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《山东农业大学》 2010年
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辣根过氧化物酶与一氧化氮作用机理及其在一氧化氮测定中的应用

强丽  
【摘要】: 本文利用紫外吸收光谱法研究了一氧化氮(NO)与辣根过氧化物酶(HRP)的结合,并在此基础上通过二阶导数光谱法建立了一种检测NO的新方法。 在无氧的0.2mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲溶液中,用紫外分光光度计法研究了HRP与NO的结合。根据HRP与NO结合平衡方程,推导出一种评定结合常数的模型方程,并计算出结合常数为(1.55±0.06)×104L/mol,说明在无氧条件下,HRP与NO能形成稳定的复合物。在H2O2和NO存在下,根据HRP催化氧化愈创木酚的初始反应速率证明了NO对HRP的抑制类型,由Lineweaver-Burk法确定为明显的非竞争性抑制并建立了抑制机理。由动力学机理求得结合常数为(5.22±0.06)×104L/mol。两种方法求得的结合常数几乎相等,进一步说明了非抑制竞争机理是合理的。这种由乒乓机理催化双底物的非竞争抑制模型也同样适合NO对其它金属酶相互作用的研究。 根据HRP与NO之间的反应,用二阶导数光谱法建立了一种检测NO的新方法。探讨了HRP浓度和pH值对NO-HRP体系的影响,优化了实验条件。在最佳实验条件下,研究了共存物质如NO_2~-,NO_3~-,H_2O_2对NO浓度检测的影响。建立了标准曲线的回归方程:h=8.89×10~(-2)CNO–1.56×10~(-3),其NO检测的线性浓度范围为0.085-1.3μM,相关系数r=0.9966(n=5)。此方法的相对标准偏差均小于3%,检出限为0.032μM(S/N=3)。该方法成功地应用于检测血清样品中的NO的浓度。
【学位授予单位】:山东农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:Q503

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前8条
1 周宜开,朱勇飞,柏正武,孙雅亮;鲁米诺-H_2O_2体系化学发光检测一氧化氮的研究[J];分析科学学报;1999年06期
2 李倩,朱晓晴,何家骐,程津培;一氧化氮生物有机化学研究进展[J];高等学校化学学报;2001年12期
3 罗晓婷,高振,凌家宏;一氧化氮及其合酶在口腔疾病中作用[J];赣南医学院学报;2002年01期
4 赵保路,陈惟昌;NO·自由基的性质及其生理功能[J];生物化学与生物物理进展;1993年06期
5 张文利,沈文飚,叶茂炳,徐朗莱;小麦叶片顺乌头酸酶对NO和H_2O_2的敏感性[J];植物生理与分子生物学学报;2002年02期
6 周永斌,殷有,苏宝玲,陈志坚,刘立伟;外源一氧化氮供体对几种植物种子的萌发和幼苗生长的影响[J];植物生理学通讯;2005年03期
7 吴永魁,张立树,朱平;NO在生物医学中的研究进展[J];中国兽医学报;2001年05期
8 朱树华,周杰,束怀瑞,王玲玲;一氧化氮延缓草莓成熟衰老的生理效应[J];中国农业科学;2005年07期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王宪叶,沈文飚,徐朗莱;外源一氧化氮对渗透胁迫下小麦幼苗叶片膜脂过氧化的缓解作用[J];植物生理与分子生物学学报;2004年02期
2 梅玉屏,曾星,黄羽,黄建华;重组卡介苗及猪苓多糖对荷瘤小鼠巨噬细胞NO释放量的影响[J];细胞与分子免疫学杂志;2002年03期
3 姚敏,金玉祥,郭红,程琰;慢性应激对大鼠脑内FOS的表达与NO含量的影响[J];白求恩军医学院学报;2003年03期
4 王艳;张自立;;镧对小麦矿质元素N吸收及相关酶活性的影响[J];安徽农业科学;2006年15期
5 赵江沙,曾兆,熊渊,谢志雄,郭一清,邵雪玲;Cu~(2+)胁迫条件对涡虫体内过氧化氢酶活性的影响[J];氨基酸和生物资源;2003年03期
