收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

秀丽隐杆线虫益生菌动物模型的建立及应用研究

王春阳  
【摘要】: 由于畜禽肠道菌群复杂、无菌动物的费用昂贵和高技术要求、限制了乳酸菌等益生菌作用效果及机理的研究,致使乳酸菌等益生菌制剂(微生态制剂)的质量难以控制、合理的开发应用受到了很大的影响。因此,本研究选用肠道结构简单、细胞内部基因调控研究比较深入、在病原菌激活机制、感染过程及免疫反应等诸多方面和哺乳动物存在高度相似性的秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)作为实验动物,以沙门氏菌作为病原指示菌,以乳酸菌为研究益生菌,建立了线虫益生菌实验动物模型,并应用于乳酸菌的研究。 本研究首先采用改良线虫液体培养法,成功孵化了秀丽隐杆线虫突变株SS104;在确定了沙门氏菌的最适攻毒量及乳酸菌的最佳保护剂量基础上,建立了秀丽隐杆线虫益生菌动物模型;以线虫的存活率为判定标准,从17株乳酸菌中筛选出了抑菌效果较好的S64株和较差的CL11株菌,并通过对线虫存活率及肠道菌数量检测分析,比较了两株的活菌、灭活菌和培养上清液作用效果的差异;探讨了线虫动物模型筛选的乳酸菌对断奶仔猪和雏鸡生产性能、腹泻率、免疫性能及肠道菌群的影响,从而验证线虫动物模型筛选的乳酸菌对线虫的作用效果与对畜禽作用效果的相似性。 秀丽隐杆线虫益生菌动物模型的成功建立为乳酸菌等益生菌的筛选、作用效果及机理研究提供了技术支撑,为微生态制剂的质量控制、开发利用提供了保障。本研究内容共分四部分。 试验一秀丽隐杆线虫益生菌动物模型的建立 应用改良线虫液体培养法,将同期化的秀丽隐杆线虫(SS104)L4期幼虫孵化、分装于24孔培养板,再将24孔随机分为不同处理组,每组4孔,每孔15-20条线虫;然后以GFP标记沙门氏菌(DT104)作为线虫的致病菌、以乳酸菌(S64株)作为线虫的有益保护菌,探索建立线虫动物模型的条件及效果。结果显示,改良线虫液体培养法操作简单、条件易控制;沙门氏菌浓度在107cfu/ml、108cfu/ml和109cfu/ml均能致死线虫,但以109cfu/ml时致死速度快、致死率最高,于第6d,所有线虫全部死亡(致死率100%);第10d时,浓度为108cfu/ml乳酸菌对线虫存活率达到87.9%,较对照组提高5.1%,而浓度为109cfu/ml的乳酸菌对线虫的存活率仅为63.2%,较对照组下降19.2%;保护实验第9d,攻毒前加入乳酸菌和攻毒后加入乳酸菌对线虫的保护率分别为44.9%和58.1%;说明乳酸菌能够有效保护线虫免受GFP标记沙门氏菌的感染。结果表明,本研究成功建立了秀丽隐杆线虫益生菌动物模型。 试验二利用线虫动物模型对乳酸菌的筛选研究 首先应用16S rRNA序列分析法对17株乳酸菌株进行了鉴定,在此基础上,以沙门氏菌DT104为病原指示菌,进行了乳酸菌体外抑菌和线虫体内抑菌实验。结果显示,17株乳酸菌株对沙门氏菌的抑菌圈直径在19mm-25mm之间,培养液上清也均能有效抑制沙门氏菌的生长(OD600值在0.058-0.074之间);17株乳酸菌对线虫的保护率为-2.6%-56%不等,其中CL9、L3、LB1、LB4、S64株的保护率分别为59%、53.2%,51.1%、58.7%和55.7%(P﹤0.05),而CL10、CL11、CL12、LB2四株菌株保护率仅为-3.2%、-6.2%,2.2%和2.9%(P﹤0.01)。该研究结果表明,秀丽隐杆线虫动物模型对乳酸菌的筛选效果优于体外抑菌实验筛选法。 试验三线虫益生菌动物模型的应用研究 ——筛选乳酸菌S64株和CL11株作用效果比较研究 通过对线虫存活率和肠道菌数的检测,对线虫动物模型筛选的有效乳酸菌株S64和无效菌株CL11的作用效果进行了比较试验,结果显示:(1)S64乳酸菌株组和CL11株组线虫存活率分别为72.2%和25.7%,对线虫的保护率分别为51.7%和2.2%,差异显著(P﹤0.05);灭活S64乳酸菌株组和CL11株组线虫存活率分别为57.4%和25.8%,对线虫的保护率分别为33.9和2.3%,差异显著(P﹤0.05); S64和CL11株乳酸菌培养上清液组线虫存活率分别为36.7%和35.8%,对线虫的保护率分别为13.2%和12.3%,差异不显著(P0.05)。(2)S64株活菌组线虫肠道内乳酸菌数高于活菌CL11株组,线虫肠道内沙门氏菌数低于活菌CL11株组和对照组,差异显著(P﹤0.05);灭活菌S64株组线虫肠道内沙门氏菌数低于灭活菌CL11株组和对照组,差异显著(P﹤0.05);S64和CL11株培养上清液组线虫肠道内沙门氏菌数均与对照组差异不显著(P0.05);虫体荧光结果显示,S64株乳酸菌活菌和灭活菌均可有效抑制沙门氏菌在线虫肠道内的生长。 