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《山东农业大学》 2014年
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鸭群中禽白血病病毒的核酸检测

吕佳泓  
【摘要】:禽白血病是由禽白血病/肉瘤病毒群引起的以造血细胞增生为主的一类肿瘤性疾病。禽白血病病毒(Avian leukosis virus)属于反转录病毒科的a-反转录病毒属。根据其囊膜蛋白的不同,禽白血病在鸡的体内分为A、B、C、D、E、J六个亚群。其中,E亚群病毒为内源性禽白血病病毒,普遍存在于鸡群中,几乎没有致瘤性,对鸡群的影响较低。A、B、J亚群是鸡群中引发肿瘤的主要外源性ALV,C、D亚群的外源性ALV较为少见。其他的内源性ALV如F、G、H、I,存在于雉、鹌鹑、鹧鸪等鸟体内。 鸡是禽白血病病毒的自然宿主,而目前为止,还没有关于鸭群中禽白血病的报道。为了解鸭群中禽白血病的流行情况,本研究采集了四川绵阳、江苏徐州、山东烟台、潍坊、聊城和滨州六个不同地区鸭群的鸭子组织样品共510份,通过PCR方法用p27抗原检测鸭子体内禽白血病病毒核酸的携带情况。根据核酸序列测定分析,结果表明:11%(58/510)的鸭子体内携带禽白血病病毒的核酸。另外设计引物对58份阳性样品进行完整的env基因扩增,结果其中2份扩增出完整的env基因,长度为1857bp,另有5份扩增出缺失808bp的env基因,长度为1049bp。将扩增出的7份阳性样品的env基因与ALV各个型的env基因进行序列比对,结果显示其与内源性E亚群ALV的env基因高度同源。研究结果显示ALV的核酸在鸭群中普遍存在,并呈现出与鸡的白血病病毒核酸不一样的分子生态,但是否在鸭群中存在外源性白血病病毒仍然需要进一步研究。 近年来,我国不少地区尤其是地方品系鸡中分别分离到A亚群和B亚群禽白血病病毒,这说明我国鸡群中ALV存在的普遍性。继ALV-J的特异性单克隆抗体研制成功后,抗A、B亚群ALV囊膜糖蛋白的单克隆抗体也成功的制备出来,为外源性ALV的诊断提供了依据,但均不能区分A、B亚群ALV。 为区分经典型A、B亚群ALV,本研究通过比较A、B亚群ALV的gp85基因,对B亚群ALV的gp85基因进行了部分分段原核表达,免疫小鼠获得单因子血清,用获得的单因子血清与A、B、J型ALV做IFA,以达到分型目的。试验结果表明,本方法获得的单因子血清均不与J亚群的毒株发生反应,却均能与A、B亚群的毒株发生阳性反应,无法达到区分A、B亚群的目的。
【学位授予单位】:

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