收藏本站
《山东农业大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

大蒜原生质体融合与培养技术研究

杨茹  
【摘要】: 试验于2008-2010年在山东农业大学科技创新园和农业部园艺作物重点开放实验室进行。研究探讨了大蒜鳞茎愈伤组织诱导的影响因素,利用获得的胚性愈伤组织建立了悬浮细胞系,在此基础上研究了原生质体分离、纯化的影响因素,并初步开展了原生质体培养和融合研究。主要研究结果如下: 1研究表明2,4-D在大蒜愈伤组织诱导及继代培养中起关键作用。MS+2,4-D2mg/L+6-BA1mg/L利于大蒜愈伤组织的产生,MS+NAA1mg/L +6-BA0.1mg/L是适宜于愈伤组织增殖和芽分化的最佳培养基。无激素的培养基利于生根;继代2次的愈伤组织的芽分化能力最强。高浓度的生长素有利于大蒜愈伤组织的诱导,但并不利于其分化。 2影响大蒜组织培养的因素:(1)外植体类型:分别以大蒜鳞芽基部、中部、顶部为外植体诱导愈伤组织。基部和中部诱导胚性愈伤组织的最佳培养基MS+2,4-D2 mg/L+6-BA0.5mg/L。MS+2,4-D1.5 mg/L为鳞芽顶部愈伤组织诱导的最佳培养基,诱导率为78.3%。(2)大蒜品种:苏联蒜,苍山蒜和金蒜3号三种基因型中以苍山蒜的出愈率最高,为78.12%,明显高于苏联蒜、金蒜3号。(3)培养基类型:三种类型培养基中以MS培养基的出愈率(82.35%)最高,与B5培养基(68.09%)和1/2MS(62.50%)差异显著。 3以胚性愈伤组织为材料,建立了胚性悬浮细胞系。胚性愈伤组织转入液体培养基时,不同基因型大蒜品种建立稳定的悬浮细胞系所需时间相差不大。细胞个数基本成S型变化。悬浮培养阶段细胞鲜、干重的测定结果表明,培养前期细胞生长速度快,并于第16d达到峰值。 4从悬浮细胞系、胚性愈伤组织、组培叶片分离得到原生质体。继代5d的大蒜悬浮细胞系是原生质体分离的最佳材料,其次是愈伤组织,而从组培苗叶片分离的原生质体产量和活力最低。以悬浮细胞系为分离材料的酶液组成为:2.0%Cellulase Onozuka R-10(纤维素酶)+0.2%Pectolgase Y-23(果胶酶)+0.55 mol/L甘露醇+5mM MES +10mM Cacl_2(pH5.8)。分离大蒜悬浮细胞系原生质体宜采用低速(90rpm)恒温(25±1)℃摇床振荡酶解,时间为5h。纯化时,1000r/min转速下离心5min,能收集到大量有活力的原生质体。适当提高离心力的短时间离心有利于原生质体纯化过程中产量和活力的保持。 5原生质体培养研究发现:采用液体浅层培养的培养效果最好,培养基成分为:1/2MS+1mg/L2.4-D+0.5mg/L6-BA+0.1%水解酪蛋白+1%葡萄糖+0.55mol/L甘露醇,适宜的培养密度为1×10~5个/mL,在此培养条件下的细胞分裂频率达7.4%,细胞团形成频率为0.57%。培养4~5d后,观察到了原生质体第一次分裂。 6由苍山蒜和苏联蒜胚性悬浮细胞制备的原生质体在PEG诱导下进行非对称融合,融合前对苍山蒜原生质体经强度为380uW/cm~2照射30s。目前观察到了苏联蒜和苍山蒜的初步融合情况。
【学位授予单位】:山东农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S633.4

