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《中国海洋大学》 2006年
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条斑紫菜原生质体转基因的研究

宫倩红  
【摘要】: 紫菜养殖业是我国海藻养殖业的支柱产业之一,也是主要的出口创汇海产品。近年来,随着紫菜栽培业规模的逐年扩大,对紫菜优良品种的供应要求越来越高。紫菜易于养殖,藻体形态结构简单,细胞发育分化易于调控,酶解紫菜产生原生质体及原生质体的再生技术已经成熟,易于进行分子水平上的研究。因此,开展紫菜基因工程研究,利用现代分子生物学的手段培育紫菜新品种是十分必要的,也具备现实可行性。同时,也有望将紫菜作为生物反应器来生产有用的外源蛋白。但是,目前紫菜的转基因研究还处于起始阶段,主要是应用高等植物中常用的启动子如CaMV 35S等研究报告基因在紫菜中的瞬间表达。因此,本论文以条斑紫菜(Porphyra yezoensis)的营养体纯系PY-qingdao1为材料,选择条斑紫菜的内源β-微管蛋白(tubulin)基因的侧翼序列为调控序列,通过微管蛋白基因及侧翼序列的克隆和分析、表达载体的构建、基因转化方法的建立等系统地进行了转基因研究,初步建立其转基因体系。 在本论文的前期研究中,我们选取青岛地区野生条斑紫菜,利用酶解制备原生质体进行再培养的方法培育了营养体纯系PY-qingdao l。 根据真核细胞β-微管蛋白序列进行比对结果,设计简并引物,采用针对高GC含量模板的PCR体系,从条斑紫菜PY Qingdao-l的基因组DNA中扩增出969bp的β-微管蛋白基因的部分序列,根据序列测定分析结果,设计反向PCR引物,并选用一系列在已知序列中不存在的识别位点的限制型内切酶对于条斑紫菜基因组DNA进行酶切,然后自连,以此为模板,进行反向PCR,克隆反向PCR片段并测序,序列拼接后共得到2799bp,提交到Genbank(AY221630)。其中编码区1377bp,GC含量60.57%,比报道过的一些红藻的β-微管蛋白基因编码区GC含量高,共编码458个氨基酸,没有内含子,表现出很强的密码子偏好性。其上游664bp序列GC含量高达66.42%,未发现TATA box, CAAT box等上游调控序列。其下游758bp的序列中没有典型的AAUAAA polyA信号,只存在一个CAYTG的高等植物下游的保守序列。将推测的蛋白质全序列与Genbank中其他真核细胞的β-微管蛋白进行序列分析,构建进化树,结果表明条斑紫菜与其他红藻和真菌聚为一个簇群,而不与包括绿藻在内的绿色植物构成一个簇群。
【学位授予单位】:中国海洋大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S968.431

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 童冠文;条斑紫菜经济性状的遗传分析[D];中国海洋大学;2010年
2 赵小波;条斑紫菜在不同生态条件下光合效率比较研究[D];中国海洋大学;2010年
3 孔晓锐;环境因子对条斑紫菜壳孢子附着、萌发及幼苗生长的影响[D];中国海洋大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【共引文献】
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9 龙艳艳;韦继光;曹春梅;莫冰萍;潘秀湖;;我国植物病原腐霉的为害与种类[A];中国植病、菌物学会杭州联合年会论文集[C];2008年
10 姚元红;韦建福;郝小丽;;根癌农杆菌介导的丝状真菌遗传转化[A];中国植病、菌物学会杭州联合年会论文集[C];2008年
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3 魏礼玲;MYB转录因子家族相关EST干涉载体构建及遗传转化的研究[D];华中农业大学;2010年
4 吕文兵;杜氏盐藻异养转化藻株的鉴定及初步功能分析[D];郑州大学;2010年
5 徐娟;农杆菌介导的Ac/Ds转座系统转化甘蓝型油菜的研究[D];郑州大学;2010年
6 王长宪;利用基因工程创造香樟抗寒树种新种质技术研究[D];山东农业大学;2009年
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8 赵艳燕;桑树组培快速繁育、脱毒及原生质体分离技术的研究[D];山东农业大学;2010年
9 陈家媛;基于叶绿体DNAtrnL-FB序列研究天然红松的分子系统地理学[D];辽宁师范大学;2010年
10 武昌俊;杜氏盐藻高产玉米黄素突变株的诱变筛选及生物学特性的研究[D];安徽农业大学;2010年
【同被引文献】
