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《山东农业大学》 2015年
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高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的筛选与诱变选育研究

王晓云  
【摘要】:枯草芽孢杆菌是一种益生菌,不仅存在于土壤、空气、水中,有些还存在于人与动物肠道内。枯草芽孢杆菌具有很强的抗性,在恶劣环境下可以通过内生孢子来保存生命,同时该细菌具有强大的产酶特性,主要分泌胞外蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶等酶类。在水产养殖的应用中,枯草芽孢杆菌能够分泌的各种酶类来降解鱼类养殖池塘中的残留饵料与动物自身分泌物,同时还可以提高水产动物机体消化酶活性,其被广泛用来制备净水、肥水的微生态制剂。但在实际应用中,枯草芽孢杆菌因温度等环境因素的影响,达不到应有的酶活性标准。因此,筛选高酶活性的枯草芽孢杆菌和提高已有枯草芽孢杆菌的产酶活性变得十分有意义。为了获得高产蛋白酶活性的枯草芽孢杆菌,本文研究了高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的筛选鉴定和通过紫外诱变提高枯草芽孢杆菌产蛋白酶活力。该研究的结果分为以下两个部分:1、高温环境下高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的筛选与鉴定。本文从温泉养殖池塘水样中获得了8株菌株,将其分别命名为BY1到BY8。通过对该菌株菌落形态、菌体革兰氏染色观察分析,同时使用MEGA5.1软件建立8株芽孢杆菌的进化树并进行同源性分析,结果显示在除BY6外所有菌株为枯草芽孢杆菌,菌株BY6为坚强芽孢杆菌。同时对通过BIOLOG系统对菌株进行生化鉴定,进一步确定了所得结果。利用透明圈法和福林酚法测定菌株的产蛋白酶活力并与分离的商业菌株作比较。结果分别为:在37℃培养条件下,菌株BY7具有较高产酶活力。BY7的透明圈的直径与菌落直径比值为5.4,明显高于其他菌。商业菌株BS2的产蛋白酶活力为16.61U/m L,菌株BY7的蛋白酶活力为43.28U/m L;BY7的产蛋白酶活力远远高于商业菌株BS2。将BY7应用于罗非鱼养殖,以致病菌无乳链球菌为对照,检测BY7的安全性。试验结果显示灌服枯草芽孢杆菌和生理盐水的死亡率均为0,而灌服无乳链球菌的罗非鱼死亡率根据浓度由低到高分别为10%、30%、30%、30%。因此可以确定枯草芽孢杆菌BY7是安全菌株。2、枯草芽孢杆菌BC2的紫外诱变选育对试验室保藏菌株BC2进行紫外诱变,诱变后以酪素培养基为定性培养基,测定60~100个单克隆的透明圈大小,并对前10%的菌株进行-80℃保存。每次诱变完后选择最大透明圈的菌株继续诱变。连续诱变6次后,利用福林酚法测定诱变后突变菌株的产蛋白酶活力,结果显示,培养96h时,出发菌株BC2的产蛋白酶活性为27.68U/m L,而突变菌株B38的活性经过诱变后达到了86.82U/mL,提高了3.14倍,差异极显著(P0.01)。为了检测紫外诱变对菌株其他产酶活性的影响,本文利用DNS法测定突变菌株B38和出发菌株BC2的产纤维素酶活性,结果显示,培养48h时,B38和BC2的产纤维素活性到达最高。BC2的纤维素酶活力为0.85U/m L,B38的纤维素酶活力为0.97U/m L,两者的产酶活性没有显著差异。测定突变菌株B38遗传稳定性试验结果显示:该菌株在传代10次后,菌株的产蛋白酶活力为77.01U/m L,纤维素酶活力为0.913U/m L,分别是诱变菌株产蛋白酶活力的88.70%和94.6%。这说明了该突变菌株具有较稳定的产蛋白酶遗传性。总而言之,本研究从温泉养殖池塘中筛选到了一株37℃培养温度下高产蛋白酶的枯草芽孢杆菌;同时利用紫外诱变处理的方法提高了已有枯草芽孢杆菌BC2在25℃条件下的产蛋白酶活力。该研究为水产微生态制剂的制备提供了两株可选择的枯草芽孢杆菌。
【学位授予单位】:山东农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:S948

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 陈晓明;张良;张建国;周莉薇;;枯草芽孢杆菌淀粉酶高产菌株的辐射诱变研究[J];辐射研究与辐射工艺学报;2008年03期
2 卞承荫;黄舒婷;潘大仁;林辉;林冬梅;罗海凌;林兴生;林占熺;;利用紫外线和EMS诱变选育高产枯草芽孢杆菌[J];福建农林大学学报(自然科学版);2014年03期
