱼体表粘液中的凝集素受D-半乳糖苷的抑制。这些结果表明,在文昌鱼的体表粘液中存在着凝集素,在机体免疫中起到阻碍外源异物和微生物入侵的第一道屏障的作用。 本文还利用PCR方法从青岛文昌鱼基因组DNA中克隆MASP(甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶)基因片段。PCR反应产物基因片段大小为630bp,序列比较结果表明,PCR克隆产物与爪蟾、文昌鱼的MASP基因,虾、水母等的胰蛋白酶基因和丝氨酸蛋白酶基因都有一定的同源性。基于本实验中所设计的引物为特异性简并引物,测序基因通过比较得到与预期片段有一定的同源性以及MASP同源物AsMASPa、AsMASPb、Clr和Cls在海鞘中存在的事实,我们可以初步推测,本实验PCR反应所克隆的片段可能为文昌鱼MASP或其同源基因的一部分序列。我们的结果说明,在文昌鱼免疫系统中存在着凝集素代表的低等机体免疫机制,可能存在着补体激活途径中甘露聚糖凝集素介导的凝集素途径。 对于MASP或其同源物基因的克隆在人、鼠、爪蟾、鲨、七鳃鳗、海鞘等动物中都有报道(Thiel S,etc,1997;M Matsushita et al., unpublished data; Ji X,et al,1997)。但文昌鱼MASP基因的克隆及其进化分析还未有报道。文昌鱼属于脊索动物门头索类,是介于无脊椎动物和脊椎动物之间的一种过渡类型。长久以来,文昌鱼一直被认为是现存的与脊椎动物亲缘关系最近的无脊椎动物(Stoke and Holland,1998; Zhang et al., 2001),在脊椎动物如何由无脊椎动物进化而来这一著名的生物学难题中占据重要的位置。因此,文昌鱼MASP基因的克隆对于研究 中国海洋人学硕几l..学位论文 功ASP基因乃至免疫系统的进化来说是非常重要的,同时对研究脊椎动物的起源 也具有十分重要的理论意义。


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