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《中国海洋大学》 2004年
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条斑紫菜的转基因研究

刘红全  
【摘要】:紫菜是我国海藻养殖业的支柱产业之一也是主要的出口创汇海产品。近年来,随着紫菜栽培业规模的逐年扩大,对紫菜优良品种的供应要求越来越高。紫菜易于养殖,藻体形态结构简单,细胞发育分化易于调控,酶解紫菜产生原生质体及原生质体的再生技术已经成熟,易于进行分子水平上的研究。因此,开展紫菜基因工程研究,利用现代分子生物学的手段培育紫菜新品种是十分必要的,也具备现实可行性。同时,也有望将紫菜作为生物反应器来生产有用的外源蛋白。为此,我们以条斑紫菜的原生质体为受体,进行转基因研究,初步建立其转基因体系。 纯系培育是传统紫菜育种及进行紫菜生物工程研究的先决条件。本研究选取青岛地区野生条斑紫菜(Porphyra yezoensis),利用酶解制备原生质体进行再培养的方法培育了营养体纯系PY-qingdaol。对PY-qingdaol的18S rRNA基因进行了克隆和序列测定。将该基因与从GenBank获得的22个紫菜进行了分析、比较,并以相邻连接法构建了紫菜较为一致的系统发生树。结果表明利用紫菜18S rDNA基因序列差异可较精确的进行紫菜种间乃至品系的划分,这为进行紫菜的种质鉴定提供了一个新的思路。 为确立电击法转化条斑紫菜原生质体的条件、确定有效的启动子并验证以18S rDNA为外源基因整合位点的可行性,构建了以条斑紫菜18S rDNA片段为同源臂、CaMV35S为启动子、GUS基因为报告基因的同源重组型表达载体,并利用电击法对外源GUS基因在条斑紫菜原生质体瞬间表达进行了初步探索。实验结果表明CaMV35S启动子能够在条斑紫菜原生质体中启动GUS基因的瞬间表达;电击法是条斑紫菜基因转移的有效方法;当电场强度为2KV/cm,脉冲时间为300ms,脉冲次数为1次时,外源基因的转化效率较高;以18S rDNA片段为同源臂的同源重组型载体可以提高GUS基因在条斑紫菜原生质体中的瞬时表达。 为确定合适的选择性标记基因,以条斑紫菜18S rDNA片段为同源臂,构建了分别利用SV40启动子和CaMV35S启动子的两种cat基因的同源重组型表达载 体pQD一CAT一control和pQD一CAT一Enhancer。利用电击法将所构建的表达载体转 化条斑紫菜原生质体。结果表明,SV40启动子和C咖V35S启动子均可以驱动cat 基因在条斑紫菜原生质体中有效表达;所构建的以185 rDNA片段为同源臂的两 种同源重组型载体均可实现cat基因在条斑紫菜原生质体中的稳定表达;当以 cat基因作为选择性标记基因时,氯霉素可以作为紫菜原生质体基因转化的选择 压力。 对小鼠的7天为IL cDNA,进行了克隆和序列测定,并构建了以条斑紫菜185 rDNA片段为同源臂、cat基因为标记基因、了万才IL基因为外源基因、分别利用 SV4O启动子和CaMV35S启动子的同源重组型表达载体pQD一TRAIL一CAT。利用电击 法将其转化条斑紫菜原生质体,经氯霉素初步筛选,检测到外源基因己整合到紫 菜基因组中。 进行了条斑紫菜原生质体的玻璃化冷冻保存研究,发现玻璃化保护剂VS6 (10%DMSO,30%甘油,10%蔗糖)的保存效果较好,其最佳冻存程序是: 25%VS6过渡处理5 min后,用ooC预冷的VS6处理3 min,直接液氮保存,化 冻时采用40oC水浴快速化冻。按此方法,冻存后的原生质体的存活率可达66.5%, 并且能再生成叶状体。 总之,本研究初步建立了条斑紫菜原生质体的转基因体系,优化了电击法转 化条斑紫菜原生质体的条件,确定了Sv40启动子和CaMV35S启动子为有效的启 动子,cat基因可以作为选择性标记基因,以1 85 rDNA片段为同源臂的同源重 组型表达载体可以有效的表达外源基因。此外还首次成功地进行了条斑紫菜原生 质体的玻璃化冷冻保存,不仅为藻类的种质保存研究积累了资料,也可以为以后 紫菜原生质体的遗传转化操作随时提供理想的实验材料。这些研究为进一步通过 转基因的手段改良紫菜品种,实现以紫菜为生物反应器来大量生产外源蛋白奠定 了重要的基础。
