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《中国海洋大学》 2005年
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栉孔扇贝线粒体DNA的初步研究

徐俊  
【摘要】:栉孔扇贝Chlamys farreri属于软体动物门(Mollusca)、双壳纲(Bivalvia)、珍珠贝目(Pterioida)、扇贝科(Pectinidae)、扇贝属(Chlamys),主要分布于我国的辽宁、山东半岛,属于北方的冷水种,是我国重要的经济养殖型贝类。本文采用蔗糖差速离心DNase酶消化法、碱变性法、Triton去膜法等几种常用线粒体DNA提取法,分别提取栉孔扇贝肌肉组织和性腺的mtDNA。根据扇贝材料的特点、各方法的原理、步骤、特点及效果进行了对比分析,强调了几个关键性步骤,最终建立起一套成熟、可行的操作流程。同时观察到栉孔扇贝的mtDNA大小在25kb~35kb之间,随个体出现差异。 通过对栉孔扇贝、华贵栉孔扇贝16S rRNA片段的扩增、回收纯化、测序,得到两条序列。根据序列的差异设计各自的选择性引物:HG2/SB、ZK2/SB、SAGG/SBAA,前者在华贵栉孔扇贝中扩增出310bp的片段,后两者在栉孔扇贝中分别扩增出347bp、634bp的片段。使用这3对引物可以鉴别栉孔扇贝和华贵栉孔扇贝,简便快捷,在亲代中验证正确率达100%。用这3对引物对128个正、反杂交子代进行验证,结果子代的线粒体类型与母本完全相同,说明扇贝种间杂交过程中线粒体仅仅或者主要遵循母系遗传的方式。 扩增出栉孔扇贝COⅠ基因片段,得到718bp大小的产物。使用BamHⅠ、HaeⅢ、MboⅠ、MseⅠ、RsaⅠ、PstⅠ等内切酶对36个个体的该片段进行多态性分析,仅检测到两个多态位点。随后使用DHPLC对突变位点进行验证,建立起使用DHPLC检测扇贝mtDNA突变位点的方案,并使用该方案检测相同个体不同组织的扩增产物,结果没有发现异质性现象,推测栉孔扇贝不具有类似贻贝的DUI遗传方式。
【学位授予单位】:中国海洋大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S917.4

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