收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

应用双特异分子探针技术对圆海链藻(Thalassiosira rotula)进行定性定量检测研究

李秀芹  
【摘要】:对海洋浮游植物进行分离、纯化、种类鉴定和定性定量检测是浮游植物研究中最重要的工作之一。对于浮游植物的检测与鉴定,传统的研究方法为形态学观察,随着现代科技的发展,一些先进的技术已经应用到浮游植物检测中,比如核酸杂交技术、分子免疫技术、实时荧光定量PCR及流式细胞术,另外HPLC技术也应用到浮游植物检测中来。目前利用分子生物学技术已经可以直接对单个浮游植物细胞进行操作。当前研究的热点是应用核酸探针技术对浮游植物进行定性定量分析,特别是原位杂交和三明治杂交在浮游植物检测中应用比较广泛。 本研究对圆海链藻进行了DNA的提取与纯化、rDNA序列扩增、克隆与测序;并基于一种全新的浮游植物检测技术——双特异分子探针技术,设计出一套分子探针;通过对各探针的使用浓度、探针标记方法的选择、酶切温度对特异性的影响以及样品与处理方式对检测信号的影响等实验条件的探讨与优化,建立了圆海链藻的稳定可靠的定性定量检测方法;通过核酸酶降解实验验证了该技术中与寡核苷酸探针进行杂交的靶物质主要是RNA;并进行了该方法的探针特异性实验、标准曲线的建立以及模拟样品的检测;另外对藻细胞保存方式对检测信号的影响以及整个细胞生长周期内检测信号的变化进行了探讨。 研究结果表明,扩增所得到的圆海链藻核糖体小亚基基因序列长为1787bp;经过特异性验证,证明本研究设计的针对圆海链藻的双特异分子探针(抓捕探针、S1探针、连接探针和信号探针)具有很好的特异性,能鉴定到种;对RNase和DNase处理前后的信号值进行的比较实验结果证明,在液相体系中与寡核苷酸探针特异杂交的目的核酸大部分为RNA;样品预处理方式对结果的影响实验证明,细胞裂解液直接杂交较之提纯RNA后杂交方法要快速、简洁、稳定的多,故接下来的实验中选择细胞裂解液直接杂交方法:按照前面所建立的实验方法建立的圆海链藻检测标准曲线方程为y=0.0019x-0.0284,其中x代表目的细胞数,y


