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《中国海洋大学》 2005年
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家兔(Oryctolagus curiculus)角膜内皮细胞系的建立及其生物相容性研究

于秋涛  
【摘要】:角膜内皮盲是一种常见的角膜病,尽管可以通过角膜移植来治愈,但由于角膜的捐献数量极其有限和患者的排斥反应而使许多患者无法重见光明。人工角膜组织工程技术是当今治疗角膜内皮盲等的研究热点,其亟需解决的关键问题之一是如何获得足量的角膜内皮细胞。而角膜内皮细胞的规模化体外培养是获得大量角膜内皮细胞的理想途径,也是人工角膜的重要研究内容之一,对于角膜病理生理学、药理毒理学、免疫学、分子生物学研究均具有重要意义。但到目前为止,仍没见到有关家兔角膜内皮细胞未经转染而成功建系的报道。为了探索哺乳动物角膜内皮细胞的建系技术,以便为组织工程化人工角膜提供足量的细胞材料,本文以家兔角膜内皮为材料,对角膜内皮细胞的体外培养、细胞系的建立及其鉴定展开了研究。 为了成功启动家兔角膜内皮细胞的体外培养,本文取活家兔的角膜,用氯化汞溶液和庆大霉素依次进行消毒,经0.25%胰蛋白酶液部分处理角膜内皮层后,将角膜内皮面朝下贴于24孔培养板中,补加含有硫酸软骨素、硫酸软骨素氧化降解物、羧甲基壳多糖、N-乙酰葡萄糖盐酸盐、氨基葡萄糖盐酸盐、家兔角膜基质细胞培养液、牛眼生素、EGF和bFGF的DMEM-F12培养液(20%胎牛血清),置入37℃、5%CO_2培养箱中培养。为了获得纯净的角膜内皮细胞,每隔12~48小时进行揭膜和转孔再培养,进而成功启动了家兔角膜内皮细胞的原代培养。原代培养中的角膜内皮细胞多为四角形或多边形,一周后逐渐伸展成为多角形的内皮样,三周后细胞长成单层,此时细胞饱满、透光性好。待角膜内皮细胞长成单层后,便采用胰蛋白酶消化法进行传代培养。传代培养中的细胞,开始时绝大多数为多角形内皮样形态,但随着传代次数增加,逐渐转变为内皮样与成纤维样两种细胞形态共存的生长状态。传至第49代的角膜内皮细胞,主要呈现为成纤维样细胞形态,其生长与分裂状况良好。此时,细胞群体的倍增时间为2.24天,
【学位授予单位】:中国海洋大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R329

【引证文献】
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1 王洋;刑春生;周星;王磊;韩宏光;;人工角膜材料分类及材料表面改性和生物相容性的研究[J];中国组织工程研究;2012年16期
【参考文献】
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1 姚子昂,韩宝芹,刘伟治,刘万顺;壳聚糖-硫酸软骨素共混膜性质的研究[J];高技术通讯;2001年12期
2 袁进,周文天,周辉,兰绪达;兔角膜内皮细胞体外原代培养及形态学观察[J];美中国际眼科杂志;2001年03期
3 屈雷,王馨,杨学义,窦忠英;家兔角膜内皮细胞的快速培养[J];国际眼科杂志;2004年02期
4 杨鹏,刘瑶,曾水林,张会保;兔角膜内皮细胞的新法培养[J];东南大学学报(医学版);2001年03期
5 马路生,杨朝忠;角膜内皮细胞凋亡的研究现状[J];眼科新进展;2000年06期
6 郭萍,谢立信,董晓光,史伟云;人角膜缘干细胞在体外不同载体上培养的实验研究[J];眼科研究;2001年04期
7 胡晓洁,商庆新,曹谊林;角膜基质细胞-PGA生物支架复合物体外培养研究[J];眼科研究;2001年04期
8 张胜,陈家祺,郭琳洁,杨琨;人胚肺成纤维细胞饲养兔角膜上皮和内皮细胞的体外培养[J];眼科研究;2001年05期
9 傅瑶,范先群,刘伟,商庆新,曹谊林;以羊膜为载体培养角膜内皮细胞的实验研究[J];眼科研究;2003年02期
10 邢枫 ,郭浩轶 ,张月琴;眼生素滴眼液治疗角膜上皮持续性缺损的临床观察[J];眼科研究;2003年02期
【共引文献】
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1 李金良;周才根;;生物降解材料聚乳酸及其共聚物的降解研究[J];工程塑料应用;2011年10期
2 丘晓琳,李国明;药库型微型胶囊囊材研究进展[J];安徽化工;2004年01期