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张吉英;吕键;刘超;王启光;杨霞;刘秀芝;;大蒜高产高效技术研究[J];科技致富向导;2011年20期
2 王晓清;张敬泽;褚福强;张艳丽;郭得平;;茭白黑粉菌脉冲电泳分析方法[J];长江蔬菜;2011年16期
3 刘志强;;大蒜双膜覆盖高产栽培技术[J];河北农业;2010年12期
4 杨晓奎;谷华;;谈大蒜病虫害的防治[J];农民致富之友;2010年06期
5 尤开勋;王兴国;张尚学;代启兵;刘国敏;袁建华;秦拥政;;高山大蒜-白肋烟套作栽培技术[J];中国园艺文摘;2010年12期
6 叶涛;王明兹;黄建忠;陈必链;;雨生红球藻原生质体制备与再生育种[J];福建师范大学学报(自然科学版);2011年04期
7 王亚妮;高丽美;李永锋;韩榕;;增强UV-B辐照对小麦幼苗叶肉细胞内Ca~(2+)水平的研究[J];生物学杂志;2011年03期
8 关红颖;;农杆菌介导玉米遗传转化的研究进展[J];现代化农业;2011年07期
9 胡浩;王茂华;刘绵学;杨毅;;甘蓝型油菜FAE1基因启动子的克隆和瞬时表达载体的构建及功能分析[J];四川师范大学学报(自然科学版);2011年05期
10 何建华;汤文仲;叶静;田琪琳;何培民;;绿色荧光蛋白(ZsGreen)基因在长石莼细胞中的表达[J];生物技术通报;2011年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 卫志明;许智宏;;外源DNA转化高粱原生质体[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
2 刘永翔;刘作易;;戴氏绿僵菌原生质体的形成及再生[A];生命科学与微生物专辑[C];2004年
3 王鹏;李伟伟;朱迎紫;方侃;何森;孟凡欣;程瑛琨;;均匀设计法优化纤维堆囊菌ATCC15384原生质体的制备条件[A];吉林省第六届生命科学大型学术报告会论文集[C];2008年
4 王广策;叶乃好;曾呈奎;;藓羽藻原生质体再生植株的形成与发育[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
5 郭文武;Grosser JW;邓秀新;;柑橘原生质体操作技术与育种新进展[A];湖北省遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2004年
6 林栖凤;李冠一;;第一章 植物遗传转化的主要方法(一)[A];植物分子育种——第四届全国植物分子育种学术研讨会论文集[C];2004年
7 程红;周嫦;;三种植物幼嫩花粉原生质体的分离与培养[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
8 王镨;许英;张信强;;香菇(Lentinus edodes)原生质体再生菌丝的形状发生[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
9 王文涵;王丽达;许浩然;郑田;孟凡欣;刘洋;;响应面法优化纤维堆囊菌So ce 90原生质体的制备条件[A];吉林省第六届生命科学大型学术报告会论文集[C];2008年
10 张鉴铭;郑玉萍;;鸡(土从)菌丝原生质体的分离和培养[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 黄克玲;大蒜很金贵 蒜种价更高[N];江苏农业科技报;2010年
2 王礼娇 本报记者 杨华春;大蒜出国门 靠的就是这“金护照”[N];成都日报;2010年
3 赵海波 袁秋萍 韩洪波;山东金乡:“绿色”向“有机”大蒜产业化发展[N];中国特产报;2011年
4 曾子祥 王建通 王连东;金乡大蒜走进“有机”时代[N];江苏经济报;2011年
5 本报记者 崔悦;有机大蒜之变与思[N];新农村商报;2011年
6 陈维明;金乡县科技局推进大蒜产业发展[N];济宁日报;2011年
7 通讯员 王建通 孔凡振;金乡大蒜走进“有机时代”[N];济宁日报;2011年
8 本报记者 肖力伟 通讯员 段瑞清 王建通;金乡县大蒜走进“有机时代”[N];农民日报;2011年
9 山东省农业科学院蔬菜所 徐培文;大蒜品种亟待改良[N];农民日报;2003年
10 定州市农牧局 王虎;大蒜多膜覆盖栽培技术[N];河北科技报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 叶乃好;藓羽藻原生质体团聚、再生及其相关的应用研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
2 郑露;大蒜白斑病病原学、防治技术及其毒素致病机理研究[D];华中农业大学;2010年
3 Muhammad Azam Khan;大棚辣椒/大蒜套作系统的生物效应和生态效应研究[D];西北农林科技大学;2011年
4 吕芳;羽藻再生过程中基因表达及其光合作用的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
5 刘红全;条斑紫菜的转基因研究[D];中国海洋大学;2004年
6 张学英;草莓(Fragaria ananassa Duch.)原生质体培养及植株再生研究[D];河北农业大学;2004年
7 洪伟雄;甘蔗梢腐病病原菌—串珠镰刀菌分子生物学研究初探[D];福建农林大学;2011年
8 潘增光;苹果原生质体培养再生及融合研究[D];华中农业大学;1998年
9 周艳丽;大蒜(Allium sativum L.)根系分泌物的化感作用研究及化感物质鉴定[D];西北农林科技大学;2007年
10 张林青;大蒜抗白腐病体细胞无性系变异筛选体系研究[D];西北农林科技大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 廖莉娟;ε-聚赖氨酸的菌种选育及合成过程强化[D];江南大学;2010年
2 王娟;苜蓿原生质体分离与培养的研究[D];甘肃农业大学;2010年
3 赵硕;耐高渗(高糖)酵母菌株的选育[D];安徽农业大学;2010年
4 白忠彬;原生质体介导的外源性GRF基因在家兔及小鼠肌肉中的表达[D];延边大学;2002年
5 彭帅;电融合法构建海藻糖高产菌株的研究[D];吉林农业大学;2004年
6 张新峰;嗜热真菌高产木聚糖酶及其酶法制备低聚木糖的研究[D];湖北工业大学;2011年
7 王春丽;β-葡萄糖苷酶高产菌株的选育及玉米芯的诱导作用研究[D];北京化工大学;2010年
8 孟国庆;头孢菌素C高产菌株选育及发酵特性研究[D];山东轻工业学院;2011年
9 谢华永;杨树胚性悬浮细胞系建立与原生质体融合研究[D];南京林业大学;2004年
10 张宇昊;康氏木霉的原生质体诱变及玉米秸秆发酵酒精工艺研究[D];河北农业大学;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026