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《中国海洋大学》 2006年
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金鱼卵黄原蛋白多克隆抗血清制备及在内分泌扰乱化学物质检测中的应用

邴欣  
【摘要】: 自1990年代以来,世界各国开始重视内分泌扰乱化学物质的研究,并建立了多种以鱼类(如Medaka、Fatheadminnow和Zebrafish等)为模式生物的活体(invivo)筛选技术,而我国目前还没有建立以本土鱼类为模式生物的活体筛选系统。因而,本文选择以在我国广泛分布的观赏性鱼类――金鱼作为模式生物,在制备兔抗金鱼卵黄原蛋白多克隆抗血清的基础上,开发了定性检测金鱼卵黄原蛋白的western-blot技术;并首次建立了以雄性金鱼卵黄原蛋白诱导产生为主要指标,以γ-谷胺酰转移酶和乳酸脱氢酶为辅助指标的环境雌激素筛选的指标体系,并成功地应用在多种农药的环境雌激素活性的检测中。 采用凝胶过滤和离子交换两种层析技术,从E_2诱导的雄性金鱼血浆中分离、纯化了金鱼卵黄原蛋白,采用糖、磷、脂蛋白染色技术证明分离、纯化的蛋白为卵黄原蛋白,该卵黄原蛋白在非变性条件下分子量约为440kDa,在SDS变性条件下分子量约为84和60kDa。并利用分离、纯化的金鱼卵黄原蛋白,制备了兔抗金鱼卵黄原蛋白多克隆抗血清,开发了检测金鱼卵黄原蛋白的western-blot技术,1:2000倍稀释的多克隆抗血清对金鱼卵黄原蛋白的最低检出限为0.5mgL~(-1)。 用0.05mgg~(-1)BW的17β-雌二醇腹膜注射雄性金鱼,诱导14d后尾静脉取血,对血浆western-blot检测结果表明,17β-雌二醇能够诱导雄性金鱼卵黄原蛋白的产生;且17β-雌二醇暴露造成了金鱼肝细胞核膨胀,脂滴大量积累,精巢内生精细胞团萎缩、纤维化,精子密度降低。以雌性类固醇激素17β-雌二醇对雄性金鱼的雌激素作用为客观参照,用0.01,0.1和1.0mgL~(-1)久效磷暴露雄性金鱼21d,雄性金鱼血浆western-blot检测结果表明3个暴露浓度的久效磷均能诱导雄性金鱼卵黄原蛋白的产生;3个暴露浓度的久效磷均造成了雄性金鱼生殖腺指数、单
【学位授予单位】:中国海洋大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:X503.22

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 蔡文婷;金鱼(Carassius auratus)卵黄原蛋白mRNA特性及其在环境雌激素筛选中的应用[D];中国海洋大学;2008年
2 王军;金鱼卵黄脂磷蛋白的分离纯化、性质鉴定及其多克隆抗血清的制备[D];中国海洋大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郭玉佳,李叔庚,王铁霞,高建华;不育症精子乳酸脱氢酶同工酶C_4的细胞化学定位、定量研究[J];中国组织化学与细胞化学杂志;1998年04期
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9 陈伟,郝玉锋;烟台市市售蔬菜有机磷农药残留检测分析[J];食品与药品;2005年06期
10 郑光,周志俊,戴旭峰,孙运光,顾锡安;用MCF-7细胞检测有机磷农药拟雌激素样活性[J];中国工业医学杂志;2004年05期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 邴欣;久效磷对雄性金鱼环境雌激素效应研究[D];中国海洋大学;2003年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 吴双;魏雪涛;郝卫东;;双酚A和敌匹硫磷对MCF-7细胞增殖的影响及其联合作用研究[J];癌变.畸变.突变;2009年04期
