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《齐鲁工业大学》 2017年
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益生元—低聚半乳糖新型递送系统的研究

孙纯  
【摘要】:低聚半乳糖是功能性低聚糖的一种,具有天然属性,是母乳中的一种重要益生元。低聚半乳糖在乳液中含量较高,适口性、水溶性和稳定性都较好,可以促进人体肠道中的益生菌尤其是双歧杆菌增殖,同时也能抑制腐败菌的生长。具有降低血清中总胆固醇的浓度、改善体内脂质代谢和促进矿物质吸收等多种功效。肠道中的益生菌可以利用低聚半乳糖增殖,同时还能产生大量的胞外多糖。胞外多糖不仅有抗肿瘤活性、免疫活性,还能促进益生菌在肠道内长期定殖。然而,低聚半乳糖因其使用过程中不能靶向针对肠道细胞而受到限制。为了突破这个难关,我们研究了一种新型低聚半乳糖递送系统:利用菌蜕作为低聚半乳糖的递送载体。菌蜕是流失了内容物的革兰氏阴性细菌空壳,但是其表面结构完整,糖蛋白等免疫识别系统没有受到损坏,所以它能够特异性的识别并粘附到特定细胞。实验中成功制备出合格ECN菌蜕,ECN裂解效率为99.99%。优化最佳菌蜕制备条件是:当OD600值为0.5左右时启动裂解蛋白,是最好的时机。在pH7.0的LB液体培养基中细菌可以较好的完成裂解。用ECN菌蜕成功搭载低聚半乳糖,优化搭载条件得出:100μL搭载体系中,低聚半乳糖的浓度应为120mg/mL,菌蜕用量应该是2mg,搭载时间应该是12 h,这样的体系是最优的搭载体系。用不同形式的低聚半乳糖来饲养肠道菌群已经受损的小鼠。然后后期实验分别测试用菌蜕搭载后的低聚半乳糖和普通的低聚半乳糖对小鼠肠道整个菌群环境的影响变化。实验结果表明,菌蜕搭载后的低聚半乳糖在调节肠道菌群各方面的作用效果明显优于游离的低聚半乳糖和单纯的菌蜕。随后,我们初步研究了该递送系统对小鼠降血脂的机理。我们使用荧光定量PCR,来分析HMG-CoA-R和LDL-R的表达量变化。管家基因是GAPDH基因,同时以HM G-CoA-R和LDL-R基因作为目的基因。最后结果表明,低聚半乳糖-菌蜕递送系统可以在一定程度上调节HMG-CoA-R和LDL-R基因的基因表达量,从而可以达到调节小鼠机体内脂质代谢的作用。
【学位授予单位】:齐鲁工业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:TS201.2

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