抗药木霉菌高效生防菌株生物学及其制剂加工技术

【摘要】： 针对目前有关高抗多种化学杀菌剂的木霉(Trichoderma spp)菌研究较少的情况,本论文进行了两方面的研究。第一,以农药生产企业污水生化处理站的活性污泥为材料,利用平板稀释法分离到9株木霉菌株。通过生物测定表明,筛选菌株对生产中常用的化学杀菌剂具有很高的抗药性。明确了9个菌株的抗性生物学特性、抗药性稳定性和遗传特性。第二,研究了抗药性木霉菌株THY7的“开放式”新型发酵工艺、“伴侣式”新型制剂加工工艺以及“分离式”可湿性粉剂加工工艺,并对新制剂与化学杀菌剂联合作用控制番茄灰霉病进行了验证。具体研究结果如下: 1高抗化学杀菌剂生防木霉菌株的筛选及抗药性生物学 1.1抗药性木霉菌株的筛选 以农药生产企业污水处理站活性污泥和污水为材料,利用平板稀释法分离纯化到9株木霉菌株,编号为:THY1~THY9;同时,从山东农业大学科技示范园土壤中分离纯化得到6株木霉,编号为:TAU1~TAU6。 1.2木霉菌株对常用化学杀菌剂抗药性水平测定 采用改进孢子萌发法和生长速率法,测定了12种生产中常用杀菌剂对木霉菌株的毒力。结果表明,9个木霉菌株对测定药剂多菌灵、甲基硫菌灵、乙霉威、三唑酮、福美双、代森锰锌、腐霉利、甲霜灵、霜脲氰、霜霉威等均具有高抗药性。从特殊环境中分离的高抗多种化学杀菌剂的木霉菌株在国内外尚未见报道。 从土壤中分离的6个野生木霉菌株对苯基酰胺类的甲霜灵、氨基甲酸酯类的霜霉威和取代脲类的霜脲氰三类杀菌剂表现出较好的抗药性,EC50值都大于1000mg/L,对其它类别的杀菌剂则非常敏感。证明木霉菌存在自然抗药性现象,野生木霉菌的自然抗药性与菌株的来源无关,主要与杀菌剂的特性有关。这一研究结果对协调木霉菌生物防治和化学防治的关系有一定指导作用。 1.3抗药性木霉菌株的生物学特性 研究结果表明,来源于活性污泥的9个抗药性木霉菌株在孢子萌发、菌丝生长、产孢量、产几丁质酶活力、对病原菌的生防潜力、植物叶片和土壤中定殖能力等方面均表现出良好的特性,优于从土壤中筛选的野生菌株。9个菌株对多种病原菌生防作用显著,为植物病害生物防治和化学防治协同作用提供了理想的生防菌株。