【学位授予单位】:中国海洋大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S968.4

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【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 王娟;紫菜减数分裂与单性生殖的研究[D];中国海洋大学;2006年
2 宫倩红;条斑紫菜原生质体转基因的研究[D];中国海洋大学;2006年
【参考文献】
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1 杨官品,沈怀舜,许璞,张学成;条斑紫菜丝状孢子体表达序列标签分析[J];高技术通讯;2002年02期
2 耿德贵,王义琴,李文彬,孙勇如;GUS基因在杜氏盐藻细胞中的瞬间表达[J];高技术通讯;2002年02期
3 于道展,秦松,孙国琼,曾呈奎;β-半乳糖苷酶基因(lacZ)在大型经济海藻裙带菜中的瞬间表达[J];高技术通讯;2002年08期
4 杨锐,刘必谦,骆其君 ,王亚军,周湘池,戴继勋;利用扩增片段长度多态性(AFLP)研究坛紫菜的遗传变异[J];高技术通讯;2002年01期
5 徐涤,宋林生,秦松,Alessandro Pala,费修绠,曾呈奎;五个紫菜品系间遗传差异的RAPD分析[J];高技术通讯;2001年12期
6 郭宝太,戴继勋,王斌;真核藻质粒状DNA的研究进展[J];海洋通报;1999年02期
7 陈颖,赵世民,孙勇如;藻类基因工程研究进展及展望[J];海洋科学;1997年04期
8 孙爱淑,曾呈奎;悬浮生长的条斑紫菜膨大藻丝无性系的培养及产生壳孢子的研究初报[J];海洋与湖沼;1996年06期
9 严小军,秦松,曾呈奎;藻类分子生物技术两年评─—与藻类活性物质研究有关的生物技术[J];海洋与湖沼;1997年04期
10 武建秋,秦松,邓田,郭晓林,曾呈奎;氯霉素乙酰转移酶(CAT)基因在海带中的表达[J];海洋与湖沼;1999年01期
【共引文献】
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1 朱美霞,刘海清,张月永;应用RAPD-PCR分析棉花A基因组的起源与进化[J];安徽农业科学;2004年06期
2 黄磊,吕淑霞,张利,邵立东,张忠泽;航天生物技术研究进展[J];安徽农业科学;2005年09期
3 孙昌魁,刘清海,马桂荣;几株产活性物质的海洋细菌的分离与初步鉴定[J];氨基酸和生物资源;2001年01期
4 徐忠东,黄灿明,吴琴,余德明,刘刻;基因工程与农业[J];安徽教育学院学报(自然科学版);1998年01期
5 王成树,李增智;分子数据的遗传多样性分析方法(综述)[J];安徽农业大学学报(自然科学版);2002年01期
6 曹祥荣,束峰珏,张锡然,毕春明,李朝军,胡均,方笺阳;毛冠鹿与3种麂属动物的线粒体细胞色素b的系统进化分析[J];动物学报;2002年01期
7 李明,饶刚,魏辅文,方盛国,汤纯香,玉手英利;小熊猫种群遗传结构和地理分化[J];动物学报;2002年04期
8 曹丽荣,王小明,方盛国;从细胞色素b基因全序列差异分析岩羊和矮岩羊的系统进化关系[J];动物学报;2003年02期
9 黄族豪,刘袍发;陇东黄土高原石鸡的分子系统地理结构(英文)[J];动物学报;2004年04期
10 张立勋;阮禄章;安蓓;刘迺发;;西藏雪鸡青海亚种的种群遗传结构和地理变异[J];动物学报;2005年06期
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1 翟红;刘庆昌;;甘薯及其近缘野生种遗传转化的研究[A];作物科学研究理论与实践——'2000作物科学学术研讨会文集[C];2001年
