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山东地区Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定及多价油乳剂灭活疫苗的研制

郝东敏  
【摘要】:包涵体肝炎(Inclusion Body Hepatitis, IBH)是由Ⅰ群禽腺病毒(Fowl adenovirusⅠ,FAV-Ⅰ)引起的鸡的一种急性传染病。近年来,包涵体肝炎在我国的发病呈上升趋势,给肉鸡饲养业造成了严重的经济损失。因此,本研究了解了山东省鸡包涵体肝炎的流行情况,挑选了四株优势血清型毒株制备多价油乳剂灭活疫苗,其对鸡包涵体肝炎的防治和养鸡业的健康发展具有重要的应用价值。 本研究从山东部分地区采集疑似感染鸡包涵体肝炎的肉鸡肝脏,卵黄囊接种5日龄SPF鸡胚盲传三代,收集尿囊液。经PCR鉴定共分离到8株Ⅰ群禽腺病毒,分别命名为SDLY-1、SDLY-2、SDLY-3、 SDYT-1、SDYT-2、SDYN-1、SDYN-2、SDMY。血凝试验显示分离毒株均无血凝性,扩增分离毒株的Hexon基因序列,与GenBank中发表的其他血清型毒株Hexon基因序列比对,结果显示,8个分离株中有2株与血清2型同源性较高,3株与血清10型同源性较高,3株与血清12型同源性较高。动物回归试验结果显示,发病鸡的症状和剖检变化与自然发病鸡一致。 从本实验室近年来分离到的Ⅰ群禽腺病毒中,挑选出四株优势血清型毒株制成多价油乳剂灭活疫苗,并对疫苗的免疫效果进行评估,对预防包涵体肝炎的发生和流行提供科学依据。将四株不同血清型的Ⅰ群禽腺病毒(FAV-2、 FAV-8、 FAV-10、FAV-12)接种SPF鸡胚,收集尿囊液,经甲醛灭活,以矿物油为佐剂制成多价油乳剂灭活疫苗,并对疫苗物理性状,安全性,最小免疫剂量、免疫效力及抗体消长规律进行检测。结果显示,抗原液以甲醛为灭活剂的最适终浓度为1‰,研制的疫苗为油包水剂型,无菌检验合格,物理性状稳定。接种5日龄白羽肉鸡,注苗后均无不良反应,最小免疫剂量为0.3mL/只。肉鸡免疫2周后开始监测其血清抗体水平,结果显示,免疫后2周抗体效价已达5ng/L以上,25d左右抗体浓度达峰值,之后直至肉鸡出栏,抗体效价均高于10ng/L,对照组一直无抗体产生。免疫后IFN-γ和IL-6含量分别在第3d和第7d达到峰值,随后开始缓慢下降至正常水平。免疫保护性试验结果显示,攻毒后临床保护率为100%,能完全抵抗相应血清型病毒的攻击。各项结果表明,研制的油乳剂灭活疫苗具有良好的免疫保护效果。


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