2 邓力;余轶松;卢益;张芹;孙静;;毛细管气相色谱法测定地表水中有机磷农药的研究[J];安徽农业科学;2007年16期
3 袁红霞;秦粉菊;;环境激素拟除虫菊酯类农药的内分泌干扰效应[J];安徽农业科学;2007年33期
4 关建义;刘占才;郭延玲;孔祥会;;高效氯氰菊酯对草鱼血清溶菌酶活性的影响[J];安徽农业科学;2009年09期
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6 胡文静;屈艾;仇敬运;张相萍;丁铁林;;环境物质拟除虫菊酯毒理学研究进展[J];环境科学与管理;2007年10期
7 李荷迪;周忠良;赵云龙;;红螯光壳螯虾胚胎及仔虾发育过程中卵黄磷蛋白的ELISA检测[J];动物学杂志;2006年06期
8 赵颖;罗颂平;郜洁;王梅;尤爱娟;;补肾健脾中药对溴氰菊酯染毒大鼠妊娠结局的影响[J];中华中医药杂志;2010年07期
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10 张晨;王笑茹;;长期低剂量接触有机磷农药的致癌作用[J];承德医学院学报;2010年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 董思思;花日茂;聂磊;刘琴芳;;农药污染土壤的微生物修复研究进展[A];食品安全的理论与实践——安徽食品安全博士科技论坛论文集[C];2005年
2 皇甫加清;张耀光;周传江;蒲德永;;氯氰菊酯暴露对草鱼4种器官组织结构的影响[A];中国南方十六省(市、区)水产学会渔业学术论坛第二十六次学术交流大会论文集(下册)[C];2010年
3 胡荣;吴端生;朱丰;;实验鲫鱼及其在卫生毒理学研究中的应用[A];第九届中国实验动物科学年会(2010新疆)论文集[C];2010年
4 李康;王明山;周忠良;;鲫鱼(Carassius auratus)卵黄蛋白原的诱导[A];动物学专辑——上海市动物学会2001年年会论文集[C];2001年
5 任华;顾建华;孙竹筠;沈万赟;吴鹰;周忠良;;RT-PCR法检测斑马鱼(Danio rerio)卵黄蛋白原mRNA表达[A];2005年上海市动物学会学术会议论文集[C];2005年
6 戴更辉;周忠良;;食蚊鱼卵黄蛋白原在环境激素检测中的应用[A];2005年上海市动物学会学术会议论文集[C];2005年
7 戴斐;田英;沈莉;冯易;;器官形成期敌百虫暴露对生殖发育影响的实验研究[A];上海市预防医学会第二届学术年会论文汇编[C];2006年
8 马国云;董竞武;金耀球;李真观;仲伟鉴;肖萍;姚小妹;;三唑磷农药对大鼠的致癌性试验病理观察[A];上海市预防医学会第二届学术年会论文汇编[C];2006年
9 李云;李英文;王友慧;徐永光;刘瑞娟;;瓦氏黄颡鱼血清卵黄蛋白原和钙离子以及肝脏RNA的变化与性腺发育的关系[A];中国动物科学研究——中国动物学会第十四届会员代表大会及中国动物学会65周年年会论文集[C];1999年
10 刘宝敏;袁东星;吴翠琴;;弱阴离子交换、超滤两级法纯化浓缩卵黄蛋白原(Vtg)的研究[A];第三届全国环境化学学术大会论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 田华;久效磷农药对金鱼(Carassius Auratus)生殖轴线的影响研究[D];中国海洋大学;2010年
2 史永富;多氯联苯在生物体内羟基化代谢研究及其代谢产物毒理探索[D];中国海洋大学;2010年
3 姚丹;久效磷对马粪海胆(Hemicentrotus pulcherrimus)胚胎发育神经毒性效应研究[D];中国海洋大学;2010年
4 鲁英;乌鲁木齐市生活饮用水中有机物现状及其类雌激素效应的研究[D];新疆医科大学;2010年
5 许思思;人为影响下渤海渔业资源的衰退机制[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
6 于贞;三种海洋滤食动物对有机磷农药的反应及降解[D];大连理工大学;2011年
