收藏本站
《山东轻工业学院》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

产植酸酶木霉菌的遗传基因改良

武燕平  
【摘要】: 植酸酶(myo-inositol hexakisphosphate phosphohydrolases),是催化植酸及植酸盐水解成肌醇与磷酸的一类酶的总称。植酸酶主要存在于植物、微生物和一些动物组织中。单胃动物如猪、鱼和家禽类不能消化植酸,饲料中加入植酸酶分解植酸,促进单胃动物对磷和金属元素的吸收和利用,另外还可以降低环境中的磷污染。 本文以木霉为研究对象,以各地采集木霉为基础筛选高产植酸酶菌株。通过植酸钙透明圈筛选法,再经过植酸酶液体发酵酶活最终选择11号菌株为出发菌株进行基因组改组(Genome shuffling)技术。11号菌株通过紫外诱变和亚硝基胍诱变,筛选优良诱变子,将两种诱变子的原生质体分别进行热灭活和紫外灭活,然后随机融合,筛选融合子。 紫外诱变和亚硝基胍诱变均以出发菌株为诱变菌株,选着合适的剂量进行诱变改良。从大量的诱变子中通过初筛和复筛筛选出合适的诱变子。紫外诱变子Ⅱ的酶活为最高,且5代后培养未发生回复突变,酶活为1.21±0.013 U/L,将此菌株编号为UV-Ⅱ(p0.05)。亚硝基胍诱变中NTG-4酶活为0.94±0.014 U/L(p0.05)。 对木霉的原生质体制备和再生条件进行了研究。分别考察了菌体菌龄、酶浓度、酶解时间、酶解温度等因素对木霉原生质制备和再生的影响。霉菌细胞壁主要成分是多糖,大多数是几丁质、少数种类是纤维素。以UV-Ⅱ出发菌株,以蜗牛酶为溶菌酶制备木霉原生质体。研究得到木霉原生质体制备条件:蜗牛酶浓度2.0mg/mL,菌龄为20h,酶解时间2.0 h,酶解温度30℃。 基因组改组技术将UV-Ⅱ和NTG-4的原生质体分别进行热灭活和紫外灭活,然后随机结合,使用PEG为融合剂进行原生质体融合。两两结合进行4轮基因组改组,筛选到融合子Fu-②,酶活为2.4±0.016 U/L,比原始菌株分别高出320%。融合子遗传特性稳定。 对融合子Fu-②进行液体培养基优化实验,得到优化培养基Ⅱ培养基:葡萄糖3.0 g ,可溶性淀粉3.0 g,麸皮0.05 g,NH4NO30.5 g,MgSO4·7H2O 0.05 g,MnSO4·7H2O 0.003 g,FeSO4·7H2O 0.003 g,CaCO3 0.5 g,pH值5.5-6.0,115℃30min灭菌。同时对融合子Fu-②进行液体发酵条件优化:转速115r/min,装液量100 ml(500mL三角瓶),接种量为3%,温度30℃,发酵时间120h,酶活3.68 U /L,酶活提高33.3%。
【学位授予单位】:山东轻工业学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:Q933

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 蒋家珍,赵美琦,薄怀霞,肖杰,李学锋;生物农药在草坪病害防治中的应用研究[J];草业科学;2004年11期
2 杨平平,许正宏,王燕,史宝军,陶文沂;植酸酶菌种筛选方法的研究[J];工业微生物;2004年03期
3 赵凯;平文祥;张丽娜;刘军;林燕;金涛;周东坡;;用Genome shuffling技术选育紫杉醇高产菌株[J];中国科学(C辑:生命科学);2008年03期
4 彭远义,马丽苹,李春明,刘生峰,周泽扬;植酸酶产生菌黑曲霉N14的诱变选育及其基因分析[J];激光生物学报;2005年03期
5 王慧中,赵培洁;多效有机菌肥的研制及其特性研究[J];江西农业学报;1999年03期
6 姚斌,范云六;植酸酶的分子生物学与基因工程[J];生物工程学报;2000年01期
7 罗会颖,姚斌,袁铁铮,王亚茹,史秀云,伍宁丰,范云六;来源于Escherichia coli的高比活植酸酶基因的高效表达[J];生物工程学报;2004年01期
8 赵文婷;邹懿;胡昌华;;微生物菌种改良的新方法新策略[J];生物工程学报;2009年06期
9 张丽萍;程辉彩;田连生;黄亚丽;张根伟;董超;李书生;甘双友;;植酸酶高产菌株的紫外线-空气等离子体复合诱变选育[J];中国饲料;2006年09期