试验四线虫益生菌动物模型的应用研究 ——筛选乳酸菌对畜禽作用效果的研究 为探讨线虫动物模型筛选的乳酸菌对畜禽作用的有效性,本研究以断奶仔猪和雏鸡作为实验动物进行了饲喂实验。 (1)选用大三元断奶仔猪96头,随机分为8组,分别饲喂乳酸菌S64、LB1、LB2、ALB2、L3和CL11株发酵液体饲料,对照1组饲喂基础颗粒料,对照2组饲喂湿拌料,实验至21d经检测料肉比、腹泻率和肠道菌数,结果显示,乳酸菌ALB2、S64、LB1和L3株发酵饲料组料肉比较对照2组分别下降了49%、47%、36%和24% (P﹤0.05),腹泻指数较对照2组分别下降了50.89%、64.29%、93.51%和32.5%(P﹤0.05),腹泻率较对照2组分别下降了50.01%、81.82%、63.65%和23.72%;CL11和LB2株组料肉比分别提高了4%和12%(P0.05),腹泻指数分别提高了15%和27.27%(P0.05),腹泻率分别提高了21.78%和29.95%(P0.05);对照1组较对照2组料肉比、腹泻指数和腹泻率分别下降了15%、7.14%和16.63%(P0.05);LB1株发酵组较对照组和LB2发酵组肠道乳酸菌数量显著增加( P 0. 05),肠杆菌数量显著减少( P 0. 05)。 (2)选用200羽1日龄海兰褐蛋公鸡,随机分成4组,第1、2、3组分别为乳酸菌S64、L3和CL11株饮水组,第4组为空白对照组,对各组鸡抗体效价、免疫器官指数和肠道菌群数进行测定,结果显示,35日龄时,第1、2组血凝抑制效价显著高于对照组和第3组(P﹤0.05),第3组较对照组差异不显著(P0.05);第1、2组鸡肠道乳酸菌数量较第3组和对照组增加显著(P﹤0.05),肠杆菌数量显著减少(P﹤0.05);第1组胸腺、法氏囊和脾脏指数均显著高于对照组(P﹤0.05),第3组较对照组差异不显著(P0.05)。ERIC-PCR结果显示,S64株组肠道菌群指纹条带较L3株和CL11株组明显增多,表明S64株更能有效调整鸡肠道菌群平衡。 本试验结果显示,线虫动物模型筛选的有效乳酸菌(S64和LB1株)能够明显提高断奶仔猪的生产性能和雏鸡的免疫等功能,表明线虫动物模型筛选的乳酸菌对线虫的作用效果与对畜禽作用效果是相似的。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 王云;杨亚楠;简风雷;吴杰宇;沈洁;王顺昌;;基于模式生物秀丽隐杆线虫的三丁基锡生态毒性评价[J];生态学报;2011年13期
2 侯庆明;;秸秆加乳酸菌发酵饲料节能环保养猪新技术[J];农业知识;2011年21期
3 刘雪兰;孙菲菲;李培英;余为一;;寄生虫基因功能研究的模式生物-秀丽隐杆线虫[J];中国兽医杂志;2011年08期
4 霍兴;;节食通过N-酰基乙醇胺信号介导途径影响线虫寿命[J];农业生物技术学报;2011年04期
5 付艳芳;;青贮玉米的制做工艺[J];河北农业;2010年09期
6 ;剑桥大学将第21种氨基酸引入线虫细胞[J];广东农业科学;2011年16期
7 柴晓兰;;青贮玉米饲料在奶牛养殖中的饲喂优势[J];养殖与饲料;2011年07期
8 刘夏楠;唐义;任冲;张宏;苗春光;余增亮;王相勤;;粉煤灰絮凝除藻配方优化及相关毒理学评价[J];安徽农业科学;2011年23期
9 翟桂玉;;玉米带穗青贮技术[J];农业知识;2011年24期
10 刘志祥;徐刚标;曾超珍;;遗传学教学中应用模式生物的必要性及形式[J];现代农业科技;2011年11期
11 张玉玲;夏银可;靳丽军;翟小伟;付祥龙;陈晓丽;麻雪刚;刘凤军;;microRNA与胎盘发育关系的研究进展[J];中国畜牧兽医;2011年08期
12 黄修奇;王中华;;酸化玉米对断奶仔猪生长性能和胃肠道内环境的影响[J];中国畜牧杂志;2011年17期
13 赵江丽;;青贮饲料的制作要点[J];中国畜牧兽医文摘;2011年04期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王春阳;牛钟相;Joshua Gong;;秀丽隐杆线虫益生菌实验动物研究模型的建立[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(下册)[C];2010年
2 孙启忠;郭艳萍;玉柱;张慧杰;;青贮系统中的乳酸菌及其添加剂研究进展[A];中国草学会青年工作委员会学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
3 王晓力;张慧杰;孙启忠;玉柱;郭艳萍;;饲草青贮系统中的乳酸菌及其添加剂研究进展[A];第三届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会会议论文摘要集[C];2011年
