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《中国海洋大学》 2007年
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乙型肝炎病毒基因组的垂直传递及其突变与表达

王培林  
【摘要】: 乙型肝炎(简称乙肝)是乙型肝炎病毒(HBV)感染所致,是一种难治性的严重危害人类健康的常见病与多发病,是与慢性活动性肝炎、慢性迁延性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌发生关联的疾病。据统计,世界上约有3亿五千万人携带HBV,每年新增乙肝患者50万~100万,我国感染人数约占世界感染人数的50%。乙肝每年导致至少200万人死亡。然而,迄今乙肝尚无特异有效的临床治疗对策与措施,乙肝的发生率尚未显著降低。因此,HBV感染的传播方式受到研究者们的关注;乙肝经生殖细胞垂直传播的途径尚未得到证实,有关研究报道甚少。HBV是目前所知的最小的嗜肝病毒。HBV DNA长约3.2kb,构成HBV基因组,为部分双链环状病毒。HBV基因组共有4个开放阅读框架P、C、S和X区。 本文报道了HBV基因组在男、女乙肝患者睾丸组织、卵巢组织中的基因复制、基因表达和基因突变,HBV基因组在乙肝患者父子、母子间垂直传递,HBV基因组小鼠卵细胞载体的构建和精细胞载体的构建与转HBV基因组小鼠的垂直传递。本研究从分子遗传学、细胞生物学和组织学等方面为HBV基因组经精细胞和卵细胞垂直传递提供了实验证据;乙肝患者的研究和动物实验证明,受到HBV感染的乙肝患者的生殖细胞能够把HBV基因组传递给其发病后出生子女。本文为乙肝垂直传播的理论提供了证据,为HBV感染的干预(如乙肝疫苗的应用等)提供了理论基础和依据。乙型肝炎患者父亲发病后出生子女 本文首先研究分析了较大家系、样本的乙型肝炎患者父亲(HBF)、乙型肝炎患者父亲发病后出生子女(HBFa)和乙型肝炎患者父亲发病前出生子女(HBFb)各实验组血清游离型、外周血单核细胞(PBMC)整合型HBV基因组检测率和HBV感染率,发现HBF、HBFa组的3项指标显著高于HBFb组,HBF与HBFa组的3项指标呈一致性增高。说明HBFa组的HBV基因组有可能从HBF组获得。进一步分析了整合在HBF与HBFa基因组内的HBV基因组突变,发现HBF与HBFa父子之间具有完全一致的聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)单链泳动变位;所分析的的3个家系5个成员的HBF与HBFa的HBV基因组,有U5样序列区和非U5样序列区的3个位点的单核苷酸多态性(SNP)突变位点完全一致,HBF家系2301父子U5样序列区和非U5样序列区的10个位点的SNP突变位点完全一致。提示HBFa的所有HBV基因组的SNP都应是由整合有HBV基因组的HBF基因组通过精细胞传递所致。为了在产生精细胞的睾丸及附睾组织寻找到组织与细胞学证据,作者又研究了HBF的睾丸及附睾组织细胞内的HBV基因组,发现在HBF睾丸及附睾组织中存在大量的HBV基因组,主要分布在曲细精管的基底部。显然,为HBV基因组在父子之间的垂直传递提供了组织学和细胞学的证据。本文关于HBV基因组父子间垂直传递的研究为首次报道。 第二,首次大样本的研究了乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗原(HBeAg)均阳性乙肝患者母亲(HBM)孕妇的卵巢组织样本HBV基因组基因的表达,检测HBsAg在卵巢组织的分布与表达,发现HBsAg主要分布在卵巢组织的血管管壁及周围的间质细胞内,在卵巢皮质的卵泡细胞胞质中检测到HBsAg。说明在卵巢组织和卵泡细胞内存有HBV基因组,卵巢组织和卵泡细胞受到了HBV的感染。为母婴之间HBV基因组通过卵细胞的垂直传递提供了组织学与细胞学的证据。进一步分析了HBM卵巢组织与外周血、HBM新生儿脐带血存在的HBV基因组。发现在HBM卵泡组织中检测到HBV基因组,其检测率与HBM新生儿脐带血中HBV基因组的检测率呈一致性增高,显著高于对照组。说明HBM新生儿细胞内的HBV基因组可能是来自HBM,是通过卵细胞传递而来。因为HBM孕妇的卵巢组织样本HBV基因组的免疫组化研究结果已提供了组织学与细胞学的基础。同时,本文进一步研究了HBM卵巢石蜡组织切片组织细胞内的HBV基因组与分布,发现在HBM卵巢组织中检测到HBV基因组,分别分布在卵巢皮质的卵泡细胞,髓质的血管管壁以及血管周围间质细胞中。说明HBV感染了卵巢组织,在卵巢组织和卵泡细胞中存在HBV基因组。又进一步为母婴间通过卵细胞垂直传递HBV基因组提供了组织学和细胞学的证据。本文关于HBV基因组母子间垂直传递的研究为首次报道。 第三,应用人的生殖细胞进一步研究HBV基因组的垂直传递,涉及伦理学的问题,显然是不可能的。我们应用阳离子脂质体-质粒pBR322-HBV DNA共转染小鼠卵细胞,证明HBV基因组可以通过脂质体转染进入小鼠卵细胞,卵细胞可以作为HBV基因组的载体;为培育证明HBV基因组可以经卵细胞垂直传递子代的动物模型提供了前提条件。 第四,运用精子载体共培养和体内转染法共转染小鼠精细胞,发现小鼠精子有一定俘获外源HBV基因组的能力,并发现HBV基因组在小鼠精细胞的分布。作者应用精子载体法建立了HBV基因组经精细胞垂直传播的转HBV基因组小鼠模型。为HBV基因组经生殖细胞垂直传递提供了实验证据。为HBV感染的垂直传播提供了实验证据。 HBV基因组垂直传递的研究有助于探讨、阐明HBV感染传播的机制与途径。除在乙肝传播的理论上有所突破之外,还将为HBV感染的临床预防提供理论依据和基础;这在降低乙肝发生率、提高人口素质、优生优育等方面都有重要的临床意义。
【学位授予单位】:中国海洋大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R373.2

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【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前2条
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中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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6 黄天华,谢庆东,陈霓彤,曾曦凡,吴丛梅,王晓梅;精子携带的乙肝病毒基因在金黄地鼠胚胎中的复制与表达[J];癌变.畸变.突变;2005年04期