7 李振华;新型功能化吸附剂的制备及其在金属离子分析中的应用[D];兰州大学;2011年
8 田雨;久效磷对秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)多种毒性效应的当量评价[D];中国海洋大学;2011年
9 王伟;疏水性有机污染物在水—土/沉积物体系中的环境行为与归趋[D];浙江大学;2011年
10 李立伟;台湾海峡鱼类单殖吸虫病病原的研究[D];厦门大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈秀荣;氰戊菊酯对草鱼CYP3A活性的影响及组织毒理学研究[D];华中农业大学;2010年
2 刘萍;酚类污染物对金鱼体内卵黄蛋白原的诱导及相关酶活性的影响[D];中国海洋大学;2010年
3 杨艳平;P450芳香化酶在许氏平鮋繁殖生理中的作用研究[D];中国海洋大学;2010年
4 李姝熳;久效磷对早期发育阶段马粪海胆(Hemicentrotus pulcherrimus)胆碱能系统的影响[D];中国海洋大学;2010年
5 康亦珂;以细小色矛线虫为模型动物的环境雌激素活体筛选[D];中国海洋大学;2010年
6 杨璇;珠江河口水体常见有机磷农药污染现状及风险评价[D];暨南大学;2011年
7 韩丛会;固相萃取高效液相色谱联用在巯基化合物分析中的应用研究[D];信阳师范学院;2011年
8 张要锋;不同固相萃取方法下管网末梢水中有机物的比较及其雄性生殖毒性研究[D];新疆医科大学;2011年
9 毕帅;金雀异黄素诱导斑马鱼肝细胞合成VTG的作用机理研究[D];中国海洋大学;2011年
10 潘宗保;美国红鱼卵黄原蛋白多克隆抗血清的制备及其在农药环境雌激素活性筛选中的应用[D];中国海洋大学;2011年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 袁红霞;秦粉菊;;环境激素拟除虫菊酯类农药的内分泌干扰效应[J];安徽农业科学;2007年33期
2 徐德立;;环境激素与人类健康[J];国土与自然资源研究;2006年03期
3 邱东茹,吴振斌,贺锋;内分泌扰乱化学品对动物的影响和作用机制[J];环境科学研究;2000年06期
4 温茹淑;方展强;江世贵;徐杰;马广智;;剑尾鱼卵黄蛋白原的ELISA检测[J];环境科学研究;2007年04期
5 周庆祥,江桂斌;卵黄蛋白原的分离测定及其在环境内分泌干扰物质筛选中的应用[J];化学进展;2003年01期
6 庄平;丁建文;侯俊利;章龙珍;刘鉴毅;刘健;张涛;田美平;;中华鲟卵黄脂磷蛋白的分离纯化及性质分析[J];海洋科学;2010年06期
7 卢锋,乔玲;有机磷农药环境雌激素样的作用[J];解放军预防医学杂志;2004年05期
8 邴欣,汝少国,Isoda Hiroko,姜明,王蔚,王诗红;17β-雌二醇对雄性金鱼卵黄原蛋白的诱导作用[J];水产学报;2004年03期
9 温茹淑;方展强;江世贵;马广智;徐杰;姚静;;剑尾鱼卵黄脂磷蛋白的纯化及免疫分析[J];水产学报;2007年05期
10 李育培;刁晓明;盛晓洒;权恒;翟旭亮;李云;;瓦氏黄颡鱼卵黄脂磷蛋白(Lv)的纯化、性质鉴定及其抗血清的研制[J];水产学报;2010年01期
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 潘宗保;美国红鱼卵黄原蛋白多克隆抗血清的制备及其在农药环境雌激素活性筛选中的应用[D];中国海洋大学;2011年
2 李颖;美国红鱼和真鲷卵黄原蛋白的分离纯化及在内分泌干扰物筛选中的应用[D];中国海洋大学;2006年
3 于坤;金鱼卵黄原蛋白多克隆抗血清的制备及在农药环境雌激素活性筛选中的应用[D];中国海洋大学;2009年
【二级引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 张静;环境激素对斑马鱼免疫相关基因表达的影响[D];山东师范大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张旭晨,王所安;细鳞鱼精巢超微结构和精子发生[J];动物学报;1992年04期
