三种传统配伍中药抗氧化特性的研究
【摘要】：
研究发现,自由基对机体的氧化损伤与人体的多种疾病有着紧密的关系。中草药是抗氧化成分的重要来源,许多研究发现中草药的药理作用与抗氧化活性成分有关。我国有丰富的中草药资源,其中有201种中药因其安全性比较明确已被列为可直接应用到保健品或食品中。传统中药源功能食品常以复方形式出现,药对是复方的基本单位。因此,筛选和分析药对中的抗氧化活性物质及药理作用,对开发中药源食品具有重要的理论和实际意义。
据文献记载黄芪、甘草和白芍均有较强的抗氧化功能。本论文研究了这三种中药及其药对不同有机溶剂提取物抗氧化活性的协同增效作用;研究了黄芪甘草药对不同溶剂提取物的抗氧化活性变化特性,分析了黄芪甘草药对体外保护细胞氧化损伤的生理机制,并初步对其中的抗氧化物质基础进行了初步鉴定。主要研究结果如下:
1、黄芪、甘草和白芍中药不同有机溶剂提取物抗氧化活性的研究发现,中药配伍之后,在清除DPPH自由基能力上并不是单药的量的加和,配伍后清除能力都有不同程度的增加。并且清除能力的强弱受提取溶剂的极性影响,极性更大的溶剂萃取得到的中药提取物其清除能力更强;白芍-甘草、黄芪-甘草清除自由基能力均与其总酚含量存在较好的线性关系,表明总酚物质在本研究的中药抗氧化方面起了重要作用。
2、黄芪甘草药对不同极性萃取相抗氧化活性的研究发现,不同极性溶剂的萃取物的总酚、黄酮含量和抗氧化能力不同;药对中乙酸乙酯相的总酚酮含量和抗氧化能力最强,表明乙酸乙酯萃取物中总有效成分的含量较高;黄芪甘草配伍与单药的理论加和值比较呈现出更好的抗氧化活性;药对的协同作用与其总酚和黄酮物质的含量增加有关,尤其是总酚类物质的增量;经筛选得出配伍后抗氧化能力最强以及增效最好的萃取相为黄芪甘草药对的乙酸乙酯相(EA-AG)。
3、EA-AG对H_2O_2导致的MRC-5细胞氧化损伤具有一定的保护作用,能显著提高细胞的SOD和GSH-Px酶活性,降低H_2O_2引起的MDA的积累。这表明EA-AG还可能通过诱导细胞内抗氧化酶活性减轻H_2O_2的氧化胁迫伤害。初步研究发现,EA-AG在5 mg/L ~ 160 mg/L浓度范围内,对HepG_2细胞有抑制作用,且呈现明显的浓度依赖关系。这表明EA-AG具有一定的抑制癌细胞增殖的作用。
4、通过HPLC-DPPH法分析黄芪甘草配伍前后抗氧化成分的变化,从乙酸乙酯提取物中筛选出了9个潜在的抗氧化成分。经HPLC-DAD和HPLLC-MS/MS结构鉴定分析可知,其中大部分都是酚类、类黄酮物质。
总之,黄芪甘草配伍并结合适当溶剂萃取方法可以获得更高抗氧化能力的中药提取物,为今后开发功能因子明确的中药源功能食品及寻找优良的天然抗氧化剂或膳食补充剂提供了新的思路。
【关键词】：药对 抗氧化活性 协同效应 总酚 黄酮 细胞活性 【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R285
【目录】：
- 摘要8-10
- ABSTRACT10-12
- 1 引言12-22
- 1.1 氧化胁迫与衰老12
- 1.2 中药抗氧化的评价方法12-14
- 1.2.1 直接清除活性氧自由基12-13
- 1.2.2 增强抗氧化酶活性13
- 1.2.3 清除DPPH·（1,1-二苯基苦基肼自由基）法13
- 1.2.4 TEAC 法（Trolox Equivalent Antioxidant Capacity）13
- 1.2.5 FRAP 法测定物质还原能力13-14
- 1.2.6 抗脂质过氧化,维持细胞膜稳定性14
- 1.2.7 减少DNA 损伤14
- 1.3 黄芪、甘草、白芍中药的研究概况14-18
- 1.3.1 黄芪的研究概况14-16
