收藏本站
《中国海洋大学》 2007年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

东海原甲藻磷胁迫响应基因的分析及细胞死亡相关基因的克隆与分析

刘永健  
【摘要】: 东海原甲藻(Prorocentrum donghaiense)是近期在我国东海区出现的大规模赤潮的引发种,使当地经济蒙受巨大损失,环境受到极大破坏。目前,东海原甲藻的研究已成为赤潮生物学的研究热点之一。近几年来,关于东海原甲藻的分类、生活史、生理生态的研究很是广泛,然而,对东海原甲藻赤潮形成和消亡的机制却知之甚少。 我们构建了对数生长期东海原甲藻细胞cDNA文库。我们使用mRNA Purification Kit MagExtractor? - mRNA-试剂盒抽提纯化对数生长期东海原甲藻细胞poly(A)+ RNA,Super SMART? PCR cDNA Synthesis Kit试剂盒逆转录poly(A)+ RNA为单链cDNA并进行PCR扩增,然后将双链cDNA连接到质粒pMD 18-T vector载体上,并将连接产物电转化至感受态细胞E. coli JM109。结果显示,电转化转化效率大于109,并且,文库中绝大部分插入片断大小在700-1500bp之间。使用此种方法,我们能够对微量东海原甲藻细胞(细胞数小于105个细胞)构建cDNA文库。 以正常磷酸盐营养浓度培养条件下的东海原甲藻为对照组,使用cDNA-AFLP技术对磷酸盐胁迫下的东海原甲藻细胞的表达情况进行了分析。通过AFLP分析,我们共分离了50条表达差异条带,经过克隆测序分析,最后得到43条有效序列。网上BLAST分析结果显示,其中只有8条序列搜寻到匹配序列,而剩余的35条序列未搜寻到任何匹配序列。以β-actin基因为内参,我们对其中的三个基因片断(TDF68、TDF72和TDF85)进行了表达差异分析。结果表明:东海原甲藻细胞在受到磷酸盐胁迫时,三个片断的表达量全部增加,并且与对照相比,差异显著。其中,基因片段TDF72(antioxidant,AhpC/Tsa family)的表达量是对照组的1.24倍(p=0.04) ;TDF68(dual-specificity protein phosphatase )是对照组的1.60倍( p=0.002 ) TDF85(Phosphoglycerate/bisphosphoglycerate mutase)是对照组的2.30倍(p=0.0001)。 通常认为,单细胞浮游藻是“不死”的,除非是被捕食、或者被病毒或细菌感染致死、或者是受到物理损伤、或者是永久的、不可逆转的沉降到海洋深处。然而,研究资料显示,受到环境胁迫时,单细胞真核浮游植物也存在类似细胞程序化死亡的现象。通过显微观察,我们观测到了东海原甲藻衰老细胞破裂死亡现象,衰老阶段的东海原甲藻细胞死亡是否也是一种主动地死亡呢?我们在东海原甲藻衰老细胞表达序列标签(EST)分析中发现了部分半胱氨酸基天冬氨酸特异性蛋白酶(cysteinyl aspartate specific proteinase, caspase,caspase)编码基因序列,在本文中,我们克隆了东海原甲藻caspase编码基因的全长cDNA序列,序列分析发现,其核苷酸全长520bp,包含一个258bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码一个85氨基酸多肽,其5′非翻译区长135 bp,3′非翻译区长127 bp,并在其3′非翻译区发现一个poly(A)+加尾信号(AATAA)。以β-actin基因为内参,我们对Caspase基因在东海原甲藻衰老细胞中的表达情况进行了分析。结果表明:在处于各个衰老阶段的东海原甲藻细胞中都存在Caspase基因表达,并且各阶段表达存在显著差异。在开始阶段,Caspase基因的表达量逐渐增加,到第6天时,达到最大值0.689(是第0天的19倍);之后,其表达量逐渐降低,到第9天时,不能检测到任何基因的表达。表明衰老东海原甲藻细胞的破裂死亡可能一个主动过程,而Caspase基因在这一过程可能起着重要作用。这一结果为揭示东海原甲藻死亡的分子机制以及东海原甲藻赤潮消亡的分子机制,提供了理论基础。