3 张洁琼;曹健;李艳芳;田广兰;;聚乳酸的合成·生物降解及应用研究现状[J];安徽农业科学;2010年31期
4 严涵;杨延慧;崔园园;徐静;陈红;康晓梅;陈晓浪;张志斌;;聚乙二醇在生物材料中的应用研究[J];安徽农业科学;2011年25期
5 徐多文;戴采云;李广明;刘艳娜;;原位反应烧结制备生物陶瓷[J];鞍山师范学院学报;2007年02期
6 吕若静,李玉晶,姚培;初萌年轻恒牙釉质组织结构的特点[J];北京口腔医学;2003年03期
7 王瑾,程为庄;玻璃离子水门汀的研究进展[J];北京生物医学工程;2005年02期
8 任杰,陈云华;聚磷腈的研究和生物医学应用[J];北京生物医学工程;2005年02期
9 王承遇,潘玉昆,陶瑛;21世纪新玻璃的发展[J];玻璃与搪瓷;2002年03期
10 时惠英;李育磊;蒋百灵;;低压沉积-微弧氧化制备钛金属HA-TiO_2复合膜层[J];表面技术;2011年05期
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1 冯博华;周长忍;屠美;;取向聚氨酯/液晶复合膜血液相容性材料的表面形态表征[A];第4届全国医药行业膜分离技术应用研讨会论文集[C];2007年
2 王涵;张华;;纳米生物医用材料的研究及发展趋势[A];第六届功能性纺织品及纳米技术应用研讨会论文集[C];2006年
3 薛成骞;曹宁;陈华英;李木森;;C/C+HA涂层复合材料对山羊骨缺损修复的组织学和生物相容性研究[A];第十二届中国体视学与图像分析学术会议论文集[C];2008年
4 李芳;王全杰;侯立杰;王延青;;明胶微胶囊的应用现状与发展趋势[A];2010年全国皮革化学品会议论文集[C];2010年
5 李伯琼;陆兴;侯健;滕颖丽;;烧结多孔钛的显微组织和孔隙特征[A];第六届中国功能材料及其应用学术会议论文集(5)[C];2007年
6 李伯琼;李志强;陆兴;;孔隙结构对多孔钛耐蚀性能的影响[A];第七届中国功能材料及其应用学术会议论文集(第5分册)[C];2010年
7 刘诚;张英;袁红梅;;自体角膜缘移植联合应用丝裂霉素C治疗复发性翼状胬肉[A];2007年贵州省医学会眼科学分会第五届第三次学术年会论文汇编[C];2007年
8 华坚;彭旭东;郑庆康;王怀超;赵敏;左少纯;;桑皮纤维的结构和性能研究[A];第十届陈维稷优秀论文奖论文汇编[C];2007年
9 肖桂勇;吕宇鹏;朱瑞富;许文花;王爱娟;;热处理和SBF浸泡对羟基磷灰石涂层力学性能的影响[A];第九次全国热处理大会论文集(二)[C];2007年
10 任妮;马占吉;肖更竭;武生虎;程峰;;NiTi合金生物医用材料表面镀类金刚石薄膜的性能研究[A];全国薄膜技术学术研讨会论文集[C];2006年
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1 戚晓红;聚天冬氨酸高分子纳米载体药物的制备、表征及性能研究[D];南京医科大学;2009年
2 赵君;组织工程人角膜内皮的体外重建及其在兔角膜内皮移植中的作用研究[D];中国海洋大学;2010年
3 吴迪;微波辐射法聚乳酸及其共聚物的合成与性能研究[D];陕西师范大学;2010年
4 孟永春;胶原与生物活性玻璃作用机理及其复合骨修复材料的研究[D];华南理工大学;2010年
5 雷波;新型微纳米生物活性玻璃的研制及性能研究[D];华南理工大学;2010年
6 刘强;基于优化血液相容性的生物医用金属材料表面设计与改性[D];江苏大学;2010年
7 肖桂勇;雾化干燥法制备羟基磷灰石微球的结构表征及其生物学行为研究[D];山东大学;2010年
8 陈欣;蛋白质在不同界面的识别、吸附及稳定性研究[D];浙江大学;2009年
9 吴波;电化学合成羟基磷灰石涂层及其性能研究[D];大连理工大学;2011年
10 卢建民;小鼠角膜基质细胞的间充质干细胞样表型和多向分化潜能以及抑制树突状细胞成熟的功能[D];河北医科大学;2011年
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1 吕彩霞;n-HA/CS复合材料的制备、性能表征及其应用研究[D];河北大学;2007年
2 贺睿;AZ81基稀土镁合金组织与腐蚀性能的研究[D];河南理工大学;2010年
3 沈锦玉;丝素蛋白/β-硅酸钙复合多孔支架的结构及其性能研究[D];浙江理工大学;2010年
4 潘明利;重组胶原蛋白调控钛表面仿生矿化的研究[D];浙江理工大学;2010年