2 CHEN Ming1 WANG Li-Xia2 PENG Xiang-Lei2 ZHONG Jin2 XU Hui-Jun1 LIN Zhong-Ping2* (1. Ministry Key Lab for Crop Genetics and Breeding, Institute of Crop Breeding and Cultivation of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, P.R.China; 2. State Key Laboratory of Protein Engineering & Plant Genetic Engineering, Peking University, Beijing 100871, P.R.China);Heat-inducible Expression of β-glucuronidase Gene in Tobacco[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
3 蔡旭;方伟武;;基于极大似然估计的分子序列修正Kimura双参数距离[A];中国运筹学会第七届学术交流会论文集(中卷)[C];2004年
4 罗正荣;艾鹏飞;张永卓;;植物遗传资源保存策略及柿属植物的超低温保存[A];第三届全国干果生产与科研进展学术研讨会论文集[C];2003年
5 张凤兰;;白菜根癌农杆菌介导法基因转化体系的建立[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
6 徐丽;张胜利;张建;陈颖;王兴智;朱筱娟;梁秀梅;;番茄抗黄瓜花叶病毒病基因转移的研究[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
7 王勇;吴国良;宋玉琴;;酚类物质在果树上的生理作用研究进展[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
8 林栖凤;邓用川;曾驰;陈菊培;徐立新;李冠一;;外源DNA导入豇豆引起变异的研究[A];植物分子育种——第四届全国植物分子育种学术研讨会论文集[C];2004年
9 TANG Nan-nan , LI Chun ( Departmenl of Applied Mathematics, University of Technology, Dalian 116024, P R china; Department of Mathematics, Bohai University, Jinzhou 121000, P R China);A simple method for constructing phylogenetic tree[A];大连理工大学生物医学工程学术论文集(第2卷)[C];2005年
10 Cheng Qi-qun , Lu Da-ru , Ma Ling-bo , Ma Chun-yan ( Key and Open Laboratory of Marine and Estuarine Fisheries, Ministry of Agriculture, East China Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Science, Shanghai 200090, China State Key Laboratory of Genetic Engineering, Institute of Genetics, School of Life Sciences, Fudan University, Shanghai 200433, China);Molecular evolution of Clupeidae fishes ( Osteichthyes:Clupeiformes) :information obtained from Genbank database[A];生物技术对水产业的促进作用——2005水产科技论坛论文集[C];2005年
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1 吕家森;海洋微生物抗肿瘤活性菌株的筛选及菌株B2817活性物质的研究[D];华南热带农业大学;2005年
2 杜金友;胡枝子干旱胁迫下渗透物质变化以及外源基因Sac B对美丽胡枝子的遗传转化研究[D];北京林业大学;2005年
3 杨荣仲;甘蔗C_4磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因植物表达载体构建及转化大豆研究[D];福建农林大学;2002年
4 齐力旺;华北落叶松体细胞胚胎发生与遗传转化系统建立的研究[D];中国林业科学研究院;2000年
