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《山东轻工业学院》 2011年
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链霉菌YM的诱变选育及发酵条件优化

刘庆  
【摘要】:本文主要对链霉菌YM进行诱变选育和发酵条件的优化,以提高抗生素的发酵水平,为进一步研究和工业化生产提供支持。首先对链霉菌YM进行高产抗生素菌株的诱变选育。文中采用敏感菌-枯草芽孢杆菌作为指示菌,以牛津杯法检测抗生素的效价。对链霉菌YM进行菌种纯化并编号为YM-1,通过紫外线诱变、琼脂块法初筛和摇瓶复筛得到高产抗生素菌株YM-2;然后对紫外线诱变得到的高产菌株YM-2进行亚硝酸诱变、初筛和复筛得到高产菌株YM-3,其发酵上清液的抑菌圈直径达到23.6mm,与出发菌株YM-1相比,YM-3产抗生素的能力提高60.5%,且经过多次传代实验表明遗传稳定性较好。 在菌株YM-3的基础上,优化发酵培养基和发酵培养条件以提高菌株YM-3的抗生素的产量。通过单因素实验分别考察碳源、氮源、无机盐等对菌株YM-3产活性物质的影响,结果发现:葡萄糖4.0%、蛋白胨1.5%、K_2HPO_4 25.0×10-3%,NaCl 0.15%利于抗生素的产生。然后经Plackett-Burman实验设计筛选出葡萄糖、蛋白胨、NaCl三个主要因素,最后利用中心组合实验确定3种组分的最佳组成为葡萄糖4.68%、蛋白胨1.25%、NaCl 0.12%。通过发酵条件的单因素实验和正交实验的分析,得出YM-3的最佳发酵培养条件为:最佳接种龄为90h、接种量为12mL、摇瓶的装液量为60mL/250mL、摇床转速为160r/min、摇床培养温度为30℃、发培养基的初始pH为7.2。发酵液的抑菌圈直径达37.6mm。 本文最后对发酵液抗生素的理化性质做了初步研究。实验结果表明:抗生素在pH8.0-12.0下较稳定,在pH5.0时,稳定性较差;90℃水浴30min活性降低10.1%,60min降低32.9%,100℃水浴15min完全失活,热稳定性较好;对紫外线稳定。采用pH纸层析和Doskochilova系统综合纸层析发现,活性物质有两个组分,一种组分可能属于强极性、碱性非水溶性、金色抗霉素类抗生素,另一种组分也是可能是酸性、强极性抗生素。
【学位授予单位】:山东轻工业学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:TQ465.2

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【参考文献】
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