6 陈银萍;张满效;陈拓;张有福;安黎哲;;NO在两种圆柏属植物叶片抗冻过程中的信号功能研究[J];冰川冻土;2006年02期
7 熊克仁,郑培敏;大鼠尾壳核头部一氧化氮合酶阳性神经元区域性分布和脑缺血后变化[J];动物学报;1999年01期
8 刘存歧,王伟伟,张亚娟;水生生物超氧化物歧化酶的酶学研究进展[J];水产科学;2005年11期
9 彭曦,王晓军,冯晋斌,任建安,尤忠义,汪仁良;一氧化氮可减轻烧伤血清对人肝细胞的损伤[J];重庆医学;1998年05期
10 王罗霞;赵志光;王锁民;;一氧化氮对水分胁迫下小麦叶片活性氧代谢及膜脂过氧化的影响[J];草业学报;2006年04期
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1 王兴;曾宪斌;夏中梅;王兰英;;植物体中一氧化氮的研究现状与展望[A];2005年全国作物遗传育种学术研讨会暨中国作物学会分子育种分会成立大会论文集(一)[C];2005年
2 汪桂玲;徐航;陈志国;沈伟荣;;黄鳝性逆转过程中4种同工酶谱的比较[A];2005年上海市动物学会学术会议论文集[C];2005年
3 张和顺;常攀辉;王东;;荧光分光光度法检测下颌关节液中一氧化氮浓度[A];'2004天津市第十六届色谱学术交流会论文集[C];2004年
4 喻林华;薛立群;袁安文;许道军;向建洲;刘扬;;小鼠附植前胚胎发育过程中nNOS and iNOS mRNA的表达[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
5 张鸿伟;王凤山;;低分子肝素-超氧化物歧化酶结合物的二级结构分析[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
6 杜娟;狄和双;李莲;刘兆斌;王根林;;大豆黄酮对雄性大鼠血液、下丘脑、垂体—氧化氮含量影响的初探[A];中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集(上册)[C];2004年
7 邱建华;王树迎;尹逊河;;兔脑NOS阳性神经元的总体分布和形态、结构的研究[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2006年
8 戚维聪;沈文飚;管荣展;;用一氧化碳处理油菜种子可以促进萌发(英文)[A];第十二届国际油菜大会论文集[C];2007年
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1 谢冬萍;催产素对兔结肠平滑肌收缩活动的影响及其机制研究[D];山东大学;2004年
2 高琼璧;针刺治疗腰痛分子机制探讨[D];广州中医药大学;2000年
3 潘建伟;大麦根尖和边缘细胞铝毒生物学特性及其机理研究[D];浙江大学;2002年
4 郭萍;小麦抗条锈性的自由基分子机理[D];西北农林科技大学;2002年
5 武瑞;亚硒酸钠在雏鸭体内药动学及毒理学的研究[D];东北农业大学;2002年
6 董晓丽;胶质红假单胞菌对活性艳蓝KN-R的脱色研究[D];大连理工大学;2002年
7 王艳东;南方红豆杉细胞中紫杉烷生物合成途径及其诱导调控研究[D];天津大学;2003年
8 葛才林;水稻(Oryza sativa L.)和小麦(Triticum aestivum L.)的重金属毒害与耐性的分子机理研究[D];浙江大学;2002年
9 葛利江;小尾寒羊妊娠中后期胎盘和子宫颈成熟的监测[D];东北农业大学;2003年
10 吕家根;自发电池激发的电致化学发光的分析应用研究[D];西南师范大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 邵丽丽;硫营养对作物生理抗旱性指标的影响[D];西北农林科技大学;2004年
2 薛原;牛磺胆酸的抗炎作用及其作用机理的研究[D];内蒙古农业大学;2005年
3 冯娜;鲁米诺-铁氰化钾体系后化学发光现象的研究[D];陕西师范大学;2005年
