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《济南大学》 2017年
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蜂毒活性肽的分离纯化及生理功能研究

孙敏  
【摘要】:蜂毒活性肽是蜂毒中的主要物质,具有抗炎、抗癌、抗辐射等功能。蜂胶含有丰富的黄酮类物质,具有抗菌、抗氧化、抗癌等多种功效。本文以蜂毒和蜂胶为原料,研究了蜂毒活性肽的分离纯化,以及蜂胶黄酮类物质的提取工艺,以抗氧化、抗痛风、抗风湿性关节炎生理活性为指标,经复配获得蜂毒蜂胶复配产品。主要研究结果如下:1.以蜜蜂蜂毒为实验材料,经Sephadex凝胶、醇沉、反相高效液相色谱(RT-HPLC)优化分离纯化条件。通过Sephadex G-25凝胶,以流速28 m L/h、上样量1.0 m L、上样浓度1.0 mg/m L,获得两个组分P1、P2。收集P1组分进行冷冻干燥,用3倍体积无水乙醇沉淀,3000 r/min离心5 min,沉淀即为蜂毒肽,测得蜂毒肽的相对分子量为2840 Da左右,提取率为96%,纯度为98%;上清经RT-HPLC,色谱柱Zorbax SB-C18(4.6×250μm)、进样量10μL、乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液为流动相,得到三种组分Q1、Q2、Q3,分别为肥大细胞脱粒肽(MCD肽)、蜂毒明肽、镇静肽,相对分子量2592 Da、2035 Da、2700 Da左右,提取率分别为78.6%、89%、70%,其中MCD肽和蜂毒明肽纯度分别为91.28%、90.16%。2.以蜜蜂蜂胶为实验材料,经单因素与响应面研究,优化蜂胶黄酮类物质的提取条件为:乙醇浓度82%,提取时间3 h,提取温度83℃,料液比1:10,在此条件下蜂胶黄酮类物质的得率为46.30%。3.蜂毒活性肽各组分抗氧化、抗痛风、抗风湿性关节炎生理活性研究。经体外抗氧化实验,0.20 mg/m L蜂毒肽对羟基自由基清除率为15.32%,对超氧化物阴离子的清除率为16.04%;相同浓度的蜂毒明肽、MCD肽对羟基自由基清除率分别为3.56%、1.14%,对超氧化物阴离子的清除率分别为4.51%、1.34%。说明蜂毒肽是蜂毒中主要抗氧化物质。经小鼠痛风实验,蜂毒肽、蜂毒明肽、MCD肽高剂量组与模型组相比XOD活性降低了46.94%、42.00%、31.54%,UA含量降低了62.01%、57.38%、59.75%;与空白组相比CRE含量高了14.63%、19.34%、20.47%,BUN含量高了12.79%、19.16%、17.17%。说明蜂毒活性肽中抗痛风的主要物质为蜂毒肽。经小鼠风湿性关节炎实验,蜂毒肽、蜂毒明肽、MCD肽高剂量组与模型组相比TNF-α含量降低28.32%、24.68%、23.29%,IL-6含量降低54.52%、51.97%、50.99%,IL-1β含量降低26.60%、20.81%、18.94%。表明蜂毒活性肽中抗风湿性关节炎的主要物质为蜂毒肽。4.蜂胶黄酮类物质抗氧化、抗痛风、抗风湿性关节炎生理活性研究。经体外抗氧化实验,0.83 mg/mL的蜂胶黄酮类物质对羟基自由基的清除率为96.39%,对超氧化物阴离子的清除率为91.89%,说明蜂胶黄酮类物质具有抗氧化的功效。经小鼠痛风实验,蜂胶黄酮类物质高剂量组XOD活性比模型组降低45.58%,UA含量降低34.38%;与空白组相比CRE含量升高7.69%,BUN含量升高17.91%。可见蜂胶黄酮类物质具有对抗痛风的作用。经小鼠风湿性关节炎实验,蜂胶黄酮类物质高剂量组TNF-α含量比模型组降低28.08%,IL-6含量降低49.44%,IL-1β含量降低18.45%。表明蜂胶黄酮类物质具有对抗风湿性关节炎的功效。5.蜂毒蜂胶抗氧化、抗痛风、抗风湿性关节炎生理活性复配条件研究。经体外抗氧化实验,0.2 mg/m L的蜂毒肽与0.83 mg/m L的蜂胶黄酮类物质按照1:5配制,对·OH的清除率为96.40%,对超氧化物阴离子自由基清除率为91.90%。经小鼠痛风实验,0.05 mg/mL蜂毒肽与0.326 mg/m L蜂胶黄酮类物质按照1:8的比例进行调配。与模型组相比,1:8组XOD活性降低56.75%,UA含量降低46.81%;与空白组相比,CRE、BUN含量分别上升8.66%、25.78%。说明复配产品具有缓解痛风的效果,且不造成肾功能的损伤。经小鼠风湿性关节炎实验,0.05 mg/m L蜂毒肽与0.326 mg/mL蜂胶黄酮类物质按照1:7的比例进行调配。与模型组相比,1:7组血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量分别降低33.28%、50.60%、15.81%。说明复配产品具有缓解风湿性关节炎的效果。目前,痛风、风湿性关节炎等慢性疾病的患病几率呈现逐年上升趋势,研究缓解痛风、风湿性关节炎的复配产品具有重要意义。对蜂毒、蜂胶产品的开发利用奠定了理论基础。
【学位授予单位】:济南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:Q51;R965

【参考文献】
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