5 蒋国芳;蚱总科昆虫线粒体细胞色素b基因序列及系统进化研究[D];陕西师范大学;2000年
6 周思军;大豆抗虫基因转移及其转化系统优化研究[D];东北农业大学;2000年
7 梅俊学;紫菜叶状体无性繁殖的研究[D];中国科学院海洋研究所;2000年
8 岳国峰;海带配子体和幼孢子体无机碳素营养的比较研究[D];中国科学院海洋研究所;2000年
9 易自力;外源基因转化南荻和籼稻的研究[D];湖南农业大学;2000年
10 潘庆杰;五龙鹅经济性状的标记及其分子系统发育关系的研究[D];东北农业大学;2001年
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1 马淑荣;吉林省靖宇县白山湖风景区(仁义砬子段)亚气生蓝藻的分类及生态学研究[D];东北师范大学;2007年
2 郝瑞文;农杆菌介导番茄和牛膝的遗传转化及霸王组培再生[D];西北大学;2005年
3 杨霞;依赖于pH的光系统I的光合特性[D];安徽农业大学;2005年
4 李广清;山茶花粉超低温保存研究[D];北京林业大学;2005年
5 刘北东;农杆菌介导几丁质酶基因转化大豆子叶节主要影响因素的研究[D];东北农业大学;2001年
6 崔欣;大豆子叶节受体系统的建立及农杆菌转化的研究[D];东北农业大学;2002年
7 刘华;盐地碱蓬SsPIP基因的分子克隆及在盐胁迫下的表达特性分析与大豆遗传转化系统的建立[D];山东师范大学;2003年
8 李颖;农杆菌介导的马铃薯转基因体系的建立[D];华中农业大学;2003年
9 赫英俊;DNA分子标记技术在海带种质鉴定中的应用[D];中国科学院海洋研究所;2000年
10 王艳梅;孔石莼主要化学组分的提取分析及多糖生物活性的研究[D];中国科学院海洋研究所;2000年
【同被引文献】
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1 魏新林,夏文水;甲壳低聚糖的特性研究[J];水产科学;2004年02期
2 吕琴,姜乃澄;食用海藻对肠道菌群及肠道微环境影响的研究[J];东海海洋;2002年02期
3 徐民俊;茅云翔;庄筠昀;张学成;;条斑紫菜孢子体cDNA文库构建及表达序列标签的初步分析[J];大连水产学院学报;2006年01期
4 肖美添,杨军玲,林海英,唐凤翔,孟春,石贤爱,郭养浩;紫菜多糖的提取及抗流感病毒活性研究[J];福州大学学报(自然科学版);2003年05期
5 刘石生,丘泰球,蔡纯,韩松涛;超声对壳聚糖降解作用的研究[J];广东工业大学学报;2002年03期
6 林晓芝,唐渝,张渊明,岑颖洲;海藻多糖的组成及结构光谱分析[J];化学通报;2005年12期
7 高洪峰,纪明侯,曹文达;南、北方坛紫菜多糖结构特征的比较研究[J];海洋与湖沼;1992年05期
8 高洪峰;不同生长期坛紫菜中藻胆蛋白的含量变化[J];海洋与湖沼;1993年06期
9 师然新,徐祖洪,李智恩;降解的角叉菜多糖的抗肿瘤活性[J];海洋与湖沼;2000年06期
10 史煣,史升耀;紫菜胶与紫菜琼胶[J];海洋科学;1994年01期
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1 徐民俊;条斑紫菜孢子体功能基因组特征及铁氧化还原蛋白亚基Ⅰ基因分析[D];中国海洋大学;2005年
2 沈颂东;条斑紫菜细胞培养与酶法育苗的工艺优化[D];青岛海洋大学;2000年
3 王娟;紫菜减数分裂与单性生殖的研究[D];中国海洋大学;2006年
4 范晓蕾;紫菜壳孢子萌发过程及其世代差异研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2007年
5 梅俊学;紫菜叶状体无性繁殖的研究[D];中国科学院海洋研究所;2000年
6 宫倩红;条斑紫菜原生质体转基因的研究[D];中国海洋大学;2006年
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1 曾庆国;坛紫菜纯系培育及微卫星标记检测的初步研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2004年
2 项文钰;实验室条件下紫菜生活史多样性的观察[D];苏州大学;2006年