4 向红兵;大鼠多发性脑梗塞对脑组织ICAM-1蛋白表达和NOS神经元的影响及相互关系的实验研究[D];东南大学;2004年
5 何剑平;四种方药对家兔实验性高脂血症、动脉粥样硬化及一氧化氮的影响[D];第一军医大学;2001年
6 陈虹;凋亡抑制基因CED-9转化烟草和水稻的研究[D];浙江大学;2002年
7 斯琴;牛磺酸鹅去氧胆酸的提取及其药理作用研究[D];内蒙古农业大学;2002年
8 李茂国;巯基化合物在银微盘电极上伏安行为的研究及其应用[D];安徽师范大学;2002年
9 王泳;腰骶段脊髓中央管周围灰质及背角浅层NOS阳性神经元与针刺镇痛机制分析[D];郑州大学;2002年
10 张文利;小麦叶片顺乌头酸酶对一氧化氮和过氧化氢的敏感性[D];南京农业大学;2002年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 崔忠敏,李兆申,湛先保,许国铭;内源性NO对应激性胃粘膜损伤保护作用的实验研究[J];第二军医大学学报;2000年02期
2 赵炳筠,朱晓晴,何家骐,夏炽中,程津培;1,4-二氢Hantzsch吡啶衍生物的合成及其~1HNMR和荧光光谱研究[J];高等学校化学学报;1999年11期
3 吕健明,朱晓晴,李倩,何家骐,鲜明,程津培;乙腈介质中S—NO键异裂能和均裂能的测定[J];高等学校化学学报;2000年04期
4 贾明君,张文祥,肖丰收,吴通好,孙铁;分散法制备的CuCl/ZSM-5分子筛催化剂上C_3H_6选择性催化还原NO反应的研究[J];高等学校化学学报;1998年04期
5 张文祥,贾明君,张春雷,张丽华,吴通好,孙铁,八寻秀典,岩本正和;铜离子交换分子筛上NO吸附的IR光谱及TPD研究[J];高等学校化学学报;1998年07期
6 孙文全;联苯胺比色法测定果树过氧化物酶活性的研究[J];果树学报;1988年03期
7 乔小蓉,冉良骥,吕太平;固定化超氧化物歧化酶的制备[J];华西药学杂志;2004年02期
8 代晶,吕太平;不同方法固定的细胞色素C对一氧化氮的响应性能[J];华西药学杂志;2005年02期
9 阮海华,沈文飚,叶茂炳,徐朗莱;一氧化氮对盐胁迫下小麦叶片氧化损伤的保护效应[J];科学通报;2001年23期
10 先宏,丛建波,吴可,王长振,孙存普;海藻硫酸多糖对巨噬细胞所致肿瘤细胞凋亡的调节作用[J];细胞与分子免疫学杂志;2002年03期
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1 朱津栋;赵洪刚;陈连山;何钟林;常棉;;具有两个常数的大分子多级平衡理论[J];大连轻工业学院学报;1981年02期
2 王清刚,罗国安,杨树标;亲和毛细管电泳激光诱导荧光法测定牛血清白蛋白与其单克隆抗体的结合常数[J];高等学校化学学报;1999年10期
3 夏炳乐,彭敦耕,李敏莉,肖洪,王开保;碘离子对烟草过氧化物酶Ⅰ(TOPⅠ)的荧光猝灭的研究[J];光谱学与光谱分析;2005年02期
4 袁春华,梁宋平;Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂结构与功能研究[J];生命科学研究;2003年02期
5 汤凯;胡兴;邹国林;;应用光学生物传感器测定DNA与组蛋白H1的结合常数[J];武汉大学学报(理学版);2005年06期
6 陈奎治;彭亦如;林伟;曹育红;徐国兴;翁家宝;;光谱分析法研究八羧酸酞菁铝配合物与牛血清白蛋白的结合作用[J];光谱学与光谱分析;2007年01期
7 金瑛芝;王园朝;;毛细管电泳法测定胺类手性药物结合常数[J];杭州师范大学学报(自然科学版);2008年04期
8 李增富;彭亦如;赖文忠;林武滔;周文富;;八羧酸酞菁钴配合物与牛血清白蛋白的结合作用研究[J];三明学院学报;2008年04期
9 黄焱;徐国兴;彭亦如;翁家宝;;四磺基酞菁钴合成及其与牛血清白蛋白结合作用的研究[J];光谱学与光谱分析;2008年02期
10 焦豫良;王梁华;董晓毅;宗英;高云;任娜;郭爱芸;张兴群;焦炳华;;新型酰基转移酶AT-EF080951的重组表达及底物结合分析[J];中国抗生素杂志;2008年03期
