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《山东农业大学》 2017年
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自噬在调节小鼠卵母细胞老化中的作用

林飞虎  
【摘要】:哺乳动物卵母细胞在排卵后会阻滞在第二次减数分裂中期,如果没有在最佳的时间窗口内完成受精过程,卵母细胞将发生老化过程。卵母细胞的老化不仅能够引起异常受精、异常卵裂、受精后胚胎非整倍体率增加,而且能导致妊娠率降低、流产率和出生缺陷的增加。同时,由老化卵母细胞产生的个体表现出精神异常、好动性增加、繁殖力低下以及寿命缩短等现象。因此,延缓或阻止卵母细胞的老化已成为哺乳动物繁殖和胚胎工程研究与应用需要解决的问题。在延缓或阻止细胞老化的研究中,自噬已经成为当前研究的热点之一。自噬是细胞通过单层或双层膜包裹待降解物形成自噬体,然后运送到溶酶体形成自噬溶酶体并进行多种酶的消化及降解,以实现细胞本身的代谢需要和某些细胞器的更新。自噬可以消除、降解和消化受损、变性、衰老和失去功能的细胞、细胞器和变性蛋白质与核酸等生物大分子。自噬途径被认为是保护性途径。因此,本实验主要探究自噬是否可以延缓或阻止卵母细胞老化。为探究自噬和卵母细胞老化是否存在一定的关系。通过向培养液中添加自噬激活剂RAPA和自噬抑制剂3-MA,以卵母细胞激活率、卵母细胞Caspase-3的表达情况、卵母细胞发育能力、卵母细胞细胞质钙离子水平、卵母细胞氧化应激水平、卵母细胞线粒体膜电位、卵母细胞纺锤体形态为指标,来观察自噬对卵母细胞老化的影响。实验结果表明:(1)自噬和小鼠卵母细胞老化密切相关。(2)RAPA显著升高卵母细胞中自噬体数量,3-MA显著降低卵母细胞中自噬体数量。(3)RAPA能显著降低小鼠老化卵母细胞激活率;3-MA能显著升高小鼠老化卵母细胞激活率。(4)RAPA能显著降低小鼠老化卵母细胞Caspase-3的表达水平;3-MA能显著升高小鼠老化卵母细胞Caspase-3的表达水平。(5)RAPA能显著提高小鼠老化卵母细胞发育能力;3-MA能显著降低小鼠老化卵母细胞发育能力。(6)RAPA能显著降低小鼠老化卵母细胞胞质钙离子浓度;3-MA能显著升高小鼠老化卵母细胞胞质钙离子浓度。(7)RAPA能显著降低小鼠老化卵母细胞氧化应激程度;3-MA能显著升高小鼠老化卵母细胞氧化应激程度。(8)RAPA能显著升高小鼠老化卵母细胞线粒体膜电位;3-MA能显著降低小鼠老化卵母细胞线粒体膜电位。(9)RAPA能显著增加具有正常形态的纺锤体的卵母细胞的比例;3-MA能显著降低具有正常形态的纺锤体的卵母细胞的比例。结论:自噬能抑制卵母细胞老化。
【学位授予单位】:山东农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S814.1

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