3 周文君;条斑紫菜自由丝状体细胞学和超低温保存的研究[D];中国海洋大学;2006年
4 王孟强;条斑紫菜功能基因组特性与抗逆相关基因表达分析[D];中国海洋大学;2007年
5 杨春;条斑紫菜多聚泛素基因的克隆与系统进化分析[D];中国海洋大学;2007年
【二级参考文献】
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1 石金锋,贾建航,王萍,金德敏,许璞,费修绠,王斌,翁曼丽;紫菜无性系特异分子标记的获得[J];高技术通讯;2000年10期
2 王义琴,陈颖,白琴华,赵世民,李文彬,孙勇如;以小球藻为载体生产兔防御素的研究[J];高技术通讯;2001年09期
3 戴继勋,张全启,包振民,于波,周浩朗;紫菜原生质体的纯系培育、诱变处理和种间细胞融合的研究[J];海洋与湖沼;1990年03期
4 秦松,张健,李文斌,王希华,童顺,孙勇如,曾呈奎;用基因枪将GUS基因导入褐藻细胞中表达[J];海洋与湖沼;1994年04期
5 武建秋,秦松,邓田,郭晓林,曾呈奎;氯霉素乙酰转移酶(CAT)基因在海带中的表达[J];海洋与湖沼;1999年01期
6 王素娟,徐志东,王光远,夏镇澳;坛紫菜原生质体的超微结构观察[J];海洋科学;1986年04期
7 王素娟,孙云龙,路安明,王光远;坛紫菜营养细胞和原生质体培养研究——Ⅱ.直接育苗下海养殖的实验研究[J];海洋科学;1987年01期
8 武建秋,王希华,秦松,曾呈奎;海带基因工程选择标记的研究[J];海洋科学;1995年05期
9 鲍一明,储瑞银,韩晋华,张会,潘乃禾遂,顾孝诚,陈章良;天花粉蛋白基因的克隆、序列测定及在大肠杆菌和烟草中的表达[J];中国科学B辑;1992年09期
10 刘玉乐,王晋芳,邱并生,赵淑珍,田波;人乙肝病毒表面抗原基因在转基因烟草中的表达[J];中国科学B辑;1993年03期
【相似文献】
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1 陈喜文,陈德富,周朴华,李宗道;苧麻子叶原生质体的分离和初步培养[J];湖南农业大学学报;1995年02期
2 查向东,B.Kloarege;裙带菜配子体原生质体培养[J];安徽农业大学学报;1996年04期
3 胡张华,张志宏,颜秋生,张雪琴,陈锦清;水稻原生质体电融合适宜条件的研究[J];浙江农业学报;1997年03期
4 李思义;;多聚阳离子基因导入法特征[J];种子世界;1997年06期
5 马锋旺,李嘉瑞;杏原生质体的超低温保存[J];园艺学报;1998年04期
6 张红梅,王俊丽;植物原生质体游离、培养及应用[J];河北林果研究;2002年04期
7 林开江;董国强;张孟白;;植物细胞脱壁酶Cellulase ZA-P的制备和应用效果[J];浙江农业学报;1989年02期
8 李有忠,张德,强科斌;大豆根瘤内感染细胞原生质体的分离与活力检测[J];青海师范大学学报(自然科学版);1994年02期
9 蒋迪军,牛建新,蒋红东;新疆大无核白葡萄原生质体培养[J];果树学报;1995年S1期
10 李耿光;向日葵下胚轴原生质体高频率愈伤组织形成与根发生[J];植物生理学报;1996年03期
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1 卫志明;许智宏;;外源DNA转化高粱原生质体[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
2 刘永翔;刘作易;;戴氏绿僵菌原生质体的形成及再生[A];生命科学与微生物专辑[C];2004年
3 王鹏;李伟伟;朱迎紫;方侃;何森;孟凡欣;程瑛琨;;均匀设计法优化纤维堆囊菌ATCC15384原生质体的制备条件[A];吉林省第六届生命科学大型学术报告会论文集[C];2008年
4 王广策;叶乃好;曾呈奎;;藓羽藻原生质体再生植株的形成与发育[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
5 郭文武;Grosser JW;邓秀新;;柑橘原生质体操作技术与育种新进展[A];湖北省遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2004年