5 牛方;磷酸酯粘结剂诱导生成羟基磷灰石晶体的实验研究[D];郑州大学;2010年
6 马群;壳聚糖基角膜内皮组织工程载体支架的制备及性能评价[D];中国海洋大学;2010年
7 赵国燕;壳聚糖衍生物对角膜细胞生长影响的研究[D];中国海洋大学;2010年
8 曾亮;纳米羟基磷灰石表面改性及其增强PCL复合材料性能研究[D];湘潭大学;2010年
9 杨萌;n-HA/PA66及Mg-Zn-Zr/HA复合材料的生物相容性研究[D];天津理工大学;2010年
10 占磊;玻璃转变羟基磷灰石多孔体在水处理的应用[D];华东理工大学;2011年
【同被引文献】
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1 胡惠静;卢婷利;陈涛;;生物医用眼科材料的研究[J];材料导报;2009年07期
2 许凤兰,李玉宝,姚晓明,王学江;纳米羟基磷灰石/聚乙烯醇复合人工角膜材料[J];复合材料学报;2005年01期
3 潘东艳,柳林;板层角膜移植术手术方式及植片材料研究进展[J];国际眼科杂志;2005年04期
4 马骁;李朝辉;黄一飞;陆玉杰;王乐云;黄靖香;;经羟基磷灰石处理的纯钛表面有利于角膜成纤维细胞的粘附和增殖(英文)[J];国际眼科杂志;2007年01期
5 陈佳佳;黄振平;;人工角膜研究进展[J];国际眼科杂志;2008年03期
6 郭萍;陈家祺;黄丽娜;王铮;王智崇;聂丹瑶;;改良聚羟乙基丙烯酸甲酯-聚甲基丙烯酸甲酯一体化人工角膜植入兔与猴角膜的实验研究(英文)[J];国际眼科杂志;2009年04期
7 牟元华,李玉宝,张翔,吕国玉,左奕,许凤兰;一种制备纳米羟基磷灰石/聚乙烯醇多孔支架材料的新方法[J];功能材料;2005年10期
8 闫莹;人工角膜的进展[J];国外医学(眼科学分册);2004年01期
9 许凤兰,李玉宝,李吉东,杨维虎;多孔纳米羟基磷灰石/聚乙烯醇复合水凝胶的表征[J];化学研究与应用;2005年05期
10 白华,高峰,黄一飞,胡平;新型PHEMA一体式人工角膜植入碱烧伤兔角膜的实验研究[J];解放军医学杂志;2003年12期
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1 余继锋;MICOF人工角膜在角膜盲患者中的应用研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
2 董莹;钛支架人工角膜生物相容性的临床和实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
3 庞鵾鹏;以异种脱细胞角膜基质构建组织工程兔角膜前板层的实验研究[D];山东大学;2011年
4 李艳;新颖的软性人工角膜的研制及生物学评价[D];青岛大学;2002年
5 贺君;角膜内皮细胞体外培养的研究[D];中国海洋大学;2004年
6 许凤兰;纳米羟基磷灰石/水凝胶人工角膜研究[D];四川大学;2005年
7 马骁;羟基磷灰石表面修饰的人工角膜钛支架生物相容性实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2007年
8 谷树严;以纤维蛋白为基质网架的组织工程角膜上皮的构建及移植实验研究[D];吉林大学;2007年
9 位晓娟;多糖生物膜体外构建兔角膜内皮细胞载体及移植的研究[D];中国海洋大学;2007年
10 赵清梅;山羊角膜上皮细胞与角膜内皮细胞分离培养研究[D];西北农林科技大学;2008年
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1 马群;壳聚糖基角膜内皮组织工程载体支架的制备及性能评价[D];中国海洋大学;2010年
2 戎慧丰;兔眼移植重组人Ⅲ型胶原基组织工程角膜的实验研究[D];天津医科大学;2011年
3 蒙艳春;改性PHEMA一体式人工角膜周边材料的实验应用研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年
4 赵宏霞;组织工程人工角膜胶原支架材料的制备及其性能研究[D];暨南大学;2002年
5 白华;P(HEMA)—体式人工角膜植入碱烧伤兔角膜的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2003年
6 曹鹏;眼科用壳聚糖共混膜的性质及其生物相容性的研究[D];中国海洋大学;2004年
7 熊洁;纳米HA/PVA多孔复合水凝胶人工角膜的组织相容性研究[D];四川大学;2006年