- 1.3.2 甘草的研究概况16-17
- 1.3.3 白芍的研究概况17-18
- 1.3.4 黄芪甘草、白芍甘草药对的研究概况18
- 1.4 中药药对的理论研究、配伍原理及配伍过程的变化18-21
- 1.4.1 中药药对的理论研究18-19
- 1.4.2 中药配伍原理19
- 1.4.3 中药配伍过程中的物理化学变化19-21
- 1.5 本研究的目的意义及研究内容21-22
- 1.5.1 研究的目的意义21-22
- 1.5.2 主要研究内容22
- 2 材料与方法22-32
- 2.1 材料、仪器与试剂22-25
- 2.1.1 试验材料22-23
- 2.1.2 试验试剂23-24
- 2.1.3 试验仪器24-25
- 2.2 技术路线25
- 2.3 试验方法25-32
- 2.3.1 试验样品的制备25-26
- 2.3.2 试验细胞的基础培养26
- 2.3.3 提取物中总酚含量的测定26
- 2.3.4 提取物黄酮含量的测定26-27
- 2.3.5 样品抗氧化能力的测定27-28
- 2.3.6 样品对H_20_2 诱导的MRC-5 细胞氧化损伤的保护作用28-29
- 2.3.7 SOD、GSH-Px 活力和MDA 含量的测定29-31
- 2.3.8 MTT 法测定样品对HepG_2 细胞增殖的抑制作用31
- 2.3.9 HPLC-MS 法鉴定样品的主要抗氧化成分31-32
- 2.4 统计分析32
- 3 结果与分析32-47
- 3.1 黄芪、甘草和白芍不同有机溶剂提取物抗氧化活性的研究结果32-36
- 3.1.1 各提取物总酚、黄酮含量的测定结果32-34
- 3.1.2 各提取物清除DPPH 自由基能力的测定结果34
- 3.1.3 总酚和黄酮含量与样品抗氧化活性的相关性34-35
- 3.1.4 黄芪甘草药对及白芍甘草药对配伍后的抗氧化能力的分析35-36
- 3.2 黄芪甘草药对不同极性萃取相抗氧化活性的研究结果36-41
- 3.2.1 各萃取相总酚、黄酮含量的测定结果分析36-37
- 3.2.2 各萃取相还原能力的测定结果分析37-39
- 3.2.3 各萃取相清除DPPH 自由基能力的测定结果分析39-40
- 3.2.4 各萃取相清除ABTS 自由基的测定结果分析40
- 3.2.5 总酚和黄酮物质的增量与样品抗氧化活性之间的相关性40-41
- 3.3 对H_20_2 诱导的MRC-5 细胞氧化损伤的保护作用的结果41-43
- 3.3.1 EA-AG 对H_20_2 诱导的MRC-5 细胞活力的影响41-42
- 3.3.2 MRC-5 细胞SOD、GSH-Px 活力和MDA 含量的测定42-43
- 3.4 对HepG_2 细胞增殖的抑制作用的初步研究43-44
- 3.5 黄芪甘草乙酸乙酯相物质基础鉴定的结果44-47
- 3.5.1 EA-AG 的主要抗氧化物质的筛选44-45
- 3.5.2 EA-AG 的潜在抗氧化物质的质谱鉴定45-47
- 4 讨论47-50
- 4.1 黄芪、甘草和白芍不同有机溶剂提取物抗氧化活性研究的讨论47-48
- 4.2 黄芪甘草药对不同极性萃取相抗氧化活性研究的讨论48
- 4.3 对H20_2 诱导的MRC-5 细胞氧化损伤的保护作用的讨论48-49
- 4.4 对HepG_2 细胞增殖的抑制作用的初步讨论49-50
- 4.5 黄芪甘草乙酸乙酯相物质基础鉴定的讨论50
- 5 结论50-52
- 参考文献52-60
- 致谢60-61
- 攻读学位期间发表论文情况61
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