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《山东农业大学》 2010年
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整合禽网状内皮组织增生病病毒基因的鸡痘病毒分子生物学鉴定及致病机理研究

孙洪磊  
【摘要】: 为验证FPV野毒株是否存在REV基因整合现象,探讨整合毒株感染鸡群的病变特征及REV的抗体变化规律。本试验对泰安及周边地区搜集的9例典型FP临床病例取其病变组织分离FPV,电镜观察FPV形态特征及感染细胞超微病变、PCR扩增REV-env和LTR序列、ELISA检测FP发病鸡群血清REV抗体变化规律及病理组织学检查病鸡的病理学变化。结果显示:9株FPV野毒株均有REV基因片段的整合,整合毒株使感染组织细胞核由原来紧密球状变成较松散的螺旋状;FP患病鸡REV抗体阳性率显著升高;发病鸡除FP的一般病变外,同时显示脾脏、胸腺、法氏囊等免疫器官的淋巴组织严重萎缩,网状内皮细胞增生;肝脏、十二指肠、肺脏等器官内的弥散性淋巴组织亦表现相应的病理变化。结果证实泰安及周边地区流行的FPV野毒株普遍存在REV基因的整合现象,整合有REV基因的FPV野毒株的致病特性已发生某些改变,具有REV的某些致病特征。 以分离保存的FPV野毒株接种CEF细胞,间接免疫荧光试验检测REV,结果未检测到游离REV病毒粒子;以该毒株人工感染7日龄SPF雏鸡,同时设阴性对照,常规免疫新城疫弱毒苗(ND)。接毒后每周采血动态检测NDV抗体、REV抗体,同时接种细胞分离REV病毒粒子;对试验鸡免疫器官指数、组织学变化进行动态观察,并对免疫器官的细胞凋亡动态检测。结果表明,整合REV基因的FPV感染后两周可引起鸡REV病毒血症,并产生REV抗体;导致中枢免疫器官发育分化不良,尤其对胸腺的影响最为明显,攻毒2周后,试验组与对照组相比,胸腺指数明显下降(P0.05),脾脏指数虽有所下降,但差异不显著(P0.05);免疫器官主要表现实质细胞数量少,正常结构发育不良,间质结缔组织增生而发生纤维化;细胞凋亡检测证实免疫器官的淋巴细胞和巨噬细胞均有明显的凋亡现象,细胞凋亡是引起免疫器官萎缩的主要原因。对新城疫疫苗免疫反应呈显著的抑制作用,攻毒3周后,试验组血清新城疫病毒抗体滴度显著低于对照组(P0.05),其抗体滴度峰值低,维持时间短,下降速度快。 通过接种细胞及动物试验,初步证实FPV整合REV前病毒基因组会明显改变FPV的致病特性,表现某些REV的致病特征,感染鸡REV抗体转为阳性并出现病毒血症,进一步证实REV可以通过基因组整合于FPV而进行传播的推测。
【学位授予单位】:山东农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S852.65

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【参考文献】
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