8 郎莉莉;新型非穿透一体式人工角膜的研制及动物实验[D];同济大学;2006年
9 孟浩;去细胞猪角膜基质为支架材料组织工程角膜的构建与应用[D];第四军医大学;2007年
10 寸青;PMMA一体式人工角膜植入碱烧伤兔眼角膜的实验研究[D];昆明医学院;2008年
【二级参考文献】
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1 坑彩霞,洪涛,邹留河,张士元;角膜保存的研究进展[J];国外医学.眼科学分册;1993年05期
2 吕岚;角膜内皮细胞移植的研究[J];国外医学.眼科学分册;1994年01期
3 谭浅,杜岱雪,许雪亮,蒋幼芹,祝和成;家兔角膜内皮细胞体外原代培养的实验研究[J];湖南医学;2000年02期
4 蒋华,王焕旭,张康兰,林庆华,姜莉华;糖尿病与非糖尿病白内障病人人工晶体植入后角膜内皮形态学分析[J];解放军医学杂志;1997年06期
5 谢立信;;角膜内皮黑区[J];眼科新进展;1984年04期
6 谢全锦;龚向明;林宁;邵妙容;;新生儿角膜内皮动态变化[J];眼科新进展;1989年01期
7 董晓光;谢立信;B.M.Gebhardt;H.E.Kaufman;;人角膜内皮细胞的原代培养及形态学观察[J];眼科新进展;1991年02期
8 张少斌;杨连洲;谢立信;;胎儿角膜内皮细胞数的动态观察[J];眼科新进展;1992年03期
9 龚向明,林宁,谢全锦,邵妙容;庆大霉素对角膜内皮的影响——组织培养实验研究[J];眼科研究;1989年04期
10 王丽娅,李辰,曾耀英,李志杰;角膜内皮细胞培养方法的改进[J];眼科研究;1995年03期
【相似文献】
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1 王晓晖;王万辉;何敏;;0.2%利多卡因家兔前房内注射对角膜内皮细胞的影响[J];山西医科大学学报;2006年02期
2 黎璧莹;;对角膜内皮细胞有危险的抗菌素[J];国外医学情报;1981年08期
3 张文佳;胡竹林;;体外培养的角膜内皮细胞移植研究新进展[J];眼科新进展;2008年12期
4 张廷钺,于纯智,马吉献,魏正乾,刘健,谷法有,李学荣,杨传红;保存兔角膜内皮细胞形态学的研究[J];眼科研究;1991年01期
5 车成业;赵桂秋;张丽丽;;慢性高眼压状态下水通道蛋白-1在家兔角膜内皮细胞的表达变化[J];眼科研究;2010年09期
6 王晓晖;王万辉;何敏;;0.04%倍诺喜对角膜内皮细胞影响的实验研究[J];临床医药实践杂志;2006年04期
7 杜海涛;傅少颖;崔静;;bFGF和PDGF对家兔角膜内皮损伤修复作用的研究[J];眼外伤职业眼病杂志(附眼科手术);2007年12期
8 屈雷;敬晓棋;杨学义;闫海龙;窦忠英;;体外快速构建角膜内皮的初步研究[J];西北农业学报;2009年04期
9 杨佩菲;前房冲洗与角膜内皮的电子显微镜扫描研究[J];国际眼科学纵览;1983年02期
10 周韵秋,朱莉,奚寿增,王志英;正常人角膜内皮的初步观察[J];第二军医大学学报;1987年04期
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1 郭万华;谷子林;刘亚娟;王增利;;野生葎草对家兔生产性能及血清生化指标的的影响[A];京津冀畜牧兽医科技创新交流会暨新思想、新观点、新方法论坛论文集[C];2008年
2 乔西波;栾新;李标;姜运良;樊新忠;;家兔MSTN基因SNPs及其与肉用性能关系的研究[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
3 周红梅;郭晓令;徐宁迎;;C.elegans fat-1基因克隆及其家兔表达载体构建[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
4 劉漢紳;王輔才;郭寶彥;;海馬結構對於大腦感覺運動區優勢灶的影響[A];中国生理科学会学术会议论文摘要汇编(生理)[C];1964年
5 王子棟;林文山;王志安;賀維彥;;家兔心臟活動的描記方法[A];中国生理科学会学术会议论文摘要汇编(生理)[C];1964年
6 許欣成;趙振玲;張素華;崔乃麗;;家兔飢餓期中胃運動的描記[A];中国生理科学会学术会议论文摘要汇编(生理)[C];1964年
