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拮抗菌Paenibacillus polymyxa Cp-S316菌株的分离鉴定与活性物质的提取纯化及性质研究

孙长坡  
【摘要】: 从泰山林地土壤中分离获得一株多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa),该菌株对板栗干腐病菌(Diplodia maydis)、茶云纹叶枯病菌(Colletorot richam camelliae)、茶轮斑病菌(Physatospora piricola Nose.)、棉花立枯病菌(Rhizoctomia sola)玉米圆斑病菌(Bipolaris zeicola shoemaker)、辣椒疫病菌(Phyto phthora Casici Leon)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium vasin fectum)、家蚕白僵菌(Beauveria bassiana)、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis var.kurstaki)、白假丝酵母(Candida albicans)和大肠杆菌(E.coli k12)等都有强烈拮抗作用。通过对该菌株进行形态观察、生理生化实验、G+Cmol%测定和16SrRNA碱基序列测定,鉴定该菌株为类芽孢杆菌属中的一株新的多粘类芽孢杆菌,定名为Paenibacillus polymyxa Cp_S316,编码其16SrRNA的基因为一新基因,已经提交Gene Bank注册,注册号为AY292989(2003年6月4日)。 对该菌株发酵条件的研究表明:该菌株用马铃薯葡萄糖液体培养基发酵培养, 28℃,200rpm摇瓶中振荡培养72h可获得高活性的发酵产物,用苏云金芽孢杆菌HD-1做指示菌,将发酵液稀释40倍生测仍可形成明显的抑菌圈。以8000rpm对发酵液离心收集菌体。用蒸馏水对菌体稀释;加入适量吸附树脂在150rpm、28℃下振荡吸附4h, 80%的丙酮解吸,过滤解吸液得到活性物质的澄清溶液,旋转蒸发仪旋转蒸发去处丙酮,经SephadexG-75分子筛层析得单一活性峰 ,收集峰值部分样品液经冷冻干燥得到淡褐色粉末,该活性物质用丙酮充分洗涤、甲醇-乙醚重结晶获得略带微黄的白色粉末,该活性物质50μg/ml仍可对苏云金芽孢杆菌HD-1产生明显的抑制作用。 该菌株产生的活性物质耐高温,121℃加热25min活性基本不丧失;对丙酮、乙醚、氯仿等有机溶剂不敏感。在酸性条件下,活性基本不变,但在强碱条件下没有活性(调回PH值可恢复活性)。


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