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《青岛科技大学》 2010年
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芯片毛细管电泳酶增强电化学检测肿瘤标记物和DNA

苏明明  
【摘要】: 本工作建立一种芯片毛细管电泳电化学检测肿瘤标记物和DNA的方法。通过邻氨基酚-过氧化氢-辣根过氧化物酶(OAP-H_2O_2-HRP)体系,利用芯片毛细管电泳电化学检测技术分离检测了肿瘤标记物和DNA。 第一章为绪论,简要介绍了芯片毛细管电泳,并就当前微流控分析中常用的电化学检测方法做了简要综述。介绍了芯片毛细管电泳发展和研究现状。 第二章介绍了PDMS/玻璃复合芯片及电极的设计与加工。该复合芯片由玻璃基底和PDMS芯片构成。本章简要介绍了PDMS芯片的加工以及玻璃基片上电极的设计和加工过程。 第三章对芯片毛细管电泳邻氨基酚(OAP)- H_2O_2-辣根过氧化物酶(HRP)酶联免疫分析体系进行了较为详细地研究,在最佳反应条件下,测定游离HRP的线性范围为4.5×10~(-9) ~ 7.8×10~(-13) mol/L,检测限为1.6×10~(-13) mol/L(S/N = 3)。 第四章利用芯片毛细管电泳邻氨基酚(OAP)- H_2O_2-辣根过氧化物酶(HRP)酶联免疫分析体系电化学检测了甲胎蛋白(AFP)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)。此方法成功地用于甲胎蛋白(AFP)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)的检测。AFP和HCG线性范围分别为1.5~66.6 ng/mL和1.7~132.5 ng/mL,检测限分别为0.48 ng/mL和0.30 ng/mL。 第五章利用芯片毛细管电泳邻氨基酚(OAP)- H_2O_2-辣根过氧化物酶(HRP)酶联免疫分析体系电化学检测了27个、39个碱基的靶DNA。此方法利用生物素修饰的DNA与亲核素修饰的辣根过氧化酶(avidin–HRP)反应形成HRP标记的DNA探针,之后与它的互补DNA链杂交。杂交反应后,混合物包括HRP标记的双链DNA(dsDNA-HRP),过量的HRP标记的单链DNA(ssDNA-HRP)和剩余的亲核素修饰的辣根过氧化酶(avidin–HRP),最后通过芯片毛细管电泳进行分离。该方法成功的分离检测了27个,39个碱基的靶DNA,它们的线性范围分别为3.0×10~(-11) -1.8×10~(-9) mol/L和4.0×10~(-11) -1.4×10~(-9) mol/L,检测限分别为8×10~(-12)mol/L和1.2×10~(-11) mol/L;并对大场杆菌基因组DNA的PCR产物进行了分离检测。
【学位授予单位】:青岛科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R446

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【参考文献】
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