10 周紫雨;张俊红;;植酸酶在饲料中的应用[J];饲料研究;2006年07期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈建爱,王未名,陈为京;木霉与棉萎灵抑制黄枯萎病菌生长机理比较分析[J];山东农业科学;2002年05期
2 毛非鸿;魏练平;江丽;蒋立科;;哈茨木霉H-13培养条件的优化[J];安徽农学通报;2007年11期
3 王建锋;陆宁海;;木霉菌在农业中的研究与应用前景[J];安徽农学通报;2008年14期
4 杨宇;吴元华;郑雅楠;;利用重叠延伸PCR技术进行DNA的人工合成[J];安徽农业科学;2006年09期
5 许钦坤;赵翠燕;;植酸酶及其应用研究[J];安徽农业科学;2007年02期
6 李戈;曾会才;;诱变在产抗生素微生物育种中的应用进展[J];安徽农业科学;2007年04期
7 金海友;吕淑霞;于冰;李峰;;绿色木霉菌T23发酵液对番茄几种防御酶活性的影响[J];安徽农业科学;2007年08期
8 袁素贤;阚国仕;陈红漫;;抗逆生防木霉筛选及其相关因子诱导[J];安徽农业科学;2007年16期
9 于慧瑛;吕国忠;孙晓东;赵志慧;;病健人参根际土壤真菌种类及数量的研究[J];安徽农业科学;2007年26期
10 尹淑丽;;土壤处理防治土传病害的研究进展[J];安徽农业科学;2007年28期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 郭丽;王娇娇;肖凯;;植物植酸酶的生化特征和转基因表达植酸酶的研究进展[A];作物逆境生理研究进展——中国作物生理第十次学术研讨会文集[C];2007年
2 陈红漫;刘剑利;阚国仕;;耐药性木霉几丁质酶的诱导及其酶学性质研究[A];中国生物化学与分子生物学会农业生物化学与分子生物学分会第六次学术交流会论文集[C];2004年
3 车程川;吴远征;张玉臻;;黑曲霉NR13 phyA基因在毕赤酵母中的分泌表达[A];山东微生物学会第六次会员代表大会暨2004年学术年会论文集(上)[C];2004年
4 陈建爱;王未名;;木霉突变体的变异特性分析[A];第五届核农学青年科技工作者学术交流会论文集[C];2006年
5 曾华兰;何炼;李琼芳;叶鹏盛;韦树谷;何遵信;叶香平;;麦冬根腐病的发生及生物防治初探[A];2005中国植病学会、中国菌物学会北海联合年会论文集[C];2005年
6 陈建爱;王未名;;木霉突变菌株T1010耐药及防病增效分析[A];中国菌物学会第二届青年菌物学术讨论会论文集[C];2006年
7 陈建爱;王未名;祝清俊;孙永堂;;木霉突变体T1010的变异特性分析[A];第八届海峡两岸菌物学学术研讨会论文集[C];2007年
8 梁志怀;魏林;陈玉荣;罗赫荣;;水稻纹枯病抗生木霉菌的筛选及其抗菌物质的研究[A];植物保护科技创新与发展——中国植物保护学会2008年学术年会论文集[C];2008年
9 李淼;檀根甲;丁克坚;张成林;承河元;韩翔;薛莲;李丽;;木霉菌在植物病原真菌生物防治上的研究与应用前景[A];中国植物病理学会第六届青年学术研讨会论文集——植物病理学研究进展(第五卷)[C];2003年
10 赵永强;台莲梅;左豫虎;张亚玲;郑雯;靳学慧;;木霉菌T20G对立枯丝核菌拮抗机制的初步研究[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 彭莹;土星拟威尔酵母WC91-2菌株嗜杀因子和β-1,3-葡聚糖酶的研究[D];中国海洋大学;2010年
2 罗琰;康宁霉素抗烟草花叶病毒活性及其调控拟南芥根系生长的机制[D];山东大学;2010年
3 钊倩倩;青霉植酸酶phyA基因的克隆、表达及蛋白性质的改良[D];山东大学;2010年
4 付宏歧;利用转基因烟草和红花表达成纤维细胞生长因子21(FGF21)的研究[D];吉林农业大学;2011年
5 陈希杨;高产雷帕霉素吸水链霉菌的遗传改造和发酵过程优化[D];浙江大学;2011年
6 姚大伟;短小芽孢杆菌碱性蛋白酶酶学特性及其酶基因克隆、表达的研究[D];南京农业大学;2010年
7 张志军;粪生链霉菌HLF-43的代谢功能改造与突变株新产抗肿瘤活性产物研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
