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《山东农业大学》 2011年
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山羊胎盘肽的分离和初步鉴定及营养、免疫、抗氧化作用的研究

王炳祥  
【摘要】:自1985年刘月新首次采用“匀浆-透析法”提取人胎盘肽以来,广大科研工作者对胎盘肽进行了大量的理化分析与生物活性测定的研究,发现其在临床用于治疗病毒性肝炎、白细胞减少症、重症肌无力等免疫性疾病以及恶性肿瘤等,有较为理想的疗效。山羊胎盘的结构和功能与人的胎盘有许多相似之处,近几年来已有报道,从羊的胎盘中也可以提取出羊胎盘肽,并且具有与人胎盘肽类似的生物学活性,但是目前对于羊胎盘肽生物活性的研究还不全面,胎盘肽中活性组分的具体研究更是非常缺乏,而山羊胎盘来源有限,如用于临床,规模化生产胎盘肽需通过基因工程,活性组分的研究是基因工程的前提。本试验通过超滤制得胎盘肽,通过层析和电泳对其进行了初步分离和鉴定,对胎盘肽粗提物从营养学方面进行了分析,对胎盘肽粗提物和各分离出的组分从免疫和抗氧化方面进行了研究,旨在揭示羊胎盘肽在营养、免疫和抗氧化方面的作用,以及为活性组分的进一步研究提供参考。整个研究包括以下部分: 一、山羊胎盘肽的分离提纯和初步鉴定 取冷冻的山羊胎盘子叶,解冻后生理盐水冲洗,然后剪碎,经过反复冻融三次、高速组织匀浆机匀浆(12000r,3min,10次)、冷冻离心(4℃,8000r,20min)、取上清液微滤(0.22μm)、超滤(10KD)得到胎盘肽粗提物,粗提物为无色透明液体,为具有可透析可超滤性无热原的小分子多肽,PH6.6-6.9。粗提物经Superdex75层析得到四个组分,分别为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ,冷冻干燥均为白色粉末,四组分经加脲和甘油Tricine-SDS-PAGE电泳显示分子量分别为10.139KDa、8.166KDa、7.447KDa、6.761KDa。 二、胎盘肽提取液的氨基酸分析和矿物元素测定 山羊胎盘肽提取液中,共检出17种氨基酸,其中必需氨基酸7种,含量占总氨基酸的34.56%,对于儿童而言(儿童另需要精氨酸和组氨酸),含必需氨基酸9种,占总含量的42.59%,含有Fe、Zn、Cu等微量元素,重金属种类很少且含量非常低,不存在临床使用中重金属中毒的威胁。由此可见,山羊胎盘肽提取液具有极高的营养价值,是安全理想的氨基酸补充营养品。 三、山羊胎盘肽对小鼠免疫功能的影响 将小鼠随机分成6组,其中5组为试验组(分别腹腔注射组分:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、和粗提物);每个试验组又分为高中低三种剂量小组(分别为18mg/kg、9mg/kg、4.5mg/kg),每小组10只;对照组10只,仅注射生理盐水。每天注射一次,连续注射一周。 通过对各组分试验组小鼠外周血血清中IL-2含量同对照组相比可见,各组分均具有提高小鼠血液中IL-2含量的作用,其中组分Ⅲ、Ⅳ及粗提物试验组IL-2含量比对照组提高了15.3%~30.1%,差异达到显著(p0.05),组分Ⅳ的活性较强,但与组分Ⅲ和粗提物相比差异并不显著(p0.05)。通过对各组分试验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能同对照组相比可见,组分Ⅲ、Ⅳ及粗提物有促进小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的作用,同对照组相比,差异极显著(p0.01)。本实验结果提示组分Ⅲ、Ⅳ及粗提物可显著提高小白鼠的免疫功能,在胎盘小肽这类混合小肽中有免疫活性的主要成分是组分Ⅲ、Ⅳ。 四、山羊胎盘肽对小鼠抗氧化能力的影响 通过对各组分试验组小鼠SOD、MDA含量及SOD/MDA值同对照组相比显示,中高剂量的胎盘肽Ⅳ和粗提物能显著提高小鼠血清SOD含量(P0.05),显著降低MDA含量(P0.05),显著提高SOD/MDA值(P0.05),提高小鼠的抗氧化能力,高剂量组比中剂量组更明显,但没有出现差异极显著的情况(P0.01),说明山羊胎盘肽和粗提物提高小鼠的抗氧化能力具有剂量相关性且在一定的限度内。粗提物的活性最高,与组分Ⅳ相比差异不显著(p0.05)。组分Ⅳ的作用不及粗提物可能与分离过程胎盘肽活性的丧失有关,在胎盘肽粗提物中起增强小鼠抗氧化能力作用的是组分Ⅳ。
【学位授予单位】:山东农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S827

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【引证文献】
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