3 陆家昌;李活;黄翔鹄;;枯草芽孢杆菌对水质及凡纳滨对虾幼体免疫指标影响的研究[J];南方水产;2010年01期
4 李艳丽;许少春;许尧兴;;中性蛋白酶高产菌株的筛选及产酶酶系分析[J];生物技术;2007年01期
5 梅林;陈芳;阚睿;徐鹏;;枯草芽孢杆菌凝乳酶高产菌株的微波诱变[J];食品与发酵工业;2012年10期
6 回云静;吴长宝;徐小明;蔡金艳;朱峰;任跃英;;枯草芽孢杆菌生物菌剂对五味子白粉病防效及生长的影响[J];菌物研究;2011年02期
7 牛春华;高岩;李玉秋;王成业;王景会;;紫外诱变选育高产蛋白酶枯草芽孢杆菌[J];中国酿造;2011年12期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 王超;枯草芽孢杆菌EL32分泌的弹性蛋白酶的纯化及性质研究[D];集美大学;2012年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘桂君;孟佑婷;杨素玲;包放;尚宏忠;;枯草芽孢杆菌NCD-2γ射线辐射诱变研究[J];安徽农业科学;2011年36期
2 陈晓明;张建国;柳芳;严万里;赵晓彤;吴云龙;;中子和γ射线辐射灭菌后残留菌的生物安全性初步研究[J];安全与环境学报;2009年05期
3 黄璠;蔡俊;;枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶的发酵条件优化[J];饲料工业;2012年02期
4 艾军;王振兴;秦红艳;许培磊;刘迎雪;范书田;沈育杰;;我国五味子研究现状及展望[J];东北农业大学学报;2012年10期
5 张彬彬;杨春华;窦博鑫;刘琳琳;邹丽宏;石彦国;刘颖;;米曲霉40214高产中性蛋白酶发酵条件的优化[J];大豆科技;2014年01期
6 郑舜怡;郭世荣;张钰;宋夏夏;房晨;张杰;孙锦;;丛枝菌根真菌对辣椒光合特性及根际微生物多样性和酶活性的影响[J];西北植物学报;2014年04期
7 刘桂君;孟佑婷;杨素玲;包放;尚宏忠;;枯草芽孢杆菌NCD-2γ射线辐射诱变研究(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2011年11期
8 陈光;徐杨;孙旸;刘洁心;王香琪;;快中子辐射诱变对绿色木霉产纤维素酶的影响[J];吉林农业大学学报;2011年02期
9 冯东岳;钱冬;;2005~2009年凡纳滨对虾白斑综合征和桃拉综合征的流行情况分析[J];南方水产科学;2011年01期
10 王其传;孙锦;束胜;李晶;郭世荣;祁红英;陈月珍;;微生物菌剂对日光温室辣椒生长和光合特性的影响[J];南京农业大学学报;2012年06期
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 王景会;玉米粉生物修饰菌种的筛选与改良研究[D];吉林农业大学;2012年
2 王美娟;胡杨质膜Na~+/H~+逆向转运系统调控拟南芥盐诱导H_2O_2信号通路的研究[D];北京林业大学;2013年
3 王庆伟;细菌素Sublancin对金黄色葡萄球菌的抑制作用及其机制的研究[D];中国农业大学;2014年
4 黄海洪;凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)抗哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染的免疫应答特征研究[D];西北农林科技大学;2014年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 付宁;七彩神仙鱼人工繁殖及生态调控育苗技术研究[D];山东农业大学;2010年
2 黄光中;葡萄籽等植物提取物与人工水草在黄鳝养殖上的应用[D];湖南农业大学;2011年
3 朱欢;芽孢杆菌H6-3体外降解饲料蛋白及饲喂断奶仔猪效果的研究[D];四川农业大学;2011年
4 李桂英;对虾肠道益生菌对凡纳滨对虾非特异免疫力和抗病力影响的研究[D];中国海洋大学;2011年
5 陈丽芸;蛭弧菌BDM01对斑节对虾长成中微生物的影响[D];华南理工大学;2012年
6 籍景淑;猪场氨气控制研究[D];华中农业大学;2012年
7 粟雄高;柠檬酸和微生态制剂对凡纳滨对虾生长、消化酶活性和免疫性能的影响[D];上海海洋大学;2012年
8 胡敏;芽孢杆菌A7株体外降解饲料蛋白及饲喂建鲤效果的研究[D];四川农业大学;2012年
9 刘晔;一株海参共附菌的活性及应用初步研究[D];大连海洋大学;2014年