8 张伟;利用生物技术开发一种新乳糖酶及其高效生产途径[D];中国农业科学院;2002年
9 李敏;高甜度monellin基因和透明颤菌血红蛋白基因在毕赤酵母中的表达[D];中国农业科学院;2003年
10 彭远义;植酸酶产生菌的选育及高表达工程菌的构建研究[D];西南农业大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈若雯;高产胞外多糖乳酸乳杆菌的选育及其发酵条件的优化[D];华中农业大学;2010年
2 郭俊红;利用原生质体融合及基因工程的方法对柑橘采后生防菌34-9遗传改良的初步研究[D];华中农业大学;2010年
3 仲维玮;植物性替代蛋白源在罗非鱼饲料中的研究与利用[D];华中农业大学;2010年
4 李兆防;拮抗毛壳和木霉混用防治土传病害的初步研究[D];山东农业大学;2009年
5 岳晖;DsbC对植酸酶体外折叠及功能影响的研究[D];山东农业大学;2010年
6 仲伟磊;引入新的二硫键对植酸酶结构和功能的影响[D];山东农业大学;2010年
7 陈曦;东北地区药用植物根际土壤真菌多样性的研究[D];辽宁师范大学;2010年
8 张粟;硬颗粒饲料维生素K_3、植酸酶真空喷涂技术研究[D];河南工业大学;2010年
9 杜巧燕;应用基因组改组技术选育广域pH耐受的谷氨酸高产菌株[D];江南大学;2010年
10 耿杰;粉煤灰纤维的微观结构及阳离子化改性研究[D];华东理工大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李祥锴,安志东,朱非;林肯链霉菌双亲灭活原生质体融合的研究[J];氨基酸和生物资源;2001年04期
2 张蓉,马建华,杨芳,先晨钟,张社会;多种药剂防治苜蓿蓟马的田间药效试验[J];草业科学;2004年01期
3 单安山,王安,徐奇友,石宝明,杜鹃,宋金彩,马玺,王丽娟;植酸酶的特性及其在家禽饲粮中应用的研究 2.植酸酶在家禽饲粮中应用的研究[J];东北农业大学学报;2002年01期
4 张娜;郭庆启;赵新淮;;东北土壤中产植酸酶菌株的筛选及鉴定[J];东北农业大学学报;2008年01期
5 项存悌,高克祥,何秉章,李万海,荣立军,高峰;杨树烂皮病生物防治的研究[J];东北林业大学学报;1991年06期
6 董生杰,张苓花,陈海昌,王运吉;产植酸酶菌株的筛选[J];大连轻工业学院学报;1999年04期
7 张若寒;植酸酶含量测定的必要性与两步测定方法的评价[J];饲料工业;2001年09期
8 姚茂忠,王润莲;植酸酶对黄羽肉鸡生产性能及相关指标的影响[J];广东畜牧兽医科技;2004年05期
9 刘宇鹏;朱蕾蕾;郑璞;倪晔;孙志浩;;琥珀酸发酵高产菌株的选育[J];工业微生物;2007年02期
10 徐敏;郑璞;倪晔;孙志浩;;琥珀酸放线杆菌的耐高浓度钠离子菌株选育[J];工业微生物;2008年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杜丽敏;段相林;;植酸酶的来源与应用[J];安徽农业科学;2007年16期
2 张荣奎;刘爱花;贺淹才;;黑曲霉植酸酶基因序列的研究[J];饲料工业;2006年12期
3 赵赣;;从酶的专一性看植酸酶与酸性磷酸酶的关系[J];生物学杂志;2010年03期
4 邹立扣;王红宁;;植酸酶及其植物基因工程[J];微生物学通报;2005年06期
5 李春明;彭远义;;2株黑曲霉植酸酶的分离纯化及其酶学性质研究[J];西南农业大学学报(自然科学版);2006年04期
6 曲丽君;;泡盛曲霉植酸酶的酶学性质研究[J];微生物学杂志;2007年02期
7 马廷臣;曾汉来;秦发兰;张端品;;植酸酶基因工程研究进展[J];华中农业大学学报;2007年05期
8 黄添孙;骆旭添;;植酸酶phy A基因克隆表达研究[J];现代农业科技;2008年13期
9 白立景;鞠辉明;牟玉莲;杨述林;李奎;陈明勇;;大肠杆菌植酸酶appA2基因真核表达载体的构建及在细胞中的表达[J];中国兽医杂志;2011年07期
10 郭会灿;李会然;;植酸酶活力的测定方法及应注意问题[J];科技信息;2009年36期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张铁鹰;刘志伟;黄玉亭;孙杰;陈志伟;;植酸酶在肉仔鸡消化道内环境下活性变化的体外研究[A];首届饲料酶制剂应用技术论坛暨饲料酶制剂大会论文集[C];2009年