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1 高宇;李欣欣;郭良宏;;表面等离子体基元共振竞争检测法研究小分子与生物大分子的相互作用以及结合常数[A];第六届全国环境化学大会暨环境科学仪器与分析仪器展览会摘要集[C];2011年
2 彭开美;刘海洋;;镓Corrole的合成及其轴向配位作用研究[A];大环化学和超分子化学的新发展——当前学科交叉的一个重要桥梁——中国化学会全国第十五届大环化学暨第七届超分子化学学术讨论会论文摘要集[C];2010年
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4 鹿贞彬;朱亚先;王萍;彭景吓;蔡宗群;张勇;;重金属离子存在下腐植酸和芘之间相互作用研究[A];第三届全国环境化学学术大会论文集[C];2005年
5 陈凡;刘君炎;潘勤;马运峰;刘胜武;屈雪菊;章晓联;;SELEX技术筛选的小分子核苷酸适配子特异性抑制结核杆菌(H37Rv)在小鼠体内的感染[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
6 张子彬;燕新梁;董振明;张勇;;血卟啉与左旋多巴相互作用的研究[A];第八届全国发光分析暨动力学分析学术研讨会论文集[C];2005年
7 孙淑婷;金轶;留筱厦;刘艳;赵玉芬;;荧光法研究L-丝氨酰-L组氨酸二肽与绿色荧光蛋白的相互结合作用[A];第五届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2007年
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9 应津津;梅洁;肖玉秀;任勇;;新型混合取代环糊精毛细管电泳对药物的手性分离[A];2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集[C];2008年
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3 曹秀芳;γ-芳基取代手性三唑类杀菌剂的合成、表征及生物活性研究[D];华中师范大学;2009年
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5 张雅珩;研究小分子与蛋白质作用的光谱集成分析技术[D];兰州大学;2009年
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7 张秋兰;动物源性食品中残留的瘦肉精与血清白蛋白相互作用规律[D];南昌大学;2011年
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10 乔春玉;药物与生物大分子相互作用的研究[D];吉林大学;2009年
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1 强丽;辣根过氧化物酶与一氧化氮作用机理及其在一氧化氮测定中的应用[D];山东农业大学;2010年
2 蒋玲玲;药物—蛋白结合常数测定新方法研究[D];西北大学;2012年
3 韦露莎;β_2-肾上腺素受体色谱用于药物结合常数—结构参数间的关系研究[D];西北大学;2011年
4 刘志杰;白藜芦醇的分离分析及其在制剂学研究中的应用[D];天津大学;2004年
5 王月;有机物与生物分子相互作用的毛细管电泳法研究及应用[D];重庆大学;2005年
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7 项顺锋;组成超分子体系的物质间相互作用的毛细管电泳方法研究[D];重庆大学;2002年
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9 何梅;中药复杂多组分体系的毛细管电泳相互作用研究[D];重庆大学;2002年
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