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《山东农业大学》 2003年
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J亚群禽白血病病毒感染对肉鸡生长和免疫功能的影响及其env基因的克隆

王建新  
【摘要】: J亚群禽白血病病毒(Subgroup J of Avian leukosis virus,ALV-J)是90年代初由英国鉴定出来的禽白血病病毒(ALV)新的亚群,主要引起肉鸡的骨髓瘤白血病。近年来该病毒在世界范围内迅速传播。我国于1999年首先在肉用型鸡群中分离鉴定出了ALV-J的中国株(杜岩,崔治中等,1999),并通过接种1日龄雏鸡发现了一株急性转化型毒株。此后,又在中国分离出了更多的毒株(张志,崔治中等,2002)。 2002年,我们从山东省某肉种鸡场疑似ALV-J的28周龄和38周龄的两个鸡群中分别分离出了另外2株ALV-J,分别命名为YT0201,YT0202。对病鸡剖检可见肝脏过度增大,表面有结节状白色小的肿瘤,分布取其肝脏和脾脏混和后研磨、得到两份病料样品,离心后上清液无菌过滤后接种已长成单层的鸡胚成纤维细胞(CEF),并维持7~10天后,以对ALV-J的特异性单抗JE9进行间接免疫荧光反应(IFA),结果发现,两份样品在荧光显微镜均可观察到细胞被染成浆亮绿色,而细胞核没有被染色,呈现明显的阳性反应,与阳性对照ALV-J SD9902株反应一致,而阴性对照则无此现象。同时,以相当于ALV-J原型株HPRS-103基因组碱基#5394-5416和#7811-7794的一对引物,对2株病毒感染的CEF基因组DNA的PCR检测中,均扩增出了2.2Kb左右特异的清晰条带,与预期大小相符。这些表明该鸡群的确存在ALV-J的感染。 网状内皮组织增殖病(reticuloendotheliosis,RE)是指由网状内皮组织增殖病病毒(ReticuloEndotheliosis virus, REV)引起的一群病理综合征。根据病原分离和血清学的结果,表明REV是呈世界性分布的。REV不仅能引起感染禽只生长迟缓、废弃淘汰率升高和死亡,还能引起感染鸡的免疫抑制。 我们将分离自宁夏一具有典型ALV-J症状鸡群的NX0101毒株,接种1日龄商品代肉仔鸡,通过动态观测雏鸡常规免疫后血清中新城疫抗体和传染性法氏囊抗体的变化以及免疫器官指数来反应肉鸡的体液免疫功能的变化;并通过临床观察和定期称重来探讨ALV-J感染对肉鸡的生长性能 WP=10 的影响。此外还通过剖检和免疫器官的病理组织学变化进一步验证ALV-J对肉鸡的致病性。本研究共进行了三个动物试验,试验1,将ALV-J NX0101株(张志等,2001)分别以颈部皮下和尿囊腔接种2组商品代肉雏鸡,最后一组肉鸡接种相应量的灭菌生理盐水作为对照。试验期为90天。试验2,将2组1日龄商品代AA肉鸡,分别经颈部皮注射接种ALV-J的NX0101株以及共感染ALV-J的NX0101和REV的SD9901株。以未感染的肉鸡作为阴性对照;试验3,采用275只1日龄健康商品代AA肉鸡,随机分为5组,分别为ALV-J 感染组、ALV-J与REVSD9901株共感染组、REV SD9901株感染组和REV HA株感染组、最后一组为未感染的对照组。按照常规方法免疫新城疫病毒疫苗和传染性法氏囊炎病毒疫苗。 试验1研究结果表明,①1日龄肉鸡感染ALV-J后,表现出明显的生长抑制;50日龄,ALV-J感染组体重分别相当于对照组的50.7%和57.4%;90日龄感染组体重分别相当于对照组的74.0%和76.4%②剖检可见法氏囊和胸腺明显萎缩,法氏囊指数和胸腺指数明显下降(P0.05);50日龄萎缩的最严重,感染组法氏囊指数分别相当于对照组的66.7%和67.4%;胸腺指数分别相当于对照组的52.3%和57.1% ③感染组在用新城疫(NDV)疫苗免疫后感染组血清中新城疫抗体效价显著低于对照组鸡(P0.05);严重时,感染组的NDV HI抗体分别相当于对照组HI抗体的78.2%和76.3%。鸡对传染性法氏囊炎病毒(IBDV)弱毒疫苗免疫后的抗体反应与对照组比没有发现明显差异性。这些表明肉鸡早期感染ALV-J除了引起明显的生长抑制以外还会引起肉鸡对新城疫疫苗免疫应答的下降。这是在国内外首次用动物试验证明了ALV-J感染引起的肉鸡的免疫抑制现象。 试验2,研究结果表明,①1日龄肉鸡共感染ALV-J和REV后,可引起明显的生长抑制,ALV-J和REV的共感染所引起的生长抑制比单独ALV-J感染更为严重(P0.05)。在ALV-J单独感染组,在20、30、40和50日龄时其平均体重分别是对照组的93.7%、86%、79.7%和72.6%。而在同样日龄,ALV-J和REV共感染组的平均体重分别只相当于对照组平均体重的78.5%、67.5%、56.5%和54.6%。②法氏囊和胸腺明显萎缩, WP=11 对新城疫病毒(NDV)疫苗抗体反应的抑制比单独感染ALV-J的鸡表现的更为严重;对传染性法氏囊免疫的免疫应答则表现出了应答迟缓。这些表明ALV-J和REV的共同感染往往可以引起更为严重的生长抑制和免疫抑制作用。这也是我们在世界上首次通过人工接种动物试验来探讨两种病毒的在鸡引起的免疫抑制的协同作用。 试验3,试验鸡群饲养至12日龄时,在REV HA9901感染组的鸡群开始出现呼吸道症状,并发现部分鸡排白色粪便,此后,除了对照以外的各组鸡群均开始出现类似症状,14日龄时,REV HA9901感染组试验鸡群突然出现大批死亡(9只),死亡率为18%(9/50),在随后的6天内(至21日龄)感染组试验鸡群,几乎全军覆没,各组死亡率统计结果如下:REV HA9901感染组死亡率为87.8%(43/49);REV SD9901感染组死亡率78.9%(41/52);ALV-J感染组死亡率74%(37/50);REV SD9901和ALV-J混和感染组鸡群死亡率则达到了93.6%(44/47)。然而,接种生
【学位授予单位】:山东农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S858.31

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