2 张铁鹰;武海龙;秦贵信;;肉仔鸡日粮中二价金属离子对植酸酶活性影响的体外研究[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
3 李成会;;蚯蚓体内植酸酶来源的研究[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
4 黄志勇;徐帅;朱秀乾;;日粮中添加植酸酶对产蛋期金定鸭血清生化指标、骨骼发育状况影响的研究[A];2008山东饲料科学技术交流大会论文集[C];2008年
5 王景成;杨维仁;杨在宾;丁永敏;姜淑贞;张桂国;;不同类型日粮添加酶制剂对鸭蛋品质和经济效益的影响[A];2008山东饲料科学技术交流大会论文集[C];2008年
6 王志红;董晓芳;佟建明;张国庆;张琪;许尚忠;;植酸酶高产菌株的诱变选育[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
7 李淼;刘芹;刘庆洪;王贺祥;;蒙古口蘑、紫带栓菌漆酶和杏鲍菇植酸酶的分离纯化与理化性质研究[A];海峡两岸第十届菌物学暨第三届食药用菌学术研讨会论文摘要集[C];2011年
8 王庆云;杨维仁;杨在宾;刘发孝;;不同无机磷水平日粮添加植酸酶对肉鸡生长及屠宰性能的影响[A];2008山东饲料科学技术交流大会论文集[C];2008年
9 汤海鸥;;应用琼脂扩散法测定饲料中木聚糖酶含量研究[A];2009山东饲料科学技术交流大会论文集[C];2009年
10 唐茂妍;王海彦;计成;;最佳酶制剂应用体系(OEA)的理论与实践[A];饲用酶制剂开发与应用技术交流研讨会论文集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前3条
1 北京市友谊饲料公司 阎仲双;浅谈国内预混料市场[N];中国畜牧水产报;2000年
2 浙江省农业科学院 许尧兴;畜禽饲料中使用植酸酶应持慎重态度[N];中国畜牧报;2004年
3 张军 田琳;高营养“黑粒小麦A20”繁育成功[N];农资导报;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 孙宏选;高剂量植酸酶对肉鸡生产性能及能量和蛋白质养分利用率的影响[D];中国农业科学院;2011年
2 付大伟;Yersinia spp.来源植酸酶的酶学性质及结构与功能研究[D];中国农业科学院;2010年
3 李中媛;绵羊瘤胃环境木聚糖酶和植酸酶转录水平基因多样性分析和几个新颖木聚糖酶和植酸酶的研究[D];中国农业科学院;2013年
4 舒波;丛枝菌根真菌促进枳(Poncirus trifoliata L.Raf)磷吸收效应及其机理研究[D];华中农业大学;2013年
5 王祎;油菜超量表达柠檬酸合成酶和植酸酶基因提高抗土壤磷铝胁迫的研究[D];华中农业大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 柳鸿敏;转基因玉米中植酸酶活性检测方法研究[D];吉林大学;2011年
2 张蕊;天牛肠道细菌来源植酸酶的基因克隆、表达及其性质研究[D];中国农业科学院;2011年
3 陈璨;低温植酸酶产生菌的生物学特性研究[D];大连工业大学;2011年
4 刘翼;植酸酶体外水解植物性原料工艺参数及饲喂效果的研究[D];武汉工业学院;2012年
5 李晓龙;木霉产植酸酶的能力及其测定方法[D];山东理工大学;2010年
6 刘永超;植酸酶和不同钙源对肉鸡钙和磷代谢的影响[D];河南科技大学;2012年
7 仲伟磊;引入新的二硫键对植酸酶结构和功能的影响[D];山东农业大学;2010年
8 张梦晗;转植酸酶基因玉米的稳定性及对植酸磷降解效果的研究[D];吉林大学;2012年
9 邱梅平;不同剂量及不同剂型植酸酶对蛋鸡生产性能及养分利用率的影响[D];南京农业大学;2009年
10 陈琳;植酸酶对肉鸭生产性能及营养物质利用的影响[D];南京农业大学;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026