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《山东农业大学》 2018年
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泰安地区肉鸡大肠杆菌的分离鉴定及耐药性研究

张玉  
【摘要】:鸡大肠杆菌病(Escherichia coli)是临床上最常见的鸡细菌性疾病之一,其发生的广泛性和造成经济损失的严重性不可小觑。目前,E.coli病在一些鸡场中频繁发生,兽医临床上不得不大量使用抗生素进行治疗,导致E.coli的耐药谱不断扩大,形成恶性循环;同时药物在畜禽体内的残留给养鸡业的持续发展和人类健康带来潜在危害。长期以来,黏菌素被许多国家作为饲料添加剂广泛应用于畜禽的促生长和疾病的预防,而黏菌素是针对革兰氏阴性病原菌引起的致死性感染的最后一道防线。近年来,由于质粒携带的可移动性黏菌素抗性基因(尤其是mcr-1)的出现,黏菌素的使用已经被严重挑战,细菌的耐药问题日趋严峻。因此,着眼当前养殖行业的现实发展状况,积极开展E.coli耐药性检测,尤其黏菌素的耐药性状况,将有利于监测E.coli耐药性的发生发展,从而为我们兽医临床用药提供更好的科学依据。本试验采集了泰安地区发病肉鸡的肝脏组织,经细菌的分离纯化,运用PCR和细菌鉴定仪等方法鉴定出130株E.coli。利用微量肉汤稀释法测定其对多黏菌素的敏感程度,通过PCR方法进行了黏菌素耐药基因的的分子检测;采用纸片扩散法进行了E.coli耐药表型的分析;并分析了E.coli的耐药性与多种耐药基因的关系。试验结果如下:1.本试验采用多黏菌素敏感性测试试验对待测菌株进行初步筛选,然后以E.coli菌液作为常规PCR模板,对四种黏菌素耐药基因(mcr-1、mcr-2、mcr-3、mcr-4)进行特异性的扩增来分析黏菌素耐药基因的存在情况。PCR结果显示,在临床分离的130份E.coli中检测到75株(58%)携带黏菌素耐药基因mcr-1,未检测到mcr-2、mcr-3和mcr-4三种黏菌素耐药基因;表明泰安地区黏菌素耐药基因mcr-1已在鸡源E.coli中广泛传播。2.采用CLSI推荐的K-B纸片扩散法对临床分离的130株E.coli菌株进行了六类12种抗菌药物的药敏试验。结果表明130株菌株对12种抗菌药物表现出不同程度的耐药,耐药率分别为萘啶酸(NA)100%、四环素(TE)95%、氨苄西林(AMP)91%、头孢噻肟(CTX)89%、链霉素(S)88%、头孢曲松(CRO)87%、强力霉素(DO)86%、氯霉素(C)85%、左氧氟沙星(LEV)77%、磺胺甲恶唑/甲氧苄啶(SXT)69%、庆大霉素(CN)57%、阿米卡星(AK)23%。统计结果显示,130株分离菌有7株至少耐三种抗生素,2株耐四种抗生素,其它均耐五种及以上;100%呈多重耐药,耐药现象严重。3.通过PCR扩增的方法对β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类和磺胺类的部分耐药基因进行检测,进一步分析了其它耐药基因在鸡源E.coli中的传播及扩散情况。结果显示:β-内酰胺类药物耐药基因CTX-M、SHV及TEM的检出率分别为53.8%、3.1%、90.0%;氨基糖苷类药物耐药基因aphA3、aacC2、aadA及aacC4的检出率分别为55.4%、20.8%、0%、0%;四环素类药物耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD的检出率分别为82.3%、13.8%、98.4、0%;磺胺类药物耐药基因sull、sul2及sul3的检出率分别为63.8%、41.5%、0%;共检测到了10种耐药基因,未检测到aadA、aacC4、tetD和sul3四种耐药基因。4.统计结果显示,携带有mcr-1的菌株同时携带β-内酰胺类药物耐药基因的比率是94.7%(71/75)、携带有mcr-1的菌株同时携带氨基糖苷类药物耐药基因的比率是78.7%(59/75)、携带有mcr-1的菌株同时携带四环素类药物耐药基因的比率是100%(75/75)、携带有mcr-1的菌株同时携带磺胺类药物耐药基因的比率是76.0%(57/75);表明携带有黏菌素耐药基因mcr-1的E.coli往往也携带其它耐药基因。本研究对泰安地区E.coli的耐药表型做了研究,对分离菌株进行的药敏试验为临床预防和治疗提供了依据,为泰安地区鸡源E.coli病的防治积累了经验,具有重要的指导意义。另外,对黏菌素和其它多种耐药基因的监测表明多重耐药E.coli,尤其ESBL菌普遍携带黏菌素耐药基因mcr-1,应引起我们的高度重视。
【学位授予单位】:山东农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S852.61

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