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《山东农业大学》 2006年
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剑尾鱼HSP70家族两成员的分子克隆及溶藻弧菌感染与免疫对其基因的诱导表达

万文菊  
【摘要】: 热应激蛋白(HSPs)是一类存在于所有生物体包括鱼类细胞内比较保守的蛋白,在遇到外界刺激时,能诱导或增强其表达,以保护细胞免受损害。即使在正常无应激情况下,许多HSPs也起着维护细胞正常功能的作用。目前主要根据分子量大小对HSPs进行分类,其中对HSP90、HSP70和低分子量HSPs (16-24 kDa)研究较为广泛。HSP70作为分子伴侣在协助新生多肽链折叠,蛋白质复合体的装配,以及调节、修护和降解变性的蛋白质方面起着重要作用。研究证明一些热应激蛋白可以作为指标测定鱼类的应激状态。鱼体在受到外界环境因子胁迫时,会生成大量的热应激蛋白,这些因素包括工业处理水、重金属离子、亚砷酸盐及寄生虫等环境因子。 作为一类存在于包括鱼类在内的所有生物体细胞比较保守的蛋白,热应激蛋白在免疫学方面的应用价值也正日益受到人们的关注。研究表明,人类的许多疾病与人体内热应激蛋白的表达水平有关。由于热应激蛋白参与了生物的多种免疫应答过程,因此,外界刺激诱导生物机体产生热应激蛋白,能够增强生物对某些破坏性因子的抗性。一些病原体内的热应激蛋白尤其是HSP70家族成员具有很强的免疫原性,是免疫系统的主要靶分子。HSP70在疟原虫、锥体虫、血吸虫、利什曼原虫和分支杆菌的感染中起重要的产生免疫原性的作用。真菌中的结节型组织胞浆菌的一HSP70家族成员是细胞免疫的主要靶子。HSP70是含量最丰富的一大家族HSPs,具有高度保守的序列以及在受到环境胁迫后能够大量表达,因此以热应激蛋白70作为指标来测定鱼类的应激状态,包括感染或免疫状态可能是较为理想的选择。 本研究的目的是以溶藻弧菌为代表病原菌,以标准水生实验动物剑尾鱼(Xiphophorus helleri)为实验对象,在病原菌感染或免疫处理后的不同时间点,分别无菌采取肝脏、心脏、头肾和脾脏组织,从mRNA表达水平上了解剑尾鱼HSP70基因的动态表达水平。在不同时间点,取脾脏淋巴细胞体外培养,检测剑尾鱼淋巴细胞增殖和白细胞介素-2活性。以期找出HSP70基因表达与剑尾鱼病原菌感染与免疫状态的关系。HSP70的基因表达采用半定量RT-PCR方法,淋巴细胞增殖和白细胞介素-2活性采用MTT法。结果表明: 1.弧菌中的一种感染性较强的溶藻弧菌能感染剑尾鱼,半数致死量为2.0×108CFU/g。 2.由于目前并无剑尾鱼HSP70基因序列的相关报道,本文首次得到了剑尾鱼HSP70两个成员基因的部分序列。采用RT-PCR方法扩增了实验动物剑尾鱼(Xiphophorus helleri)纯系RR-B的HSP70家族两个新成员的cDNA片段,并将其克隆到PMD18-T载体中测序,
【学位授予单位】:山东农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S943

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