中药海藻海蒿子多糖的分离与鉴定及其抗肿瘤活性初步研究

【摘要】：本文以我国的传统海洋中药—海蒿子作为试验材料,对其中的多糖进行了提取、分离鉴定和抗肿瘤活性初步研究。海蒿子多糖主要由褐藻糖胶、褐藻胶和褐藻淀粉组成,其中褐藻糖胶具抗凝血、抗病毒、抗肿瘤、抗炎和抗感染等活性。通过水提取法获得褐藻糖胶SPC(25℃提取)和SPH(85℃提取)。褐藻糖胶经乙醇分部沉淀、分级获得4个褐藻糖胶组分SPC60(60%乙醇沉淀,下同),SPC70,SPH60,SPH70。对4个组分进行了理化性质、分子量、单糖组成和红外光谱分析,揭示了各组分在组成与基本性质上的区别,证明不同的提取温度和不同浓度的乙醇醇沉可以获得性质不同的褐藻糖胶;通过离子交换和凝胶柱层析技术分离获得电荷、分子量均单一的褐藻糖胶组分P3和P4。系统比较了组分SPH70P3和SPH70P4的差别,证明了相同条件下提取的粗褐藻糖胶经柱层析分离可以获得不同的组分。通过理化性质分析、单糖组成、红外光谱分析、甲基化和高碘酸氧化等分析手段确定了纯化褐藻糖胶SPH70P4的基本特征:总糖含量82.15%,糖醛酸含量3.42%,硫酸基含量16.38%;分子量410 kD;红外光谱显示C-O-S伸缩振动吸收在840 cm~(-1);单糖组成为鼠李糖、岩藻糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖。结构特点为:多糖存在主要以岩藻糖,甘露糖和半乳糖组成的多糖骨架,硫酸基和糖链分支主要连接于该骨架上,其分子量为280 kD,不被高碘酸氧化;多糖链主要有1→2,4、1→3连接的岩藻糖和1→2,3,4和1→3,4,6连接的甘露糖、1→3,6连接的半乳糖构成;多糖的分支点主要位于己糖(甘露糖和半乳糖)上;侧链主要为葡萄糖;糖链末端为木糖;硫酸基主要连接于岩藻糖的2位或者3位;多糖链不存在三股螺旋。 利用MTT法观察多糖对肿瘤细胞A549,P388的生长抑制作用,没有发现显著作用,但是硫酸基含量最高的SPH70P4活性最强。