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《山东农业大学》 2004年
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适于人工饲料育和BmNPV-Bm表达系统的蚕品种(品系)筛选研究

王冰  
【摘要】:BEVS 是当前基因工程领域开发利用的四大表达系统之一,其中 rBmNPV-Bm 表达系统在我国有着更大的发展优势,但在实用化方面还存在一 些有待解决的问题:首先,利用该表达系统生产医用疫苗和蛋白类药物时,必 须使用无菌蚕,需采用人工饲料无菌饲育;其次,重组病毒致病力弱,一般不 能食下感染,目前只能采取单头微量注射的方法接种病毒,操作烦琐,工效低 下,难以满足大规模生产的要求;第三,外源基因表达量受多种因素的影响, 表达活性有待进一步提高。 解决上述关键问题有多种途径,其中从宿主蚕品种的角度开展研究不失为 一条捷径。为此,本研究以家蚕生物反应器的实用化为目的,以人工饲料养蚕 为基础,主要从三个方面筛选适于作为 BmNPV—Bm 表达系统宿主的蚕品种, 即对人工饲料适应性好、重组病毒食下感染率高、外源基因表达量高的家蚕品 种。主要研究结果如下: 1 调查了 53 个蚕品种对人工饲料的综合适应性,结果表明不同品种的摄 食性和适应性存在极显著差异。在所有供试品种中,以本专业新育成的春×月 (973×974)对人工饲料育的综合适应性最好,而且该品种产茧量高,其他经 济性状优良,是今后推广人工饲料育的较理想的品种。我们培育的广食性品种 杂 A 与明珠的杂交种的综合适应性次之,杂 A 是今后培育人工饲料育广食性品 种的理想基础材料。除此之外,目前生产上推广的菁松×皓月、9405×9406、 皓月 B 等也都是较适于人工饲料育的品种。 2 不同蚕品种对含荧光增白剂 VBL(重组病毒食下感染增效物质)颗粒饲 料的摄食情况存在极显著差异。供试品种中杂 A、月×春(974×973)、9405× 9406、杂 A×明珠、菁松×皓月等品种都对含 VBL 饲料表现出很好的摄食性。 3 不同蚕品种在重组病毒食下感染方面存在极显著差异。对重组病毒食 下感染率高的蚕品种有杂 A、菁松×皓月、9405×9406 和月×春等。 4 重组病毒携带的外源基因在不同蚕品种体内的表达活性有较大差异, 在注射感染的情况下差异极显著。在供试品种中,以杂 A、9405×9406、菁松 ×皓月、月×春和 161.162×136.137 5 个品种外源基因表达量较高。 5 通过对不同蚕品种小蚕期人工饲料育的适应性、全龄人工饲料育的适 应性、对含荧光增白剂饲料的摄食性、对重组病毒的食下感染率以及外源基因 在蚕体内的表达量等性状的多轮筛选,最后确定杂 A、春×月(月×春)、杂 A VI WP=9 ×明珠、9405×9406、菁松×皓月等 5 个品种较适合作为 BmNPV-Bm 表达系统 的宿主。 6 探讨了荧光增白剂 VBL 对外源基因表达活性的影响及其增进感染的作 用机理。结果表明,荧光增白剂 VBL 在一定浓度范围内( 2%)对外源基因的 表达无显著影响。但添食 VBL 对家蚕中肠上皮细胞的超微结构有明显影响,主 要表现在微绒毛分泌机能降低,内质网腔膨胀,粗面内质网减少(附着的核糖 体减少),细胞质出现异常结构,处于损伤(部分细胞器解体)状态。但在停止 添食 VBL 48 h 后,处理区与对照区的中肠上皮细胞结构趋于一致。因此认为, 荧光增白剂 VBL 导致消化系统暂时性结构损伤,功能异常,从而促进了重组病 毒的食下感染。
【学位授予单位】:山东农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S882

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