【学位授予单位】:中国海洋大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q943.2

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孙百晔;王修林;李雁宾;王长友;王爱军;梁生康;张传松;;光照在东海近海东海原甲藻赤潮发生中的作用[J];环境科学;2008年02期
2 马辉;刘桂丰;徐晨曦;王玉成;杨传平;;二色补血草海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶基因的克隆及分析[J];东北林业大学学报;2008年08期
3 王金花;唐洪杰;王修林;祝陈坚;;氮、磷营养盐对东海原甲藻生长和硝酸还原酶活性的影响[J];应用与环境生物学报;2008年05期
4 张翅;戴国飞;刘军立;夏炎枝;甘南琴;红凌;;盐胁迫下杜氏盐藻(Dunaliella salina)cDNA文库的构建与新表达序列标签(EST)的获取、分析[J];武汉大学学报(理学版);2009年03期
5 李荣茂;;福建省沿岸赤潮生物——东海原甲藻生态探讨[J];海洋环境科学;2009年S1期
6 周虹丽;朱建华;杨安安;简伟军;林少君;;东海原甲藻吸收光谱特性分析[J];海洋技术;2011年01期
7 贺福初;邢桂春;吴祖泽;;人胎肝cDNA文库的构建[J];军事医学科学院院刊;1992年02期
8 刘敏;张伟;陈天艳;蔺淑梅;赵良;刘锦锋;赵英仁;张树林;;丙型肝炎病毒核心蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及人胎肝cDNA文库的扩增、纯化和鉴定[J];西安交通大学学报(医学版);2006年01期
9 牛永东;许丽艳;韩溟;方王楷;沈忠英;李恩民;;酵母单杂交筛选实验中的关键问题[J];中国实验诊断学;2006年07期
10 徐锋;武晓丽;邱德文;;利用磁珠构建稻瘟菌cDNA文库[J];微生物学报;2008年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 潘光;由希华;谷树茂;宋毅倩;潘齐;丁君;;光照、温度和盐度对东海原甲藻生长的影响[A];2011中国环境科学学会学术年会论文集(第一卷)[C];2011年
2 刘婷婷;杨维东;李宏业;刘洁生;;米氏凯伦藻对东海原甲藻的化感作用[A];中国藻类学会第八次会员代表大会暨第十六次学术讨论会论文摘要集[C];2011年
3 徐宁;秦俊莲;孙树刚;段舜山;;东海原甲藻对尿素的吸收动力学与利用特性[A];中国藻类学会第八次会员代表大会暨第十六次学术讨论会论文摘要集[C];2011年
4 邓光;耿亚洪;胡鸿钧;齐雨藻;吕颂辉;李中奎;李夜光;;几种环境因子对高生物量赤潮甲藻-东海原甲藻光合作用的影响[A];庆祝中国藻类学会成立30周年暨第十五次学术讨论会摘要集[C];2009年
5 陈桃英;颜天;周名江;;东海大规模赤潮藻对菲律宾蛤仔受精卵孵化和蒙古裸腹溞种群的影响[A];全国生物多样性保护及外来有害物种防治交流研讨会论文集[C];2008年
6 和亚男;杨庆利;迟晓元;任增凯;禹山林;;花生谷胱甘肽硫转移酶基因的克隆和序列分析[A];全国植物分子育种研讨会摘要集[C];2009年
7 李正华;;福建长乐海区一次东海原甲藻赤潮生消过程分析[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
8 梁一;王昆;林嘉诚;汤子建;孙慧;;药用真菌Agrocybe aegerita cDNA文库构建及表达序列标签分析[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
