转反义磷脂酶Dγ基因小麦植株的获得及其农艺性状的鉴定研究

【摘要】： 本研究利用改良的农杆菌介导法将反义PLDγ基因导入普通小麦兰考906-4、山农1521、富硒乌麦、烟农15 ,在卡那霉素筛选的基础上,进行了特异PCR扩增、PCR-Southern杂交检测,结果证明反义PLDγ基因整合到了受体的基因组中;同时对转基因株系与受体在耐盐性、耐旱性、抗寒性、抗白粉病及主要农艺性状上的差异进行研究,主要结果如下: 1.获得转反义PLDγ基因的植株。利用改良的农杆菌介导法将反义PLDγ基因导入小麦受体中,在田间表型及卡那霉素筛选的基础上,经特异PCR扩增,14个转基因株系扩增产物中有430bp大小目的片段,PCR-Southern杂交检测结果与其一致,转化植株为阳性,证明目的基因已经整合到了小麦的基因组中。 2.转基因株系的耐盐性提高。在NaCL浓度为1.4%的培养基上,转基因株系f7-2和f7-4能正常生根发芽,幼苗高分别为1.0 cm和1.81 cm,根长分别为0.5 cm和1.0 cm ,而未转基因植株不能发芽。与叶片相对电导率测定的结果一致。 3.转基因株系P094的耐旱能力增强。与受体兰考906-4相比,转基因株系P094可在甘露醇浓度为475mmol/l的MS培养基上生长,并且其侧生根的数量增加。含有甘露醇的MS固体培养筛选结果和叶片相对电导率测定结果一致。 4.转基因株系的抗寒性比受体品种增强。小麦苗期抗寒性鉴定结果显示,富硒乌麦的转基因植株f7-1、f7-2、f7-3幼苗的冻害程度为2级,而未转基因植株幼苗的冻害程度达到3~4级。 5.田间抗病鉴定结果表明,烟农15的转基因株系TP 8144、TP 8146、TP 8150的白粉病发病率和病情指数均显著降低,属高抗型,而受体烟农15则属感染型。 6.兰考906-4和山农1521转基因后代的农艺性状变异广泛,与其对照的差异显著。兰考906-4转基因株系的变异较大,主要表现在株高、成熟期、旗叶宽、叶色、蜡粉、穗长、小穗数、穗粒数等性状上;而山农1521转基因株系的性状变异则在株高、旗叶长、叶色及蜡粉等上。