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4 江希流;农药优先监测品种的筛选研究[J];环境科学进展;1993年06期
5 华小梅;单正军;;我国农药的生产,使用状况及其污染环境因子分析[J];环境科学进展;1996年02期
6 匡少平,张书圣;环境激素污染研究进展及污染防治[J];环境污染治理技术与设备;2002年06期
7 邴欣,汝少国,盛连喜;内分泌扰乱化学物质生物筛选技术研究进展[J];环境科学研究;2002年05期
8 张乔,李伟格,黄士忠,翟延路,李治祥,宁安荣;有机磷农药的多残留气相色谱分析方法[J];环境科学学报;1988年03期
9 朱玲美,宋玉芳,黄光琦,钱方,万启智,吴东;微波照射对成人精子乳酸脱氢酶-X的影响[J];四川医学院学报;1983年03期
10 邴欣,汝少国,姜明,魏渲辉,李永祺;久效磷对真鲷鳃、肝和肾细胞超微结构的影响[J];海洋科学;2002年09期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 邴欣;汝少国;;四种拟除虫菊酯类农药的环境雌激素活性研究[J];中国环境科学;2009年02期
2 彭福峰;家庭饲养金鱼的选购[J];家庭科技;1997年09期
3 王珩;“金鱼”招亲[J];IT经理世界;2003年20期
4 谢晓飞;;游动的金鱼雕[J];中华手工;2010年06期
5 ;“金鱼摆尾”护养脊椎[J];恋爱婚姻家庭(养生);2011年02期
6 洪金祥;;请让金鱼冬季休眠[J];中国花卉盆景;1990年01期
7 李春碧;观赏金鱼[J];中国土特产;1995年03期
8 李琳;;赏鱼益健康[J];绿叶;2002年06期
9 金玲;液洗产品市场“金鱼”奋力争先[J];市场观察;1996年05期
10 徐祥法;;陶都宜兴看“金鱼”[J];中国酒;2002年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 田秋红;云径平;苗季;陈功;符珈;张昌卿;苏曙光;张梅芳;吴秋良;;Nucleophosmin/B23在肝细胞癌组织中的高表达[A];中华医学会病理学分会2006年学术年会论文汇编[C];2006年
2 徐伟;;透明金鱼的命名和分类地位探讨[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
3 刘朝良;董胜张;王磊;朱保建;尹志亮;;昆虫卵黄原蛋白(Vg)分子生物学研究进展[A];食品安全的理论与实践——安徽食品安全博士科技论坛论文集[C];2005年
4 王晓梅;宋文芹;李秀兰;陈瑞阳;;金鱼四个代表品种基因组DNA的遗传变异研究[A];中国动物科学研究——中国动物学会第十四届会员代表大会及中国动物学会65周年年会论文集[C];1999年
5 刘朝良;梶浦善太;中垣雅雄;;蓖麻蚕卵黄原蛋白前躯体一次结构的解析[A];中国蚕学会第三届青年学术研讨会暨浙江省第二届青年学术论坛——蚕桑分论坛论文集(上册)[C];2001年
6 孟庆军;张立藩;李剑;张乐宁;马进;;抗血管紧张素原多克隆抗血清的制备及鉴定[A];中国生理学会第21届全国代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2002年
7 胡骁飞;孙亚宁;柴书军;职爱民;王磊;刘庆堂;邓瑞广;张改平;;植酸酶鼠源多克隆抗血清的制备与鉴定[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
8 吴鼎勋;柴敏娟;邓小红;林晶;李峰纲;;敌敌畏对金鱼摄食行为的影响[A];中国海洋与湖沼学会甲壳动物学分会、中国动物学会、中国海洋与湖沼学会生态学分会2000年学术研讨会论文摘要集[C];2000年