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 陈长平,高亚辉,林鹏;福建省福鼎市后屿湾红树林区水体浮游植物群落动态研究[J];厦门大学学报(自然科学版);2005年01期
2 张华祝;地球生态的支点 走进浮游世界[J];国外科技动态;2004年08期
3 弘一阿山,陈颐亨;日本的重要油源:晚第三纪硅藻[J];地质地球化学;1995年01期
4 ;浮游生物如何共存[J];科学世界;2004年11期
5 何志辉,李永函;论白鲢的食物问题[J];水生生物学报;1975年04期
6 戴绍军,秦智,张思聪,曹建国;哈尔滨二龙山水库浮游植物及水体污染状况的研究[J];植物研究;2001年04期
7 孙军,刘东艳,杨世民,郭健,钱树本;渤海中部和渤海海峡及邻近海域浮游植物群落结构的初步研究[J];海洋与湖沼;2002年05期
8 赵文,董双林,申屠青春,张兆琪;氯化物型盐碱池塘浮游植物种类和多样性的研究[J];水生生物学报;2002年01期
9 清华;;漂浮在海面的短命鬼家族[J];大科技(科学之谜);2010年11期
10 李喆;姜作发;霍堂斌;马波;;黑龙江中游春、夏季浮游植物种群结构的初步研究[J];水产学杂志;2010年04期
11 郭皓,于占国;虾池浮游植物群落特征及其与虾病的关系[J];海洋科学;1996年01期
12 宁修仁,阮积惠,史君贤,王一军,S.A.布莱;西湖硅藻对桡足类浮游动物繁殖的影响[J];东海海洋;1998年01期
13 杨鸿雁;刘红敏;陈椽;;兴义马岭河春季浮游植物多样性调查[J];贵州科学;2009年04期
14 赵冉;孙军;白洁;;2006年秋季长江口及其邻近水域浮游植物群集[J];海洋科学;2010年04期
15 戎克文;武汉后湖浮游植物现存量与生产量季节变动的初步研究[J];湖泊科学;1994年02期
16 刘晓丹;硅在海洋浮游植物群落演替过程中的作用[J];海洋环境科学;1996年02期
17 王彬;子木;;一滴水中的生命[J];科学大众(中学版);2000年11期
18 胡韧,林秋奇,王朝晖,韩博平;广东省典型水库浮游植物组成与分布特征[J];生态学报;2002年11期
19 马剑敏,严国安,李益健,李金亭;富营养湖泊大型围隔(栏)内的浮游植物研究[J];武汉植物学研究;2000年04期
20 党安志;潘虹;陈椽;;贵阳南明河浮游植物调查与水质评价[J];哈尔滨师范大学自然科学学报;2008年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王朝晖;付永虎;康伟;赵建刚;;大亚湾、大鹏湾表层沉积物浮游植物休眠体萌发研究[A];中国藻类学会第八次会员代表大会暨第十六次学术讨论会论文摘要集[C];2011年
2 王鹏;李炳乾;周茜茜;高亚辉;Raymond N. Sambrotto;;2008年春季白令海东部海域浮游植物种类组成与分布[A];庆祝中国藻类学会成立30周年暨第十五次学术讨论会摘要集[C];2009年
3 胡俊;黄邦钦;;台湾海峡南部浮游植物对不同水团的响应研究[A];庆祝中国藻类学会成立30周年暨第十五次学术讨论会摘要集[C];2009年
4 康伟;冯杰;付永虎;谷阳光;王朝晖;;大亚湾沉积物中浮游植物休眠体萌发研究[A];庆祝中国藻类学会成立30周年暨第十五次学术讨论会摘要集[C];2009年
5 魏轲;黄君;朱培瑜;严景超;王洁尘;彭宇;;梅梁湖预警监测浮游植物总密度快速测定初探[A];2011中国环境科学学会学术年会论文集(第四卷)[C];2011年
6 孙琳;陈长平;高亚辉;;2008-2009年厦门港浮游植物种类组成与数量动态研究[A];庆祝中国藻类学会成立30周年暨第十五次学术讨论会摘要集[C];2009年
7 岑竞仪;李扬;胡鸿钧;吕颂辉;;广州从化淡水浮游植物群落结构特征[A];庆祝中国藻类学会成立30周年暨第十五次学术讨论会摘要集[C];2009年
8 陈立;张福崇;方笑;王六顺;;昌黎扇贝养殖区浮游植物种类与硅藻类赤潮的初步研究[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
9 殷大聪;宋立荣;;丹江口库区浮游植物季节动态演替规律[A];庆祝中国藻类学会成立30周年暨第十五次学术讨论会摘要集[C];2009年
10 徐先栋;王海华;盛银平;黄江峰;饶毅;;大水面养殖水域浮游植物初步调查及鲢、鳙鱼产力评估——以太子河为例[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘东艳;胶州湾浮游植物与沉积物中硅藻群落结构演替的研究[D];中国海洋大学;2004年
2 刘诚刚;中国近海浮游植物光合溶解有机碳生产研究[D];中国海洋大学;2012年
3 孔凡洲;长江口赤潮区浮游植物的粒级结构、种类组成和色素分析[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2012年
4 宋书群;黄、东海浮游植物功能群研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
5 翟红昌;基于HPLC技术的南海北部浮游植物色素与群落结构研究[D];中国海洋大学;2010年
6 陈长平;闽粤沿海几个红树林区硅藻的生态分布和6种重金属对底栖硅藻胞外产物的影响[D];厦门大学;2004年
7 宫响;南海北部次表层叶绿素最大值特征的理论分析及数值模拟研究[D];中国海洋大学;2012年
8 张芳;基于小波分析的东海浮游植物种类荧光光谱识别技术研究[D];中国海洋大学;2008年
9 李超伦;海洋桡足类摄食生态及其对浮游植物的摄食压力[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2002年
10 周凯;2000~2001年粤东大规模增养殖区柘林湾和深澳湾的生态学研究[D];暨南大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李秀芹;应用双特异分子探针技术对圆海链藻(Thalassiosira rotula)进行定性定量检测研究[D];中国海洋大学;2005年
2 林旭吟;香港海域浮游植物种类多样性与群落动态研究[D];厦门大学;2007年
3 赵冉;三峡大坝截流前后长江口及其邻近水域浮游植物群集对比研究[D];中国海洋大学;2009年
4 温莉霞;小青岛海域浮游植物群集的周年研究[D];中国海洋大学;2007年
5 李鸿羽;遗传算法提取荧光指纹特征的浮游植物分析方法研究[D];中国海洋大学;2009年
6 胡序朋;基于加权非负最小二乘法的近海浮游植物荧光识别测定技术[D];中国海洋大学;2008年
7 杨浩文;广东省星湖的水质与富营养化分析[D];武汉大学;2004年
8 陈坤;浮游植物瑞利散射光谱分析[D];中国海洋大学;2007年
9 张莹莹;Pb(Ⅱ)对海洋浮游植物生长的影响[D];中国海洋大学;2004年
10 田春;巢湖东半湖浮游植物分布特征及富营养化评价[D];安徽农业大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 覃泽文;印度研发硅藻太阳能板生产石油[N];中国能源报;2009年
2 辛良;一滴水里的生命[N];中国矿业报;2000年
3 王艳红;德发现硅藻美丽坚硬的外壳是进化的需要[N];北京科技报;2003年
4 任秋凌;研究发现海洋食物源正在迅速消失[N];中国海洋报;2010年
5 陈静;多功能硅藻上墙板[N];广东建设报;2005年
6 本报记者 马琳;硅藻泥:涂料杀手?[N];中国房地产报;2010年
7 文智 晓杭;硅藻泥壁材在湖北武汉问世[N];中国建材报;2009年
8 吴林;中国硅藻泥行业第一人——郑爱民[N];中国房地产报;2008年
9 本报记者 粤水婷;引起生态环保专家关注[N];中国水利报;2003年
10 钟声;浮游生物[N];大众科技报;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978