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《中国海洋大学》 2003年
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T-RFLP分析在细菌调查方面的应用

贾俊涛  
【摘要】: 对沿岸海水和养殖过程中虾池水体中的细菌群落结构分别做了T—RFLP(末端标记限制性片段长度多态性,Terminal Restricton Fragment Length Polymorphism)分析;对13株菌分别做了T—RFLP分析,将这13株菌各自产生的末端标记片段(Terminal Restricron Fragment,T-RF)做了比较,从而对菌进行了区分。 从沿岸海水中提取总DNA,得率为5.84ng/mL海水。以细菌特异性引物(其中反向引物由荧光物质标记)扩增细菌16S rdna的部分序列,然后用限制性内切酶MspI消化,产物应用测序仪上的genescan功能进行电泳检测。genescan图谱的结果表明,总共检测到十几个峰,分别代表十几种类群的细菌。其中电泳进行到19分钟—25分钟时出现的峰E、F、I和J代表的菌的数量占到总菌的80%以上,它们是海水中的优势菌。在电泳进行到约23分钟时检测到的末端标记片段的面积最大,表明该片段代表的菌的数量在这一群落中最多。 2002年7月—9月间,采用T-RFLP技术对虾池养殖水体中的细菌群落结构做了监测,同时采用平板涂布方法对7月24日,8月6日,8月20日的样品做了细菌计数。在genescan图谱上,峰Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的面积占了总面积的绝大部分,这几种片段代表的菌是该养殖水体细菌群落的主要构成类群,这几类菌交替成为群落中数量最多的菌。结合细菌平板计数的结果和片段Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的相对数量换算得到7月24日,8月6日,8月20日的片段Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ代表的细菌绝对数量的近似值,每种片段代表的菌的绝对数量在养殖期间也在发生变化。 对13株菌分别做了基于限制性内切酶MspI的T—RFLP分析,对比片段大小后,将片段大小相同的归为一组,将这13株菌分为了6组,其中有4组分别只含一株菌。对含有2个以上个体的2组再分别做基于限制性内切酶MseI的T—RFLP分析,最终将13株菌分成了9组。
【学位授予单位】:中国海洋大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:Q938

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【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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9 陈振文;赵太云;孙贺娟;路静;王迎;孟霞;曹争和;王钜;;微卫星DNA与生化标记分析对长爪沙鼠群体遗传分析的比较[A];中国实验动物学会第七届学术年会论文集[C];2006年
10 申玉春;熊邦喜;叶富良;阮芳;;南美白对虾高位池细菌数量变化及其与水环境因子的关系[A];可持续水产养殖——资源、环境、质量——2003水产科技论坛论文集[C];2003年
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【同被引文献】
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【二级参考文献】
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