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《山东农业大学》 2002年
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枯草芽孢杆菌A_(3-2)菌株的分离鉴定及其抗菌蛋白的分离纯化与性质研究

赵涛  
【摘要】: 从泰山林地土壤中分离获得一株枯草芽孢杆菌A_(3-2)菌株,该菌株对黄瓜枯萎病,板栗干腐病,苹果轮纹病,棉花立枯病,棉花枯萎病等多种病原菌具有强烈抑制作用。对发酵条件的研究表明:A_(3-2)菌株在以复合培养基为发酵原料时,30℃,200rpm震荡培养72h可获得最高活性发酵产物。对发酵液进行饱和硫酸铵盐析后,发酵原液活性丧失,同时在盐析沉淀物中检测到高抗菌活性,将发酵液经6000rpm高速离心20分钟,去除残渣及菌体,获得发酵原液上清,离心上清液加入硫酸铵至70%饱和度,冰箱中静置2h,4000rpm离心,收集沉淀,将沉淀溶于pH6.8的磷酸缓冲液(PBS)中,获得粗提蛋白。粗提蛋白经过Sephadex G-75分子筛层析,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-50分子筛层析脱盐和聚乙二醇包埋浓缩,用SDS-PAGE测定提取物纯度表明获得蛋白质纯品。用SDS-PAGE进行分子量测定,确定该蛋白质为分子量3490D小分子量多肽;该多肽耐高温,120℃加热15分钟活性基本不变;对胰蛋白酶、蛋白酶K不敏感;对氯仿不敏感;对不同酸碱度具有相当的稳定性,在强碱性条件下活性降低。通过显微镜观察该多肽对病原菌的作用发现:用多肽处理的菌丝体6h后顶端开始膨大;12h后停止生长,顶端膨大成球形;24h后进一步膨大变形,整体开始呈现串珠状,无分生孢子结构产生;处理36h后的菌丝体细胞呈串珠状排列或解离为单个球状,有大量细胞溶胀破裂,内含物溶出,细胞解体、死亡。
【学位授予单位】:山东农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S476.1

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