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《中国海洋大学》 2004年
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牙鲆血清免疫球蛋白纯化、抗体制备及免疫组化研究

孙峰  
【摘要】:牙鲆(Paralichthys olivaceus)是我国沿海网箱及池养的一个重要鱼种,目前病害日趋严重,如大量使用抗生素会危害人类的食品安全,而利用疫苗防治疾病具有明显的优越性。因此研究鱼类免疫系统的基本结构和功能,具有重要的理论意义和应用前景。制备针对免疫球蛋白的多克隆或单克隆抗体,作为研究工具,对免疫器官中产生抗体的组织和细胞进行定位,可以了解免疫器官在防御疾病过程中是如何发挥作用的,以便对应用疫苗奠定理论基础。制备多克隆或单克隆抗体的关键就是分离纯化出尽可能多的纯度较高的免疫球蛋白,为此本文对免疫球蛋白的纯化进行了探讨,并制备了多克隆抗体和应用免疫组化方法对牙鲆的主要免疫器官进行了研究。 运用两种方法对牙鲆的血清免疫球蛋白进行分离纯化,证明了Sephacryl S-200和HiTrap rProtein A Sepharose在纯化牙鲆血清免疫球蛋白的有效性,并纯化了一定量的牙鲆血清免疫球蛋白,同时测定了牙鲆血清免疫球蛋白的分子量为836kDa,其重链分子量为75.4kDa,具有分子量分别为29.9kDa和28.3kDa的两类轻链。 以提纯的免疫球蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备了兔抗牙鲆血清免疫球蛋白多克隆抗体,用免疫双扩散法检测多克隆抗体效价1:32,免疫斑点法检测多克隆抗体效价至少为1:2000以上。运用免疫印记法检测了兔抗牙鲆血清免疫球蛋白多克隆抗体的特异性,实验证明其能与牙鲆全血清中免疫球蛋白重链、轻链反应,而与人血清IgM无交叉反应。 利用自制的兔抗牙鲆血清免疫球蛋白多克隆抗体研究了产生免疫球蛋白的B淋巴细胞在牙鲆主要免疫器官中的分布。免疫组化方法检测出了牙鲆血液中产生免疫球蛋白的淋巴细胞,在牙鲆的头肾、体肾和脾的基质中都有产生免疫球蛋白的淋巴细胞存在,从数量上看头肾中最多,脾中次之,体肾中最少。 研究牙鲆黏膜样淋巴组织结果显示在牙鲆的后肠中存在大量产生免疫球蛋白的淋巴细胞,主要分布于后肠的固有层和粘膜下层中,在粘膜层和粘膜层表面也偶有极少量的产生免疫球蛋白的淋巴细胞出现。
【学位授予单位】:中国海洋大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S941

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【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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6 曾立波;陈连康;胡小龙;张玉荣;张润生;曹芳琦;骆华;;胶体金法吗啡-甲基苯丙胺二合一免疫层析试剂盒的研制[A];公共安全中的化学问题研究进展(第二卷)[C];2011年
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7 郭昊;白介素35基因治疗协同地西他滨抑制小鼠心脏移植排斥反应的研究[D];天津医科大学;2011年
8 迟春萍;人铜锌超氧化物歧化酶在毕赤酵母中高表达及其中试工艺研究[D];吉林农业大学;2011年
9 陈杨;PPV和PCV2核酸疫苗及PRV-PPV-PCV2基因工程疫苗的研究[D];四川农业大学;2011年
10 张博;H1N1亚型猪流感病毒分离鉴定、鉴别诊断及M2e重组质粒免疫效力研究[D];四川农业大学;2011年
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1 曲丽洁;用于动物性食品中莱克多巴胺快速检测的SPR技术研究[D];华中农业大学;2010年
2 张利芳;苦瓜多糖的纯化及其免疫和抗氧化活性作用[D];华中农业大学;2010年
3 张燕;长江草鱼群体MHC Class Ⅱ B基因的克隆、表达及多态性分析[D];华中农业大学;2010年
4 徐娟;T-2毒素多克隆抗体的制备及其化学发光免疫检测的初步研究[D];华中农业大学;2010年
5 高建军;泥鳅的血液学及湖北省泥鳅群体的遗传多样性研究[D];华中农业大学;2010年
6 谭雯雯;猪β-防御素2多克隆和单克隆抗体的制备及初步应用[D];华中农业大学;2010年
7 崔翔;动物可食组织中安眠酮残留的ELISA检测方法研究[D];华中农业大学;2010年
8 费晶晶;两个家蚕FKBP12基因的研究[D];浙江理工大学;2010年
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10 朱立明;家蚕TRAPα基因的表达与功能分析[D];浙江理工大学;2010年
【同被引文献】
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1 李正;李健;刘淇;王群;;黏红酵母对牙鲆肠黏液黏附及肠道定植规律的研究[J];安徽农业科学;2008年17期
2 陈士友,陈溥言,蔡宝祥,钱建飞;禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立[J];病毒学报;1991年03期
3 田敬云,谢海侠,姚卫建,聂品;鳜鱼头肾的组织发生及成鱼头肾B淋巴细胞的分布[J];动物学报;2005年03期
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【二级引证文献】
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1 王星星;表面展示甲基对硫磷水解酶的解脂耶罗威亚酵母工程菌的构建及全细胞酶固定化研究[D];中国海洋大学;2013年
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【二级参考文献】
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6 常忠岳,卢岩,胡志伟;工厂化养殖牙鲆生长及成活因素探讨[J];河南水产;2002年01期
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10 刘虹;;手足口病患儿免疫功能临床分析[A];全国第2届中西医结合传染病学术会议暨国家中医药管理局第1届传染病协作组会议论文汇编[C];2008年
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10 无锡市第一医院 陆基宗;胎盘不是吃了会长寿的“唐僧肉”[N];卫生与生活报;2006年
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4 乌日琴;牙鲆鲆淋巴细胞的免疫反应动力学研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2003年
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8 陈炫;溃给宁合剂治疗溃疡性结肠炎的临床研究[D];成都中医药大学;2001年
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10 田敬云;鳜B淋巴细胞的发生和T淋巴细胞受体基因的克隆[D];中国科学院研究生院(水生生物研究所);2007年
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3 金春华;癫痫大鼠神经细胞核转录因子表达及免疫球蛋白对其表达的影响[D];延边大学;2006年
4 李晓舟;亚麻木脂素对雏鸡生长及免疫机能的影响[D];东北农业大学;2007年
5 沈红石;骨髓瘤细胞系KM3中免疫球蛋白重链基因易位的初步研究[D];第二军医大学;2000年
6 田亚光;颊粘膜细胞IL-1β表达及血清免疫球蛋白含量与慢性牙周炎相关关系的研究[D];中国医科大学;2005年
7 吴颖洁;椎间盘炎动物模型的建立及自免疫状态的研究[D];天津医科大学;2007年
8 李建磊;牛初乳中免疫球蛋白的提取及其保护剂研究[D];河北农业大学;2008年
9 王成虎;不同类型过敏性紫癜患儿免疫功能的变化趋势及意义[D];山西医科大学;2008年
10 刘文君;益生菌与早产儿院内感染[D];中国协和医科大学;2009年
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