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《济南大学》 2018年
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苯丙酮尿症尿液来源非整合诱导多能干细胞建系及拟胚体成骨分化

齐自娟  
【摘要】:背景:诱导多能干细胞的生物特性为疾病研究开启了新的思路和方法。该细胞具有强大自我更新能力,生长迅速,能定向分化为特定组织,可以提供不同分化阶段细胞,为研究疾病不同程度、不同阶段提供研究目标。经由患者体细胞重编程的iPSCs,具有个体特异性。因为能完全携带相关疾病的致病基因和个体特定遗传背景,对于对于苯丙酮尿症,特纳综合征等罕见疾病筛选疾病不同亚型药物和研究疾病致病机制等具有重要意义。目的:建立尿源诱导多能干细胞获得与鉴定方法;获取苯丙酮尿症患者尿源诱导多能干细胞并鉴定其多能性;建立诱导多能干细胞拟胚体成骨诱导模型;比较特纳综合征患者与正常人诱导多能干细胞成骨成骨差异。方法:获取正常人与苯丙酮尿症患者尿液细胞,培养扩增后通过电转将含有转录因子的非整合质粒导入细胞中诱导培养,纯化获取诱导多能干细胞;通过碱性磷酸酶染色,实时定量检测多能性基因表达,外源基因插入鉴定,核型鉴定,启动子甲基化,流式细胞术等多个实验分别鉴定正常组与疾病组患者iPSCs的多能性;通过将iPSCs诱导成为拟胚体,加入成骨培养基诱导成骨并初步比较特纳综合征患者与正常人诱导多能干细胞二者成骨差异。结果:获取到正常人与苯丙酮尿症患者尿液细胞电转并纯化多株诱导多能干细胞;通过碱性磷酸酶染色,实时定量检测多能性基因表达,核型鉴定等多个实验证明正常组与疾病组患者iPSCs具有多能性;通过将iPSCs诱导成骨,茜素红染色显示有大量矿化结节产生,实时定量显示成骨基因高表达;将特纳综合征患者与正常人诱导多能干细胞成骨诱导后进行茜素红染色,实时定量初步比较,显示二者成骨表达无差异。结论:掌握了获取尿源诱导多能干细胞非整合、无血清、无饲养层细胞重编程培养方法;获取了正常人和苯丙酮尿症患者尿源非整合诱导多能干细胞,为后续疾病研究提供了研究材料,推动苯丙酮尿症药物靶点和致病机制研究;建立了通过诱导拟胚体来获得成骨细胞的方法,比较特纳综合征患者与正常人诱导多能干细胞成骨诱导,证明特纳综合征患者成骨无异常,骨质疏松,关节炎等并发症可能由于破骨异常或者激素水平等引起。
【学位授予单位】:济南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R329.2

【参考文献】
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