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2 郑伟;李信书;何培民;滕亚娟;;3种有机磷农药对条斑紫菜壳孢子附着率的影响[J];水产科学;2010年12期
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1 杨惠;条斑紫菜功能基因组及重复序列特征研究[D];中国海洋大学;2011年
2 梅俊学;紫菜叶状体无性繁殖的研究[D];中国科学院海洋研究所;2000年
3 刘红全;条斑紫菜的转基因研究[D];中国海洋大学;2004年
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5 沈颂东;条斑紫菜细胞培养与酶法育苗的工艺优化[D];青岛海洋大学;2000年
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1 童冠文;条斑紫菜经济性状的遗传分析[D];中国海洋大学;2010年
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5 周文君;条斑紫菜自由丝状体细胞学和超低温保存的研究[D];中国海洋大学;2006年
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【二级引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 郭文竹;环境因子对条斑紫菜孢子体生长发育的影响[D];中国海洋大学;2012年
2 孔晓锐;环境因子对条斑紫菜壳孢子附着、萌发及幼苗生长的影响[D];中国海洋大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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10 杨官品,沈怀舜,许璞,张学成;条斑紫菜丝状孢子体表达序列标签分析[J];高技术通讯;2002年02期
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6 周伟;杨睿灵;王广策;陆勤勤;;条斑紫菜叶状体不同区域光合作用比较分析[A];中国藻类学会第八次会员代表大会暨第十六次学术讨论会论文摘要集[C];2011年
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8 汪文俊;王广策;马圣媛;刘洪艳;孟斌;烫晓荣;孙海宝;曾呈奎;;条斑紫菜类囊体膜的分离以及色素-蛋白质复合物的分离以及特性的初步研究[A];中国科学院海洋科学青年学术研讨会暨2001年海洋湖沼科学青年学者论坛论文摘要集[C];2001年
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中国重要报纸全文数据库 前10条
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3 杨九华 王长江;最大的海上菜园将在南黄海出现[N];农民日报;2002年
4 本报通讯员 欣明 桂荇 鹏程 伯伟 本报记者 沈建华;特色农业亮东台[N];农民日报;2003年
5 本报记者 刘强 实习生 王琳;中国紫菜剑指日本贸易壁垒[N];农民日报;2004年
6 吴雅艳;中国海鲜饮食文化传承基地揭牌[N];中国食品质量报;2010年
7 记者施晔 实习生王佳玮;力争捕捞养殖产值近百亿[N];南通日报;2010年
8 吴学安;紫菜协会打起“洋官司”[N];人民法院报;2004年
9 吴学安;紫菜协会打响中国反“贸易壁垒”第一仗[N];工人日报;2004年
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4 沈颂东;条斑紫菜细胞培养与酶法育苗的工艺优化[D];青岛海洋大学;2000年
5 徐民俊;条斑紫菜孢子体功能基因组特征及铁氧化还原蛋白亚基Ⅰ基因分析[D];中国海洋大学;2005年
6 丁玲;八株海洋微生物次级代谢产物的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2008年
7 周存山;条斑紫菜多糖提取及物理降解研究[D];江苏大学;2007年
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6 郭文竹;环境因子对条斑紫菜孢子体生长发育的影响[D];中国海洋大学;2012年
7 牟宗娟;条斑紫菜(Pyropia/Porphyra yezoensis)病原学研究及琼胶降解菌筛选[D];中国海洋大学;2012年
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