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《中国海洋大学》 2009年
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海洋酵母普鲁兰类酵母(Aureobasidium pullulans)铁载体的研究

王伟琳  
【摘要】: 从实验室海洋酵母菌种库的300多株海洋酵母中利用高氯酸铁检测的方法筛选得到14株产铁载体的酵母,经过复筛得到一株铁载体产量较高的海洋酵母菌菌株HN6.2,该菌株分离自中国青岛东风盐场近海表层海水。通过传统的酵母菌种鉴定及分子生物学鉴定,最终鉴定该株海洋酵母属于普鲁兰类酵母(Aureobasidium pullulans)。采用单次因子方法对HN6.2菌株发酵产铁载体培养基及培养条件进行优化,得到最适产铁载体的培养基组分是(w/v):蔗糖3.0%,NH_4NO_3 0.3%,K_2HPO_4 0.3%,柠檬酸0.1%,MgSO_4 0.008%,ZnSO_4 0.0002%,10mM L-Orn,蒸馏水配制,初始pH调至6.2。最佳培养条件为:在28℃和200 rpm下培养120h。在此最佳条件下培养,HN6.2菌株的铁载体最高产量可达到1.1mg/mL。 本文研究发现,产铁载体培养基中加入L-鸟氨酸后铁载体的产量明显增加,而加入Fe3+后,其产量明显减少。并且,从分子水平上检测L-鸟氨酸-N-羟基化酶基因在不同条件下的表达量情况而得到同样的结果。 将HN6.2菌株在最佳培养条件下产生的铁载体进行不同的处理,采用牛津杯法和菌落计数法检测铁载体的抑菌活性,结果显示,铁载体对海洋鳗弧菌V.P、海洋副溶血弧菌W-1和枯草杆菌具有明显的抑菌活性,并且对海洋鳗弧菌V.P的抑菌圈最大;而对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、梅奇酵母WCY、黑曲霉和青霉没有抑菌作用。同时,发现Fe3+对铁载体的抑菌作用具有抑制作用。实验还表明,该铁载体的热稳定性很强,对铁载体进行加热处理后,仍具有同样的抑菌活性。 利用有机溶剂萃取法提取铁载体粗品,经HPLC半制备柱纯化,收集目的峰。利用质谱法对此目的峰进行分析,根据该组分的分子离子峰,与已知结构的铁载体比对,得到该铁载体的结构组分是异羟肟酸类Fusigen。
【学位授予单位】:中国海洋大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:Q936

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【引证文献】
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【参考文献】
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【同被引文献】
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