10 贾治超;微生态制剂对刺参(Apostichopus japonicus)幼参生长、养殖水质及氮、磷收支的影响[D];天津农学院;2014年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈晓博;罗雪粤;张淑荣;张鹏;;生产L-精氨酸的脯氨酸营养缺陷型菌株的选育[J];北京化工大学学报(自然科学版);2011年06期
2 曾剑超;;国内凝乳酶及其代替品的研发进展[J];中国牛业科学;2008年02期
3 张虹,孔汉文,罗树光;用弹性蛋白改变皮肤老化的研究和应用[J];日用化学工业;1996年06期
4 杨丽杰,霍贵成;蛋白酶失活大豆中的抗营养因子[J];动物营养学报;2000年01期
5 施安辉;单宝龙;贾朋辉;杨军方;徐海燕;吕明霞;张志焱;程秀芳;;一株适于生产饲用复合酶制剂菌株的生物学特性及酶系分析[J];饲料工业;2005年24期
6 汪世华,杨燕凌,胡开辉,彭利民,周林峰;纤维素酶高产菌株的诱变育种[J];福建农业大学学报;2005年03期
7 赵晓燕;王贻莲;魏艳丽;张广志;李纪顺;杨合同;;BtR05的诱变育种及其对朱砂叶螨的毒力测定[J];福建农林大学学报(自然科学版);2009年05期
8 周光明,李文建,王菊芳,李强,温小琼,党秉荣,颉红梅,李兴林,卫增泉,高清祥;重离子辐照诱导DNA双链断裂的剂量率效应[J];辐射研究与辐射工艺学报;2001年04期
9 张一青,陆兆新,邹晓葵;N~+离子注入对Aspergillus sp.产原果胶酶的诱变效应[J];辐射研究与辐射工艺学报;2005年03期
10 陈晓明;谭碧生;张建国;郑春;罗娟;孙颖;楚士晋;任正隆;;快中子辐照对枯草芽孢杆菌的灭菌效果研究[J];辐射研究与辐射工艺学报;2007年03期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 何红;辣椒内生枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)防病促生作用的研究[D];福建农林大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 闫亚婷;固态发酵玉米条件的优化及营养物质变化的比较研究[D];四川农业大学;2010年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 彭霞;;枯草芽孢杆菌在养猪生产上的应用[J];广东饲料;2010年02期
2 王晓阁;;枯草芽孢杆菌研究进展与展望[J];中山大学研究生学刊(自然科学.医学版);2012年03期
3 刘晔;王斌;王龙祥;王维才;张付云;;枯草芽孢杆菌的生物活性及其应用进展[J];安徽农业科学;2013年14期
4 仇丽;枯草芽孢杆菌在养殖中的应用[J];渔业现代化;2002年04期
5 姚震声,陈中义,陈志谊,郑小波,张杰,黄大昉;绿色荧光蛋白基因标记野生型生防枯草芽孢杆菌的研究[J];生物工程学报;2003年05期
6 陈蕾,申丽,陈官营,常维山;枯草芽孢杆菌的培养[J];山东畜牧兽医;2003年06期
7 崔京春,吴俊罡,刘吉华,王梅雪;枯草芽孢杆菌发酵过程的优化[J];饲料工业;2004年07期
8 王振华;潘康成;;不同浓度中药对枯草芽孢杆菌体外生长的影响[J];中国兽医杂志;2007年10期
9 尹敬芳;周向阳;李健强;李永红;侯红利;张文华;;绿色荧光蛋白标记检测枯草芽孢杆菌在水体中的存活动态[J];分析化学;2007年10期
10 秦艳;李卫芬;黄琴;;枯草芽孢杆菌发酵条件的优化[J];饲料研究;2007年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 亓雪晨;齐俊生;王琦;梅汝鸿;;枯草芽孢杆菌启动子片段的克隆及其在绿色荧光蛋白标记中的应用[A];中国植物病理学会2006年学术年会论文集[C];2006年
2 徐琳琳;高洁;;生防菌枯草芽孢杆菌的分离鉴定和抑菌谱测定[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
3 张丽霞;李荣禧;王琦;梅汝鸿;;枯草芽孢杆菌发酵培养基的优化[A];中国植物病理学会2005年学术年会暨植物病理学报创刊50周年纪念会论文摘要集[C];2005年
4 贾宇;张树斌;王立安;;一株具广谱抗植物病原真菌效果的枯草芽孢杆菌及其应用[A];2009’环保农药新技术、新产品暨生物农药技术研讨会论文集[C];2009年