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8 张秋菊;黄天华;谢庆东;谭小方;刘戈飞;陈德宇;周小玲;;人精子携带的HBs和HBc基因在早期胚胎细胞中的蛋白表达[J];癌变.畸变.突变;2008年03期
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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3 尹燕耀;肖影群;;慢乙肝患者肝组织内CD_4~+,CD_8~+T淋巴细胞表达特点[A];首届江西省中西医结合肝病学术研讨会、首届江西省中西医结合肝病新进展学习班资料汇编[C];2008年
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5 高庆伟;李永新;刘莎;王波;王英兰;邹汉法;孔亮;孙万里;;乙型肝炎病毒免疫吸附柱构建的实验研究[A];第二届全国人工肝及血液净化学术年会论文集[C];2005年
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7 郭永;修霞;牟莹莹;藏玉芹;马振芝;;乙肝病毒转录体在母婴传播中的应用[A];第六届全国优生科学大会论文汇编[C];2006年
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王冬菊;RNAi阻断乙型肝炎病毒在人胎盘滋养细胞中复制的作用[D];暨南大学;2010年
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7 陈黎;HBV宫内感染体外模型的构建及cAMP调控子宫肌细胞COX-2表达的机制研究[D];第三军医大学;2011年
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9 赵志梅;补肾化瘀法治疗子宫内膜异位症不孕的研究[D];广州中医药大学;2000年
10 张琪;周围神经缺损组织工程修复方法的实验研究[D];第四军医大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈进步;血浆DNA定量检测在鉴别诊断各种肝病中的临床应用价值[D];南京医科大学;2009年
2 李华;HBV核心区启动子反义真核表达载体的构建[D];郑州大学;2010年
3 刘玉涛;靶向ICP4的RNA干扰对HSV-1病毒复制能力影响[D];郑州大学;2010年
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5 张春红;慢性乙型肝炎中医证型与T淋巴细胞亚群相关性研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
6 乔亚峰;梅州市某高校10年间新生乙肝病毒感染及携带状况的调查[D];暨南大学;2010年
7 荣梅生;慢性乙肝患者CD8+细胞CD28的表达与肝组织病变的研究[D];安徽医科大学;2010年
8 徐玮;补肾清肝方联合替比夫定治疗肝肾阴虚证慢性乙型肝炎疗效观察[D];山东中医药大学;2010年
9 周旭平;乙型肝炎病毒DNA在人卵母细胞和胚胎中的整合及HBV感染妇女ART结局的研究[D];浙江大学;2011年
10 王晓燕;乙型肝炎病毒基因型、亚型分布及与临床关系的研究[D];山西医科大学;2011年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 阮烨,王晓云,谢庆东,黄天华;外源DNA转染精子的实验研究[J];癌变.畸变.突变;2004年03期
2 张清健,黄天华,谢庆东,曾丽萍;HBV DNA重组质粒转染小鼠卵母细胞的研究[J];癌变.畸变.突变;2004年06期
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4 陈桂兰,黄天华,谢庆东,王晓梅,熊小芳;卵母细胞携带的HBV DNA在小鼠早期胚胎中的复制与表达[J];癌变.畸变.突变;2005年03期
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6 蔡唯佳;马云青;祁逸梅;牛永东;许丽艳;李建新;李恩民;;白桦酯醇对食管癌细胞EC109的抑制作用[J];癌变.畸变.突变;2006年01期
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中国博士学位论文全文数据库 前9条
1 赵鑫;黑木耳分级多糖抗氧化活性及其相关生理功能研究[D];东北林业大学;2011年
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3 杨国红;瑞香狼毒等三种药用植物的生物活性成分[D];复旦大学;2005年
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中国硕士学位论文全文数据库 前7条
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6 张虎平;姜黄素抗肝纤维化作用的实验研究[D];河北医科大学;2009年
7 盛嘉;HBV耐药性检测平台的构建[D];上海交通大学;2009年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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2 帅祖兵,黄天华,曾荔苹,黄建民,孙希海;检测着床前胚胎非整倍性诱变的小鼠动物模型[J];癌变.畸变.突变;2002年01期
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10 徐志一,刘崇柏,彦天强,沙庆洪,孙永德,傅廷源,奚龙福;新生儿大规模乙型肝炎血源疫苗免疫的效果考核[J];病毒学报;1991年S1期
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中国重要报纸全文数据库 前1条
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中国博士学位论文全文数据库 前3条
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中国硕士学位论文全文数据库 前8条
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