7 杨鸣琦;周宏超;吴礼平;高亚军;;家兔急性试验性汞中毒的病理组织学观察[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分第12次暨中国动物病理生理学专业委员会第11次学术讨论会论文集[C];2003年
8 王炜;高光凯;吴镝;石永亮;杨鹰;王淑欣;鲍新平;;快速减压对家兔脊髓组织学的影响[A];第六届全国生物医学体视学学术会议暨第九届全军军事病理学学术会议、第五届全军定量病理学学术会议论文汇编[C];2005年
9 韦以宗;韦春德;韦云锋;高尚;韦育辉;;腰大肌作用与腰曲关系的动物实验研究[A];全国中医药创新与发展研讨会专辑[C];2005年
10 张建明;曹烨民;郑云龙;陈强;葛新;罗振东;方圆;;清营化瘀颗粒防治家兔急性下肢深静脉血栓形成的实验研究[A];中国医师协会中西医结合医师分会成立大会暨第一届年会会议资料[C];2007年
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1 河南科技大学动物科技学院 庞有志;家兔品种的选种与选育[N];中国畜牧兽医报;2009年
2 梁久梅;家兔胃扩张病的症状及治疗[N];山东科技报;2009年
3 沈莉;防治家兔冬季常见病技法[N];山西科技报;2009年
4 河南省科学院生物研究所副研究员 向前;家兔夏繁困难多 多项措施促生产[N];河南科技报;2010年
5 陈冬;家兔快育肥[N];山西科技报;2003年
6 秀平 邵敏;家兔春配 注意四点[N];山东科技报;2004年
7 ;家兔流涎症的治疗[N];中国畜牧兽医报;2009年
8 刘玉平 潘虹;家兔中毒的抢救[N];中国畜牧报;2002年
9 ;家兔引种学问多[N];中国畜牧兽医报;2008年
10 叶恩;做好家兔秋季防疫[N];农民日报;2001年
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1 罗洪波;COX-2基因在人前列腺癌细胞中的表达及其选择性抑制剂的作用研究[D];中南大学;2003年
2 龙继蓉;中国家兔遗传多样性研究[D];四川农业大学;2001年
3 宋静;小分子化合物J2作用于大鼠角膜细胞的体外及体内实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
4 史树堂;淋巴瘀滞对家兔胰肝肾组织结构和功能影响的实验研究[D];河北医科大学;2010年
5 罗文娟;人血小板源性生长因子基因B转染体外培养猫角膜内皮细胞的生物学效应[D];青岛大学;2005年
6 位晓娟;多糖生物膜体外构建兔角膜内皮细胞载体及移植的研究[D];中国海洋大学;2007年
7 陈修煦;人结肠癌细胞系对5-氟尿嘧啶(5-FU)与顺铂(CDDP)敏感性相关分子标记研究[D];浙江大学;2002年
8 李文;沙立度胺对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长和血管生成的影响[D];四川大学;2004年
9 王凤玮;辐射与鼻咽癌细胞凋亡及其相关基因表达关系的研究[D];中国协和医科大学;1997年
10 宿烽;有机锡化合物和烟碱类杀虫剂对牙鲆鱼鳃细胞株(系)的毒性效应与机理研究[D];中国海洋大学;2005年
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1 于秋涛;家兔(Oryctolagus curiculus)角膜内皮细胞系的建立及其生物相容性研究[D];中国海洋大学;2005年
2 王慧利;家兔卵母细胞生发泡染色质构型的研究[D];山东农业大学;2007年
3 李孝成;家兔腹主动脉瘤模型的建立[D];中南大学;2008年
4 王晋垚;输尿管部分梗阻家兔Rock-Ⅱ激酶在输尿管平滑肌组织中表达及意义[D];山西医科大学;2009年
5 李战永;严重烫伤家兔球结膜微循环的动态观测与研究[D];河北医科大学;2002年
6 李鹰;利用微卫星分析家兔遗传多样性[D];四川农业大学;2003年
7 黄惠斌;不同程度急性等容性血液稀释对家兔肺及全身氧代谢的影响[D];福建医科大学;2008年
8 陈建尧;应用钛夹行家兔小肠端端吻合术的初步试验性研究[D];浙江大学;2005年
9 赵福琴;盐霉素对家兔急性、亚慢性毒性机理的研究[D];河北农业大学;2005年
10 梁彦;高压电烧伤后深筋膜微循环的实验研究[D];河北医科大学;2004年
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