5 刘晓华;王肆玖;钱云国;金尔光;程蕾;夏瑜;杜小华;陈江荣;肖金庭;;一起饲喂枯草芽孢杆菌产品引起鲜奶不能发酵的原因分析[A];中国奶业协会第24次繁殖学术年会暨国家奶牛/肉牛产业技术体系第一届全国牛病防治学术研讨会论文集[C];2009年
6 刘桂君;孟佑婷;杨素玲;尚宏忠;;生防菌枯草芽孢杆菌的辐射诱变研究[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
7 张丽霞;李荣禧;王琦;梅汝鸿;;枯草芽孢杆菌发酵培养基的优化[A];中国植物病理学会2005年学术年会暨植物病理学报创刊50周年纪念会论文集[C];2005年
8 张丽霞;李荣禧;齐俊生;王琦;梅汝鸿;;枯草芽孢杆菌发酵培养基的优化[A];中国植物病理学会2005年学术年会暨植物病理学报创刊50周年纪念会论文集[C];2005年
9 刘辉;魏祥法;井庆川;刘雪兰;刘瑞亭;石天虹;;一株枯草芽孢杆菌发酵培养基的优化[A];第三届第八次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集[C];2006年
10 任建军;高美娟;胡旭松;刘柳;师光禄;王有年;;枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis RN-61)发酵培养基及发酵条件的优化[A];中国园艺学会2013年学术年会论文摘要集[C];2013年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 中国水产科学研究院;一种枯草芽孢杆菌制剂的发酵生产方法将有效降低成本[N];中国渔业报;2014年
2 ;浅谈枯草芽孢杆菌在水产养殖上的应用[N];中国海洋报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 姬生跃;新型抗菌糖肽-sublancin的增量表达及其生物学活性研究[D];西北农林科技大学;2015年
2 李晶;黄瓜枯萎病高效拮抗枯草芽孢杆菌的筛选及生防机制研究[D];哈尔滨工业大学;2009年
3 韩斌斌;枯草芽孢杆菌基因组尺度代谢网络重构[D];天津大学;2013年
4 李晶;黄瓜枯萎病高效拮抗枯草芽孢杆菌的筛选及生防机制研究[D];哈尔滨工业大学;2010年
5 任建军;枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis RN-61)抗菌蛋白的纯化及鉴定[D];北京林业大学;2013年
6 陈晓月;禽流感重组枯草芽孢杆菌的构建及实验免疫研究[D];吉林大学;2008年
7 刘永锋;枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Bs-916胞外抗菌蛋白质的纯化及其鉴定[D];南京农业大学;2006年
8 张清霞;甘露寡糖诱导抗病反应初步研究及枯草芽孢杆菌甘露聚糖酶基因的克隆与表达[D];中国农业大学;2005年
9 朱英波;产核黄素枯草芽孢杆菌中心碳代谢的代谢工程[D];天津大学;2007年
10 王光强;枯草芽孢杆菌中Sec分泌途径底物特性及非经典分泌途径的研究[D];江南大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李小连;醋糟发酵生产饲用微生物产品的研究[D];河北大学;2015年
2 郑喆;白银市稀土矿分离到一株可以高效还原六价铬的枯草芽孢杆菌[D];兰州大学;2015年
3 焦延静;枯草芽孢杆菌对杜梨和葡萄根i病的拮抗作用及机理研究[D];河北农业大学;2015年
4 邵丽玮;枯草芽孢杆菌—刺五加多糖合生元在蛋雏鸡日粮中的应用[D];河北农业大学;2015年
5 何沅滨;泥鳅养殖水体中芽孢杆菌的筛选、生长特性及其应用效果研究[D];苏州大学;2015年
6 朱德丽;枯草芽孢杆菌产酱香相关功能基因的筛选及初步研究[D];贵州大学;2015年
7 王玉丽;腐熟用枯草芽孢杆菌菌剂的研制[D];河北科技大学;2015年
8 解相霞;一株蛋鸡肠道枯草芽孢杆菌的分离鉴定与益生菌对鸡的应用效果[D];山东农业大学;2015年
9 徐鹏;乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌对意大利蜜蜂生长发育和免疫指标的影响[D];山东农业大学;2015年
10 王晓云;高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的筛选与诱变选育研究[D];山东农业大学;2015年
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