6 林栖凤;李冠一;;第一章 植物遗传转化的主要方法(一)[A];植物分子育种——第四届全国植物分子育种学术研讨会论文集[C];2004年
7 程红;周嫦;;三种植物幼嫩花粉原生质体的分离与培养[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
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9 王文涵;王丽达;许浩然;郑田;孟凡欣;刘洋;;响应面法优化纤维堆囊菌So ce 90原生质体的制备条件[A];吉林省第六届生命科学大型学术报告会论文集[C];2008年
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1 李旻本报实习记者 甘勃;基因敲除开启生命科学新纪元[N];大众科技报;2007年
2 姬十三;“基因敲除”敲开疾病之门[N];南方周末;2007年
3 本报记者 马建忠;三“狙击手”命中诺贝尔[N];医药经济报;2007年
4 本报记者 郑焕斌;修正遗传密码中的“乱码”[N];科技日报;2006年
5 本报记者 刘远芬;“基因靶向”奠基者获2007诺贝尔医学奖[N];医药经济报;2007年
6 本报记者 张佳星;基因靶向:让医生有了“瞄准镜”[N];科技日报;2007年
7 记者毛磊;剔除有病基因[N];人民日报;2003年
8 本报驻德国记者 李山;给枯燥的报告换个讲法[N];科技日报;2011年
9 彭志英;细胞工程在食品工业中的应用[N];粮油市场报;2001年
10 潘治;“基因靶向”技术:他们因此获诺贝尔奖[N];新华每日电讯;2007年
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1 刘红全;条斑紫菜的转基因研究[D];中国海洋大学;2004年
2 洪伟雄;甘蔗梢腐病病原菌—串珠镰刀菌分子生物学研究初探[D];福建农林大学;2011年
3 叶乃好;藓羽藻原生质体团聚、再生及其相关的应用研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
4 李艳丽;原生质体技术筛选刺芹侧耳高产多糖和漆酶菌株的研究[D];吉林农业大学;2012年
5 吕芳;羽藻再生过程中基因表达及其光合作用的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
6 朱逸;生殖细胞突变在淋巴细胞中功能检测模型的建立、分析和应用[D];复旦大学;2011年
7 张冬梅;稻瘟病菌Rab蛋白功能研究[D];福建农林大学;2009年
8 张学英;草莓(Fragaria ananassa Duch.)原生质体培养及植株再生研究[D];河北农业大学;2004年
9 张洪波;采用同源重组技术构建PrA低表达且能分泌LTP1的酿酒酵母菌株及其性能研究[D];浙江大学;2009年
10 郭刚;人幽门螺杆菌蒙古沙鼠适应性定植相关蛋白的鉴定及功能研究[D];第三军医大学;2004年
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1 赵硕;耐高渗(高糖)酵母菌株的选育[D];安徽农业大学;2010年
2 白忠彬;原生质体介导的外源性GRF基因在家兔及小鼠肌肉中的表达[D];延边大学;2002年
3 彭帅;电融合法构建海藻糖高产菌株的研究[D];吉林农业大学;2004年
4 张新峰;嗜热真菌高产木聚糖酶及其酶法制备低聚木糖的研究[D];湖北工业大学;2011年
5 王春丽;β-葡萄糖苷酶高产菌株的选育及玉米芯的诱导作用研究[D];北京化工大学;2010年
6 孟国庆;头孢菌素C高产菌株选育及发酵特性研究[D];山东轻工业学院;2011年
7 谢华永;杨树胚性悬浮细胞系建立与原生质体融合研究[D];南京林业大学;2004年
8 张宇昊;康氏木霉的原生质体诱变及玉米秸秆发酵酒精工艺研究[D];河北农业大学;2004年
9 周海霞;灭活原生质体融合选育α-ALDC-高产菌株[D];河北大学;2004年
10 周正;紫外诱变克鲁维酵母原生质体选育发酵乳清高产酒精菌株[D];河北农业大学;2004年
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