9 刘朝良;董胜张;朱保建;王磊;;中国野桑蚕卵黄原蛋白cDNA的克隆及序列分析[A];中国蚕学会第四届青年学术研讨会会议论文集[C];2004年
10 ;金鱼涂料集团石家庄市油漆厂[A];'2009全国钢结构学术年会论文集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;金鱼喂养注意事项[N];黄冈日报;2005年
2 记者 刘乐平 杨蓥晖;金鱼集团:沿着“微笑曲线”升级[N];杭州日报;2010年
3 李大刚;金鱼度夏重“四防”[N];中国渔业报;2007年
4 晓毅;优良的科学试验材料——金鱼[N];东方城乡报;2007年
5 杨保国;家庭养金鱼可用饲料[N];福建科技报;2006年
6 王小溪;金鱼雨前防“闷缸”[N];河北科技报;2006年
7 丁建华佘飞;如皋双群金鱼“游”出国门[N];江苏经济报;2007年
8 特约记者 江峰;金鱼河大安段截污管建设完毕[N];自贡日报;2010年
9 本报记者 张世斌 杨连元 特约通讯员 牛谦平;一生只为拥军来[N];工人日报;2004年
10 本报记者 刘常俭;新老“金鱼”的法律较量[N];河北日报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 邴欣;金鱼卵黄原蛋白多克隆抗血清制备及在内分泌扰乱化学物质检测中的应用[D];中国海洋大学;2006年
2 徐境羚;马鹿精子膜蛋白纯化与理化性质分析[D];东北林业大学;2007年
3 曲凌云;三种养殖扇贝热休克蛋白HSP70在逆境因子下的表达和相关基因的克隆[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2004年
4 师晓栋;玫瑰无须鲃卵黄蛋白原和卵黄脂磷蛋白的纯化、鉴定、免疫分析和功能研究[D];中国海洋大学;2004年
5 王启伟;恒河猴骨髓间充质干细胞的定向分化及其机制[D];第一军医大学;2004年
6 郭振宇;中国对虾免疫相关分子抗菌肽和热休克蛋白的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2004年
7 金戈;分化诱导剂和不同类型的人DNA聚合酶β基因转染对细胞的生物学效应[D];郑州大学;2003年
8 李蕾;SPC-A1细胞应答呼吸道合胞病毒感染的敏感基因zlg10的克隆、表达及功能探讨[D];武汉大学;2005年
9 孙劲旅;户尘螨过敏原实验研究[D];中国协和医科大学;2002年
10 张科伟;乳腺干细胞的体外培养、分离、鉴定及乳腺癌相关基因表达的研究[D];吉林大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 于坤;金鱼卵黄原蛋白多克隆抗血清的制备及在农药环境雌激素活性筛选中的应用[D];中国海洋大学;2009年
2 孙萌;久效磷对雄性金鱼环境雌激素效应研究[D];中国海洋大学;2009年
3 王军;金鱼卵黄脂磷蛋白的分离纯化、性质鉴定及其多克隆抗血清的制备[D];中国海洋大学;2012年
4 邴欣;久效磷对雄性金鱼环境雌激素效应研究[D];中国海洋大学;2003年
5 徐芳;氟伐他汀对肺纤维化大鼠ERK信号通路的影响[D];武汉大学;2005年
6 徐兰枝;子宫内膜异位症新标志物sICAM-1的临床研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2006年
7 胡莹;Le~Y寡糖抗原对着床相关因子表达和分泌的影响[D];辽宁师范大学;2003年
8 陈俊;伯氏疟原虫类巨噬细胞移动抑制因子的表达、纯化及其在红内期表达的检测[D];第四军医大学;2006年
9 任炜;决明子胰蛋白酶抑制剂COTI的分离纯化及性质研究[D];四川大学;2007年
10 张金秋;猪链球菌2型精氨酸脱亚氨酶基因的克隆表达及活性分析[D];南京农业大学;2007年
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