4 李清源;李镝锐;汪明;;秀丽隐杆线虫实验室培养方法的研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
5 张慧杰;孙启忠;王晓力;温定英;李峰;;苜蓿青贮中乳酸菌生长特性[A];第三届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会会议论文摘要集[C];2011年
6 李勇;董翠芳;欧国兵;;乳酸菌产香机理和特性的研究[A];中国奶业协会年会论文集2008(下册)[C];2008年
7 王云彪;侯晓丽;;温度对Pb、Cd、Hg、Cu胁迫下线虫毒性及HSP90表达的影响[A];中国生理学会第九届全国青年生理学工作者学术会议论文摘要[C];2011年
8 刘云鹏;胡新宇;周静;王安平;刘惠瑜;;乳酸菌及其在乳品工业中的应用与展望[A];中国奶业协会年会论文集2008(下册)[C];2008年
9 段葆兰;;“酸豆乳”研究[A];北京食品学会1982年年会论文(摘要)[C];1982年
10 檀子贞;王红育;吴雅静;;香蕉乳酸菌发酵酸奶的研究[A];中国营养学会第八次全国营养学术会议论文摘要汇编[C];2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王春阳;秀丽隐杆线虫益生菌动物模型的建立及应用研究[D];山东农业大学;2009年
2 田鸿;川西高原自然发酵牦牛酸奶中乳酸菌遗传多样性及优良菌株筛选[D];四川农业大学;2010年
3 易华西;分泌广谱抗菌肽乳酸菌的筛选及高效表达的调控研究[D];哈尔滨工业大学;2010年
4 周前进;利用秀丽隐杆线虫表达捻转血矛线虫H11蛋白的转基因研究[D];浙江大学;2010年
5 孙洁;乳酸菌发酵剂菌株的自溶特性及机理研究[D];中国农业科学院;2010年
6 闵伟红;乳酸菌发酵改善米粉食用品质机理的研究[D];中国农业大学;2003年
7 张清丽;酪蛋白活性肽对乳酸菌生长代谢及酸乳发酵影响的研究[D];华南理工大学;2011年
8 李维新;优良MLF乳酸菌选育及其产酶特性研究与应用[D];福建农林大学;2012年
9 严立波;线虫体细胞和生殖细胞命运的决定与维持需要细胞自我吞噬,LSY-2和SUMO化修饰通路的协同作用[D];中国协和医科大学;2007年
10 白凤翎;蛋白水解物促乳酸菌增殖及高密度培养体系研究[D];北京林业大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘艳姿;乳酸菌的生理功能特性及应用的研究[D];燕山大学;2010年
2 王秀玲;DhHP-6对线虫在热环境下的保护作用[D];吉林大学;2011年
3 陈亮稳;蜜环菌菌索多糖延缓秀丽隐杆线虫衰老机理的初步研究[D];安徽大学;2012年
4 钱洋;乳酸菌对食品中常见霉菌的抑制和黄曲霉素的去除[D];山东大学;2012年
5 杨杨;西藏地区藏嵩草附着乳酸菌的分离、鉴定及理化特性研究[D];兰州大学;2012年
6 曲玲童;锦州腌渍小黄瓜中耐盐性乳酸菌的分离鉴定与性能研究[D];渤海大学;2012年
7 张燕;海产品中乳酸菌的筛选与应用研究[D];集美大学;2012年
8 热娜·米吉提;新疆饲料乳酸菌分离鉴定及多样性分析[D];新疆大学;2012年
9 卿蔓君;内蒙古东部地区传统发酵酸牛乳中乳酸菌的分离鉴定[D];内蒙古农业大学;2011年
10 王韵;蔬菜发酵专用乳酸菌选育及其菌剂制备核心技术研究[D];南昌大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 中国食品科学技术学会乳酸菌分会;中国乳酸菌产业进入快速发展期[N];中国食品报;2011年
2 苗君莅 陈有容 齐凤兰 郭本恒;乳酸菌在乳制品及其他食品中的应用拓展[N];中国食品报;2011年
3 吴绵;太子奶发力要奔500强[N];中国质量报;2007年
4 嘉兴酿造总公司 汪建国;浅谈乳酸菌在黄酒生产中的作用[N];华夏酒报;2010年
5 实习记者 何慧;乳酸菌发酵广受欢迎[N];四川日报;2010年
6 中南大学湘雅医院营养科教授 李惠明;“三酸”乳品怎么选?[N];健康时报;2008年
7 梅一朵;乳酸菌饮料选购要“挑剔”[N];中国质量报;2007年
8 李同斌 本报记者 姜正军;以实业报国为己任振兴民族乳酸菌发酵奶[N];中国食品质量报;2004年
9 ;秸秆青贮制作技术[N];通辽日报;2005年
10 ;秸秆青贮“青宝Ⅱ号”独占鳌头[N];瓜果蔬菜报.农业信息周刊;2006年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978