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《山东农业大学》 2002年
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特种经济动物抗CDV、CAV、CPV免疫球蛋白的制备与应用

王玉燕  
【摘要】: 特种经济动物因为其本身的经济价值很高,一旦发生传染病损失惨重,因此有必要对患传染病的动物进行治疗和紧急预防,将损失降到最小。本课题研究探讨如何能获得大量高效价的抗犬瘟热病毒(CDV)、细小病毒(CPV)和腺病毒(CAV)的高免血清和免疫球蛋白,以控制相应传染病的发生,为发病的动物急救治疗提供特效、安全的生物制剂。本研究共分三部分: 试验一:蓝狐抗CDV、CAV、CPV免疫球蛋白的制备。本试验在两个狐场进行。共设计了针对三种主要疫病的9种免疫程序。各种免疫程序均在最后一次免疫的14天采血、分离血清。分别用微量中和试验测定血清中CDV的中和抗体效价,用血凝抑制试验测定血清中抗CAV、CPV的HI抗体效价。通过对各组的抗体效价进行比较和统计学分析的结果表明,在两场的基础免疫抗体水平无显著差异的基础上,用CDV弱毒疫苗一次加强免疫与连续两次以上大剂量强化免疫的结果之间无显著差异;CAV一次强化免疫的抗体的水平与3次连续强化免疫的无显著差异;CPV组两次强化免疫的结果要优于联苗2次免疫的结果。联苗免疫组狐狸三种抗体的整体水平较高,但是不如单苗免疫的高。因此制备抗血清的最佳免疫程序是,CDV、CAV在屠宰前两周进行一次强化免疫,CPV进行两次强化免疫。 对分离到的血清用饱和硫酸铵盐析法提取IgG,并用DEAE纤维素离子交换层析法对提取的IgG进行纯化。用SDS-PAGE进行IgG的纯度检验,电泳结果出现两条蛋白带,是IgG的重链和轻链,说明纯化的程度较高。将纯化的IgG与提纯的CDV、CAV病毒反应后分别与胶体金标记的SPA结合,在电镜下可清楚地观察到病毒与胶体金颗粒的结合,说明提取的IgG的效价、活性较高。 提取的高免血清经在临床上应用,结果表明CDV高免血清对发病初期的病犬有效,CPV高免血清对发病犬的治愈率可达87.5%。 试验二:蓝狐抗CDV、CAV卵黄抗体的制备。分别用CDV、CAV的疫苗免疫产蛋鸡,每周检测鸡血清和卵黄中的抗体水平,收集抗体水平高的鸡蛋用于提取纯化卵黄抗体IgY。本试验中对不同稀释倍数下卵黄抗体的提取产量进行了比较研究。验证了卵黄液用pH5.0的10倍去离子水稀释后的去脂率和IgY提取产量要高于其他稀释方法。然后在此基础上比较了7种不同提取卵黄抗体的方法。SDS-PAGE和低压层析的结果证明,用6%辛酸—硫酸铵法提取IgY的纯度最好,其次是海藻酸钠—硫酸铵法。获得IgY产量以海藻酸钠—硫酸铵法最高,可达5.69mg/ml,其次是用3%辛酸—硫酸铵和聚乙二醇法。在各中方法中除6%辛酸法外,其他各种方法提取的IgY中都含有其他分子量的蛋白质,体现了IgY的不均一性。通过综合比较,认为酸性条件下10倍去离子水稀释卵黄液,离心后上清用0.07%的海藻酸钠去脂,再用硫酸铵盐析提取纯化IgY的工艺流程适用于工业化的规模生产。 安全试验表明卵黄抗体对小白鼠和家兔安全、无毒副作用。 试验三:间接ELISA检测的抗体活性。用过氧化物酶标记的兔抗狐IgG和鸡IgY抗体进行间接ELISA测定获得的样品的活性。结果表明狐抗CDV、CAV高免血清和鸡抗CDV、CAV卵黄的活性都较高,但提纯的抗CAV的狐IgG和鸡IgY的活性较高,而提纯的抗CDV的狐IgG和鸡IgY的效价较低。
【学位授予单位】:山东农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S852.43

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