9 蒋立平;彭黎;梁宋平;;基于虎纹捕鸟蛛转录子分析的分子多样性[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要[C];2007年
10 郭莉;汤永民;徐晓军;沈红强;钱柏芹;罗春芳;;恶性淋巴瘤细胞cDNA T7噬菌体展示文库的建立及意义[A];第七届全国血液免疫学学术大会暨2008年浙江省血液病学术年会论文汇编[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 来建强;有了生物探针有害赤潮快现形[N];新华每日电讯;2009年
2 记者 章建民 通讯员 昝爱宗;沿海赤潮近期仍将持续[N];浙江日报;2004年
3 周宽宏 赵小兰 董佩军;舟山赤潮趋稳 仍需警惕反复[N];中国气象报;2004年
4 ;让鹿宝造福人类[N];经济消息报;2000年
5 记者 陈纪蔚 通讯员 黄渭;浙江海洋环境形势依然不容乐观[N];浙江日报;2004年
6 方芳;舟山附近海域发生特大赤潮[N];中国环境报;2004年
7 ;我国基因组研究向“海洋”延伸[N];中国海洋报;2000年
8 曹文英 刘观浦;山农大选育出三个糯性小麦新品系[N];山东科技报;2005年
9 昝爱宗;浙江加强海洋环境监测和灾害预报[N];中国海洋报;2004年
10 记者 薛冬 通讯员 张猛、何春权;我科学家将开发海洋生物基因资源[N];光明日报;2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘永健;东海原甲藻磷胁迫响应基因的分析及细胞死亡相关基因的克隆与分析[D];中国海洋大学;2007年
2 唐勇;猪伪狂犬病鉴别诊断研究与猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组序列的测定[D];华中农业大学;2004年
3 王颖;人参叶和根cDNA文库构建及表达序列标签分析[D];东北师范大学;2007年
4 柳淑芳;小尾寒羊多胎性状相关基因的鉴定和遗传研究[D];山东农业大学;2004年
5 陈晓红;慢性肝病患者组织cDNA文库的构建及用SEREX方法筛选HCC抗原[D];浙江大学;2005年
6 王海鸿;B型烟粉虱热休克蛋白基因的克隆和表达及其与胁迫耐受性关系的研究[D];中国农业科学院;2005年
7 白文涛;汉坦病毒受体的筛选及鉴定[D];第四军医大学;2005年
8 陈娟;可卡因安非他明调节转录肽相互作用蛋白的筛选[D];第二军医大学;2005年
9 余建秋;大熊猫基因资源库构建及粪便高质量DNA提取方法的建立[D];浙江大学;2006年
10 于丽;金黄地鼠神经管cDNA文库的构建及高温致畸相关基因的筛选[D];山东大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵耀儒;墨胸胡蜂毒腺基因cDNA文库的构建[D];武汉大学;2004年
2 温钢;小鼠嗅球cDNA文库的构建[D];东北师范大学;2006年
3 王志成;棉花与膜结合的内切-1,4-β-葡聚糖酶基因的克隆及序列特征分析[D];湖南农业大学;2004年
4 范维江;大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)下丘脑cDNA 文库的构建[D];四川农业大学;2004年
5 屠小卿;自身免疫性肝病靶抗原的筛选、表达、临床应用[D];第二军医大学;2003年
6 孙小洁;甜菜夜蛾cDNA文库的构建及几丁质合成酶基因片段的克隆[D];四川农业大学;2005年
7 朱彬彬;家蝇触角cDNA文库的构建及气味结合蛋白基因cDNA的克隆[D];华中农业大学;2005年
8 李晓进;云南个旧肺腺癌细胞株GLC-82 cDNA文库的构建和鉴定[D];昆明医学院;2005年
9 乌慧玲;稻褐飞虱不同生物型的荧光差异显示[D];南京师范大学;2004年
10 范一民;树干毕赤酵母cDNA文库构建及EST序列测定[D];南京林业大学;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026